Định Lượng Bacillus Cereus Bằng Phương Pháp Đếm Khuẩn Lạc.pptx

Aqua Marketing Plan XIN CHÀO CÁC BẠN NHÓM 8 Định lượng Bacillus cereus bằng phương pháp đếm KL Giảng viên HD Đinh Thị Hải Thuận ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Sinh viên[.]

XIN CHÀO CÁC BẠN

NHÓM 8

Định lượng Bacillus cereus bằng

phương pháp đếm KL

Giảng viên HD: Đinh Thị Hải Thuận

ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM

KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Sinh viên thực hiện: Nhóm: 08

1.Võ Thị Phượng Hằng :2005200651 2.Nguyễn Thị Diễm Hương :2005200172 3.Huỳnh Gia Minh :2005200789

4 Nguyễn Quốc Duy :20052008010 5.Nguyễn Gia Định :2005200456

Nội dung

Định lượng B.cereus bằng

phương pháp đếm KL Tính toán và biễu diễn kết quả

Giới thiệu về Bacillus cereus Phương pháp đếm KL

Giới thiệu về

Bacillus cereus

01

Nguồn thu nhận B cereus từ cơm nguội hoặc cơm chiên,

nấu chín; rau, sữa và thịt

Gây ra ói mửa và tiêu chảy

Phương pháp đếm khuẩn lạc

2.1 Định nghĩa phương pháp

 Phương pháp đếm khuẩn lạc: Vi khuẩn được cấy trên đĩa phát triển hình thành các khuẩn lạc từ một hoặc một số vi khuẩn ban đầu sau đó đếm các khuẩn lạc mọc trên đó

Định lượng B.cereus bằng

phương pháp đếm Kl: 03

Phạm vi áp dụng : được tham chiếu theo

TCVN 4992:2005 (ISO 7932.2004)

Môi trường và hóa chất

Môi trường thạch MYP

( Mannitol-Egg Yolk-

Polymixin)

là môi trường chính cho việc

nuối cấy B.cereus

Thạch huyết cừu thử hồng cầu xác định phản

ứng

Hóa chất phụ : NaCl, HCl Điều chỉnh pH

Thành phần môi trường MYP

Egg Yolk Lòng đỏ trứng có chứa lecithin,lecithin tạo vòng kết tủa

bằng enzyme Bacillus cereus xung quang khuẩn lạc.

Polymyxin B Ức chế sự phát triển vi khuẩn.

Thành phần thạch huyết cừu

Agar Làm chất đông tụ Sản phẩm thủy phân

gan Tạo môi trường kỵ khíPeptone Cung cấp nitơ, vitamin và các yếu tố tăng trưởngNaCl Duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu

Cao nấm men Cung cấp vitamin, tạo điều kiện cho việc nuôi dưỡng các vi sinh vật kỵ khí.

Quy trình thực hiện

Đếm khuẩn lạc và khẳng định

Cấy và ủ Pha loãng mẫu

Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và

các dung dịch pha loãng

Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và

các dung dịch pha loãng

Cấy mỗi đĩa 0.1ml

Ủ 18h -24h ở

Chọn và lọc khuẩn lạc để khẳng định Thử hồng cầu trên thạch huyết cừu.

Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng

Các mẫu thử huyền phù sẽ tuân theo TCVN 6507-1 (ISO 6887-1)

và tiêu chuẩn riêng liên quan tới sản phẩm

Cân chính xác 10g đối với mẫu rắn hoặc đong 10ml đối với mẫu lỏng

Dung dịch pha loãng SPW 90ml ( lấy mỗi ống nghiệm 9ml )

Pha loãng mẫu

Mục đích : thu được

lượng khuẩn lạc thích

hợp cho việc nuôi cấy.

Cách thực hiện : Lấy

1ml huyền phù ban đầu

cho vào ống nghiệm

chứa 9ml SPW.

