định lượng coliform bằng phương pháp đếm khuẩn lạc

Có thể tồn tại trong :+ Nước nước sinh hoạt, nước uống.Các loại thực phẩm như:+ Thịt: Khi thịt được chế biến, vi khuẩn từ ruột động vật đôi khi có thể xâm nhập vào thịt.+ Sữa và nước t

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG THƯƠNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

ĐỊNH LƯỢNG COLIFORM

BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM GVHD: ĐINH THỊ HẢI THUẬN

SVTH: NHÓM 6

KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

THÀNH VIÊN NHÓM 6

ĐINH THỊ KIM HUỆ

VÕ THỊ NGÂN HUỲNH MẠC LÊ THẢO QUYÊN

NGUYỄN NGỌC BẢO TRÂN ĐOÀN THỊ THU TRINH

NỘI DUNG TÌM HIỂU

1

TỔNG QUAN VỀ

COLIFORM

1.1 Tổng quan về Coliform

 Là loại một vi khuẩn được tìm thấy trong tự nhiên.

 Gram âm, không sinh bào tử, sống hiếu khí hoặc kị khí, có khả năng sinh hơi do lên men lactose ở 37oC trong 24-48 giờ.

 Khái niệm:

 Là vi khuẩn đường ruột thuộc họ Enterobacteriaceae

 Nhiệt độ phát triển: -2  50ºC.

 Nhóm vi khuẩn Coliform chủ yếu bao gồm các giống như Citrobater, Enterobacter, Klebsiella, Eschericha

PHÂN LOẠI:

Có khả năng lên men lactose sinh hơi trong khoảng 24h khi được ủ ở 440C trong môi trường EC.

Coliform phân là Coliform

chịu nhiệt có khả năng sinh Indole khi được ủ khoảng 24h ở 44.50C trong môi trường Trypton.

 Có thể tồn tại trong :

+ Nước (nước sinh hoạt, nước uống).

 Các loại thực phẩm như:

+ Thịt: Khi thịt được chế biến, vi khuẩn từ ruột động vật đôi khi có thể xâm nhập vào thịt.

+ Sữa và nước trái cây chưa qua tiệt trùng

1.2 Nguồn thực phẩm

 Quá trình ủ bệnh thường bắt đầu sau 3 – 4 ngày sau khi tiếp xúc với vi khuẩn.

1.3 Khả năng lây bệnh

 Ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người già và trẻ em.

1.3 Cách phòng ngừa

Phương Pháp Đếm Khuẩn Lạc

2.1 Tổng quan

 Cho phép xác định số lượng tế bào vi sinh vật còn sống trong mẫu  Tế bào sống: là tế bào có khả năng phân chia, sinh sản

 Phân loại: có 2 phương pháp đếm khuẩn lạc.

 Phương pháp cấy trang. Phương pháp đổ đĩa.

2.1 Tổng quan

 Phương pháp cấy trang:

Lưu ý: mặt thạch phải khô

để dịch mẫu dính xuống, không cấy quá 0.1ml lượng chất lỏng dư sẽ làm khuẩn lạc mọc lan khó đếm.

2.1 Tổng quan

 Phương pháp đổ đĩa:

Lưu ý: Cần dùng 1 lượng môi

trường lớn hơn so với cấy trang do mẫu được trộn đều với môi trường thạch nóng chảy, vsv phải chịu được nhiệt độ của thạch nóng chảy (khoảng 45ºC).

2.2 Môi trường và hóa chất

 Các loại môi trường:

 Môi trường rắn chọn lọc thích

hợp ( thạch Violet Red Bile Agar). Môi trường canh Brilliant Green Bile Salt Lactose (BGBL).

Để tiến hành định lượng Coliform ta cần các loại môi trường sau:

2.2 Môi trường và hóa chất

Thành phầnKhối lượng

( Thể tích )Vai trò

Pepton 7g Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật Chiết xuất nấm men 3g Nguồn dinh dưỡng và Vitamin

Natri Clorua 5g Cân bằng áp suất thẩm thấu

Hỗn hợp muối mật 1.5g Gia tăng sự sinh trưởng của vi khuẩn gram ( - ) Lactose 10g Tạo điều kiện thuận lợi cho Coliform phát triển Màu đỏ trung tính 0.03g Giúp nhận biết màu khuẩn lạc Colifform

Pha lê tím 0.002g Giúp nhận biết màu khuẩn lạc Colifform Thạch 15g Làm đông môi trường

Nước cất 1 lít

Môi trường rắn chọn lọc thích hợp ( thạch Violet Red Bile Agar/VRBA)Bảng thành phần

2.2 Môi trường và hóa chất

Thành phầnKhối lượng ( Thể tích )Vai trò

Peptone 10g Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật Bile salts

(muối mật) 20g Gia tang sự sinh trưởng của ki khuẩn gram( - ) Lactose 10g Tạo điều kiện thuận lợi cho Coliform phát triển Brilliant green

(Chất màu xanh

vi tinh thể) 0.0133g

Ngăn chặn sự sinh trưởng của các loại vi khuẩn gram dương và phát hiện vi khuẩn coliform.

