Định Lượng Clostridium Perfingenes Bằng Phương Pháp Đếm Khuẩn Lạc.pptx

ĐỊNH LƯỢNG CLOSTRIDIUM PERFINGENES BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC NHÓM 14 Võ Thị Như Ngọc Thái Thị Thương Nguyễn Ngọc Thanh Tân Nguyễn Ngọc Kiều Anh Trần Trung Đức GVHD ĐINH THỊ HẢI THUẬN 2022, TPHCM[.]

ĐỊNH LƯỢNG CLOSTRIDIUM PERFINGENES BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

NHÓM 14

Võ Thị Như Ngọc Thái Thị Thương Nguyễn Ngọc Thanh Tân Nguyễn Ngọc Kiều Anh Trần Trung Đức

GVHD ĐINH THỊ HẢI THUẬN

2022, TPHCM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TPHCM

KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Tổng quan về Clostridium Perfringenes 01

03 Môi trường cấy và thuốc thử 04Thiết bị và dụng cụ thủy tinh 05

• Trực khuẩn gram (+).

• Hình que, dài 3-8 micron, rộng

0,4-1,2 micron

• Đa số di động và sinh bào tử

• Phát triển ở điều kiện có rất ít

hoặc không có oxy

• Khử sulfit thành sulfua

Tổng quan về Clostridium Perfringenes

Tổng quan về Clostridium Perfringenes

• Các triệu chứng hoại thư sinh khí:

1 Đột ngột khởi phát và đau dữ dội ở vị trí vết thương

2 Màu da khu vực nhiễm bệnh đổi màu (thay đổi từ trắng sang hồng, rồi tím hoặc đỏ)

3 Cảm thấy có khí dưới da

Tổng quan về Clostridium Perfringenes

Phạm vi sử dụng

Môi trường cấy và

thuốc thử

Dung dịch pha loãng mẫu SPW

- Môi trường SPW là môi trường dinh dưỡng tốt để khuẩn lạc phát triển.

- Peptone là chất dinh dưỡng để cho vi khuẩn phát triển tốt.

- Nước muối tạo áp suất thẩm thấu.

Môi trường thạch sulfite cycloserine agar

(SC)

Bảng thành phần môi trường cơ bản

Bảng thành phần dung dịch D-cycloserin

Vai trò: Ức chế các flora ô nhiễm để

thuận lợi cho việc đếm Clostridium perfringens, giảm kích thước của

quầng đen xung quanh khuẩn lạc.

Bảng thành phần môi trường cơ

bản

Bảng thành phần dung dịch Disodium disulfite

Bảng thành phần dung dịch Ammonium iron(III) citrate

Môi trường Lactose sulfite (LS)

Vai trò: Tác nhân khử tạo môi

trường kị khí

Môi trường thioglycolat lỏng

Môi trường Nitrate để thử tính di động

Thuốc thử để phát hiện Nitrite

Bảng thành phần môi trường Nitrate

Môi trường Lactose-gelatine

Bảng thành phần môi trường Lactose-gelatine

Cao thịt Pepton, Gelatin

Cung cấp

protein

Cao nấm men

Vai trò của các thành phần

Thiết bị và dụng cụ thủy tinh

Thiết bị và dụng cụ thủy tinh

Dụng cụ

Bầu cao su Đĩa petri

Bình tam giác, cốc có mỏ, ống

đong, bình cầu Micropipet

Que cấy

Bình lọc

Lấy mẫu

Quy trình phân tích

Bước 1 Chuẩn bị mẫu thử

và huyền phù ban đầu

Bước 2 Pha loãng mẫu

Bước 3 Cấy và ủ mẫu

Bước 4 Đếm và chọn khuẩn lạc để khẳng định

Bước 5 Tính toán kết quả

Các bước tiến hành

Bước 2: Pha loãng mẫu

Dùng pipet vô trùng lấy

mẫu 1ml±5% huyền phù ban

đầu.

Cho vào ống nghiệm chứa

9ml SPW vô trùng.

Trộn bằng máyvortex(5-10s) được 10^-2 lặp lại 10^-3,

10^-4, 10^-5,

Mục đích: để có mật độ VSV phù hợp cho kỹ thuật định

lượng.

Bước 3: Cấy và ủ mẫu

Dùng pipet vô trùng lấy 1ml

mẫu cho vào giữa đĩa petri.

Sử dụng 2 nồng độ pha loãng liên tiếp, mỗi nồng độ 2 đĩa petri.

Rót vào mỗi đĩa 10-15ml môi trường TSC

Bước 4: Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định

Đếm các đĩa có số khuẩn lạc

dưới 150 sau 24 giờ nuôi cấy

Chọn 5 khuẩn lạc C.perfringens điển hình có màu đen trên môi

gelatin.

Kỹ thuật 1 Kỹ thuật 2 Mục đích: xác định được lượng

tế bào có trong mẫu.

Cách tiến hành

Mục đích:

• Thử nghiệm lên men Lactose

• Thử nghiệm sinh Hydrogen Sulfide

(H2S)

Kỹ thuật 1: khẳng định sử dụng môi trường LS (Lactose-

Sulfite)

Kết quả:

Sinh khí (chiếm hơn ¼ ống Durham) + kết

tủa màu đen (sắt Sunfit)

Trong các trường hợp khác, các ống được

coi là âm tính.

Kỹ thuật 1: khẳng định sử dụng môi trường LS (Lactose-

Sulfite)

Kỹ thuật 2: khẳng định sử dụng môi trường nitrate để thử tính di

động và môi trường lactose-gelatine

Mục đích

• Thử nghiệm khử nitrate thành nitrite

• Thử nghiệm lên men Lactose

• Thử nghiệm tính di động

• Thử nghiệm Gelatinase

Kỹ thuật 2: khẳng định sử dụng môi trường nitrate để thử tính

di động và môi trường lactose-gelatine

Kỹ thuật 2: khẳng định sử dụng môi trường nitrate để thử tính

di động và môi trường lactose-gelatine

Kỹ thuật 2: khẳng định sử dụng môi trường nitrate để thử tính

di động và môi trường lactose-gelatine

Kỹ thuật 2: khẳng định sử dụng môi trường nitrate để thử tính

di động và môi trường lactose-gelatine

Ví dụ