Ống mẫu

9ml SPW

và 1ml ống mẫu 9ml SPW và 1ml ống pha loãng trước

Cấy và ủ

Ủ trong tủ ấm ở điều kiện 300C trong vòng 18h-24h

Đếm khuẩn lạc và khẳng định

Đếm các khuẩn lạc B.cereus giả định trên mỗi đĩa Các

khuẩn lạc giả định là các khuẩn lạc lớn, màu hồng

Khuẩn lạc sau khi nuôi cấy

Khẳng định sinh hóa

Phép

thử

Kết quả khẳng định Bacillus cereus Cách tiến hànhThạch

MYP

Chúng có màu hồng trên nền đỏ thẫm và có quầng kết tủa bao quanh (phản ứng của lòng đỏ trứng) rộng đến 5 mm.

Kết quả được thể hiện sau khi được nuôi cấy

B.Cereus thành công

Thử

hồng

cầu

Phản ứng dương tính a Khẳng định B.Cereus trên

môi trường thạch huyết cừu bằng phản ứng Haemolysin (ủ trong 30 0 C trong vòng 24h)

a độ rộng của vùng hồng cầu có thể thay đổi

Tính toán và biểu

diễn kết quả

04

Tính toán kết quả.

X = (CFU/g hay CFU/ml)

∑C là tổng số khuẩn lạc trên hai đĩa petri có độ pha loãng liên tiếp

VD

n1,n2 là số hộp petri ở hai độ pha loãng liên tiếp đã chọn.

V là thể tích mẫu được đưa vào mỗi đĩa, đơn vị ml.

d là độ pha loãng tương ứng với n1 (độ pha loãng nhỏ hơn).

R là tỉ lệ khẳng định dương tính

B.Cereus giả định trong 1g/1ml mẫu X được tính theo công thức

Biễu diễn kết quả

 Đối với độ pha loãng môi trường tăng sinh lỏng chọn lọc

đã được cấy, ghi lại số lượng ống nghiệm có mặt Bacillus

cereus giả định đã được khẳng định.

 Chỉ ra rõ các ống này là các ống dương tính

 Chọn những đĩa có từ 15 đến 300 khuẩn lạc của 2 đậm độ pha loãng liên tiếp để tính kết quả Nếu chênh lệch các giá trị ở 2 đậm độ nhỏ hơn hoặc bằng 2 lần

Câu nào đúng, câu nào sai

Làm lại

Đáp án

1 4 B.cereus sinh ra HAI loại độc tố ?

2 5 Hai loại độc tố của B cereus gây ra triệu chúng gì ở người : Mất ngủ, rụng tóc

3 6 Bệnh do B.cereus gây ra còn được gọi là “hội chứng” :HỘI

CHỨNG OCD

4 7 Quy trình thực hiện của phương pháp định lượng Bacillus cereus bằng đếm khuẩn lạc gồm 4 bước? Nêu ra

Làm lại Đáp án

A Trực khuẩn gram dương, có sinh

Câu nào đúng, câu nào sai

Làm lại

Đáp án

1 9 Thành phần của SPW là C Nacl, peptone, nước cất vừa đủ.

2 10 Mục đích của thành phần Nacl : A Duy trì trạng thái cân

13.Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và

các dung dịch pha loãng xem tuân theo tiêu chuẩn nào?

A.TCVN 1651 -2

B.TCVN 2737

C.TCVN 5547

D.TCVN 6507-1

14.Mục đích của môi trường MYP

A.Nuôi cấy B cereus

B.Pha loãng

C.Phục hồi

D.khẳng định

15.Trong quy trình tại sao không cần bước phục hồi?