Nước cất 1 lít

Môi trường canh Brilliant Green Bile Salt Lactose (BGBL).Bảng thành phần

 Hóa chất:

 Dung dịch dùng để pha loãng mẫu.

 Dung dịch Saline Peptone Water (SPW).

 Thành phần dung dịch pha loãng Saline Peptone Water (SPW):

Thành phầnHàm lượng (g/l)

 Dụng cụ dùng trong quy trình định lượng:

Tủ ủ Đĩa petri, que cấy, đèn cồn Túi dập mẫu Ống nghiệm

Tủ hút Micropipet Bình tam giác Máy đếm lạc khuẩn Cân phân tích

2.3 Phạm vi áp dụng

TCVN 6848:2007

Tiêu chuẩn này đưa ra các hướng dẫn chung về định lượng Colifroms tổng số Tiêu chuẩn này có thể áp dụng cho:

- Thực phẩm và thức ăn chăn nuôi

- Các mẫu môi trường trong khu vực sản xuất và chế biến thực phẩm.

Bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc trên môi trường đặc sau khi ủ ở 30 °C hoặc 37 °C.

Quy Trình Định Lượng

3.3 Các bước tiến hành

Cân 10g/25g (mẫu rắn), 10ml/25ml (mẫu lỏng)

Của mẫu đại diện

Cho dung dịch pha loãng SPW 90ml/225ml

Mẫu và dịch pha loãng

 Bước 1: Lấy mẫu

3.3 Các bước tiến hành

 Bước 4: Đếm khuẩn lạc trên đĩa

• Đếm các đĩa có số khuẩn lạc dưới 150 sau 24 giờ nuôi cấy.

• Tính giá trị trung bình từ các độ pha loãng để qui về số coliform trong 1g mẫu.

ni : số đĩa có số khuẩn lạc được chọn tại mỗi độ pha loãng v : dung tích mẫu (ml) cấy vào mỗi đĩa.

fi : độ pha loãng có khuẩn lạc được chọn tại các đĩa đếm R : tỉ lệ khẳng định.

 

Chờ môi trường đặc , lật ngược, đem ủ 37oC trong 24 – 48 giờ

Ngũ cốc

Thực phẩm được chế biến từ ngũ cốc cho trẻ từ 6 – đến 36 tháng tuổi

Môi trường VRB

4 Kết luận

Kết luận :Vậy mẫu Thực phẩm được chế biến từ ngũ cốc

cho trẻ từ 6 đến 36 tháng tuổi không đạt yêu cầu

 Theo thông tư

Câu hỏi trắc nghiệm

A Trên 0,1ml B 1ml.

C 0,1ml.

D Trên 1ml.

1 Trong phương pháp cấy trang, dịch mẫu cần lấy bao nhiêu là phù hợp?

ⱱ

Câu hỏi trắc nghiệm

A SPW.B BPW.C NaCl.

2 Dung dịch pha loãng được dùng trong định lượng Coliforms là gì?ⱱ

Câu hỏi trắc nghiệm

A Màu hồng.B Màu đỏ tía.C Màu vàng.D Màu xanh.

3 Khuẩn lạc Coliforms đặc trưng trên môi trường VRBA có màu gì?

ⱱ

Câu hỏi trắc nghiệm

Câu hỏi trắc nghiệm

CREDITS: This presentation template was created by Slidesgo, including icons by Flaticon, and infographics &

images by Freepik

Thank you !

Please keep this slide for attribution

Do you have any questions?

3.4 Tính Toán và Phạm vi áp dụng

Công thức A= R N : tổng số khuẩn lạc đếm được.

ni : số đĩa có số khuẩn lạc được chọn tại mỗi độ pha loãng v : dung tích mẫu (ml) cấy vào mỗi đĩa.

fi : độ pha loãng có khuẩn lạc được chọn tại các đĩa đếm R : tỉ lệ khẳng định.

 

3.4 Phạm vi áp dụng

Sản phẩmLoại VSVGiới hạn vi sinh vật (Trong 1g hay 1ml thực phẩm)

c Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật trong nước khoáng và nước giải khát đóng chai Nước giải khát không cồn Coliforms 10

Nước khoáng đóng chai Coliforms Không có d Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật trong dầu mỡ

Quyết định số 46/2007/QĐ BYT

3.4 Phạm vi áp dụng

Sản phẩmLoại VSVGiới hạn vi sinh vật (Trong 1g hay 1ml thực phẩm)

e Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật trong kem và nước đá

Kem, Nước đá Coliforms 102 f Quy định giới hạn cho phép vi sinh vật trong gia vị vsf nước chấm

Nước chấm nguồn gốc động vật Coliforms 102 Nước chấm nguồn gốc thực vật Coliforms 102

Quyết định số 46/2007/QĐ BYT

3.3 Các bước tiến hành

 Dung dịch dùng để pha loãng mẫu: SPW Tỉ lệ dùng để pha loãng mẫu: 1:9

 Tỉ lệ lấy mẫu: Từ 0.5 -> 1.0%

 Thông tin ghi nhãn:

• Tên mẫu.

• Người lấy mẫu • Số lượng mẫu lấy

• Tên và địa chỉ nhà sản xuất.• Địa điểm và thời gian lấy mẫu.