A.Do thạch máu cừu đã là môi trường

dinh dưỡng cho B cereus

B.Do không kịp thời gian

C.Do thiếu hóa chất

D.Do B.cereus không cần phục hồi

16 Các khuẩn lạc B.cereus giả định có hình dạng màu sắc thế nào?

A khuẩn lạc nhỏ, màu xanh

B khuẩn lạc lớn, màu hồng, được bao quanh bởi một vòng kết tủa

C khuẩn lạc lớn, màu xanh, được bao quanh bởi một vòng kết tủa

D khuẩn lạc nhỏ, màu hồng, không được bao quanh bởi một vòng kết tủa

17 Tại sao phải cần dung dịch SPW vào định lượng Bacillus cereus ?

A.Tránh khuẩn lạc riêng lẻ mọc chồng lên nhau

B Thu được lượng vi khuẩn thích hợp

C Có thể không sử dụng vì không ảnh hưởng đến định lượng

D Cả A và B

Làm lại Đáp án

Chỉnh pH

Tác dụng với polymixin B

Cho vào SPW hỗ trợ việc pha loãng

Là nguyên nhân chính ảnh hưởng đến tăng

trưởng Bacillus cereus

Nhóm 8

18.Tác dụng của NaCl và HCl trong quá trình

19 Trong môi trường MYP chất nào có tác dụng cung cấp các yếu tố tăng

20 Nhìn hình xác định tên vi khuẩn được nuôi cây trong môi trường gì ?

A Salmonella trên môi trường Xylose Lysine Desoxycholate (XLD)

B Staphylococus aureus trên môi trường Parker Agar (BPA)

Bairad-C Sigella trên môi trường Xylose Lysine Desoxycholate (XLD)

D Bacillus cereus trên môi trường Mannitol-Egg Yolk- Polymixin (MYP)

Làm lại Đáp án

Nhóm 8

21.Trong môi trường MYP, Polymyxin B có vai

trò gì ?

22 Thạch huyết cừu được cho vào bước nào để định lượng Bacillus cereus ?

23 Phương pháp đếm khuẩn lạc có thể

áp dụng cho các sản phẩm nào?

A Sản phẩm dùng cho người

B Sản phẩm thức ăn chăn nuôi

C Các mẫu môi trường trong sản xuất và

xử lý thực phẩm

D Cả 3 đáp án trên đều đúng

24 Nếu 4 đĩa của sản phẩm lỏng nguyên chất hoặc đậm độ pha loãng ban đầu có ít hơn 15 khuẩn lạc tính kết quả.

A Kết luận không có Bacillus cereus trong mẫu thực phẩm.

B Lấy giá trị của đậm độ pha loãng thấp hơn để tính kết quả

C Tính kết quả là trung bình cộng của các khuẩn lạc đếm được ở

cả 4 đĩa tính ra cho 1g hoặc 1ml sản phẩm

25 Nếu chênh lệch các giá trị ở 2 đậm

độ lớn hơn 2 lần thì lấy giá trị như thế nào ?

A Kết luận không có Bacillus cereus trong mẫu thực phẩm.

B Lấy giá trị của đậm độ pha loãng thấp hơn để tính kết quả

C Tính kết quả là trung bình cộng của các khuẩn lạc đếm được ở

cả 4 đĩa tính ra cho 1g hoặc 1ml sản phẩm

D Lượng vi khuẩn rất lớn không tính toán được.

Câu nào đúng, câu nào sai

Làm lại

Đáp án

1 26 Nhiệt độ khi cho vào tủ ấm là 30 độ

2 27 Thời gian thích hợp để khuẩn lạc phát triển là 12 giờ

3 28 Đơn vị của số khuẩn lạc giả định trong 1g/1ml là :

KHUẨN LẠC.

4 29 Đối với mẫu lỏng thì cần định lượng bao nhiêu để định lượng Bacillus cereus : 10ml

30 Phương pháp đếm khuẩn lạc có thể

áp dụng cho các sản phẩm nào?

A Sản phẩm dùng cho người

B Sản phẩm thức ăn chăn nuôi

C Các mẫu môi trường trong sản xuất và

xử lý thực phẩm

D Cả 3 đáp án trên đều đúng

NHÓM 8 CẢM

ƠN CÁC BẠN

ĐÃ LẮNG

NGHE