Định Lượng Coliform Bằng Phương Pháp Màng Lọc.pptx

PTVSTP Nhóm 12 ĐỀ TÀI Định lượng Coliforms bằng phương pháp màng lọc TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Nhóm 12 GVHD Th S Đinh Thị Hải Thuận SVTH Nhóm 12 Lê Ngọc Minh[.]

Lê Ngọc Minh Nguyệt-2005203035 Đào Quang Thành-2005208242

Trương Mạn Ngọc-2005202086

Nguyễn Ngọc Lượn-2005203035

Ngô Ngọc My-2005201109

Thành viên nhóm

Giới thiệu về Coliforms

Giới thiệu về phương

pháp màng lọc

Định lượng Coliforms bằng phương pháp màng lọc

Kết luận

NỘI DUNG

CHÍNH

• Thuộc họ Enterobacteriaceae

• Trực khuẩn đường ruột

• Gram âm, hình que

• Không sinh bào tử

• Sinh enzyme β-D-galactosidase

• Hiếu khí hoặc kỵ khí tùy nghi

• Âm tính oxidase

1.Giới thiệu về Coliforms

• Dùng để định lượng vi sinh vật chỉ thị trong mẫu nước

• Bản chất: Tập trung số VSV có trong mẫu nước trên

màng lọc khuẩn và định lượng -> số khuẩn lạc đếm được -> đặt màng lọc lên một môi trường thạch có thành phần dinh dưỡng phù hợp

2.Giới thiệu về phương pháp màng

lọc

3.Định lượng Coliforms bằng phương pháp màng lọc

3.1.Phạm vi áp

dụng

• Được quy định theo TCVN 6187-1:2019 (ISO

9308-1:2014)

• Phương pháp này sử dụng kỹ thuật lọc màng ->

nuôi cấy trên thạch Coliform sinh màu -> tính toán

số lượng vi khuẩn Coliform có trong mẫu nước

3.2 Nguyên tắc

3.3 Môi trường và hóa chất

Thành phần

Môi trường

 ChromocultColiform Agar (CCA)

• Casein, Chiết xuất nấm men, Sorbitol, Natri pyruvate:

Các thành phần cung cấp C,N

• NaHPO4.2H2O, Na2HPO4: Đóng vai trò là chất đệm

• NaCl: Duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu cho môi

trường

• Tryptophan: Cải thiện phản ứng Indol

Vai trò từng thành phần

• Tergitol-7: Làm ức chế vi khuẩn gram (+) và một số vi

khuẩn gram (-)

• Salmon-β-D-galactoside, X-β-D-glucuronic: Các sắc tố

để phân biệt E.coli & Coliforms

• IPTG: Tăng cường enzyme

• Agar: tạo thạch cho môi trường

• Nước: hòa tan các thành phần trong môi trường

3.4.Qui trình

• B1: Chuẩn bị mẫu và các thiết bị, dụng cụ

• B2: Pha môi trường CCA:

• Cách 1: pha các thành phần cần thiết vào nước rồi đun

cách thủy cho đến khi các thành phần tan hết pH ở

khoảng 6,8 ± 0,2, ổn định môi trường ở nhiệt độ khoảng 25°

• KHÔNG ĐƯỢC HẤP KHỬ TRÙNG VÀ KHÔNG ĐUN QUÁ

NHIỆT

Cách 2: Dùng bột CCA đã được phối trộn sẵn

-Lấy một lượng 30,92 gam hòa chung với 1000ml nước cất;

-Đun sôi cho đến khi môi trường vi sinh được hòa tan hoàn toàn;

-Làm mát môi trường cho đến khi đạt 45-50 °C;

-Sau đó, trộn đều và đổ vào đĩa Petri vô trùng theo ý muốn.

• B3: Hấp khử trùng các thiết bị lọc màng

• B4: Lọc

• Lọc 100 ml mẫu (hoặc thể tích lớn hơn, ví dụ 250 ml cho nước

đóng chai màng lọc)

Đặt cái lọc lên trên môi trường thạch tương ứng, đảm bảo

không có không khí ở phía dưới.

B5: Ủ và phát hiện

- Ủ 35°C trong 18-24h

Do Coliform phản ứng với β-D-galactosidase tạo thành

6-Chloro-3-indoxyl- β-D-galactopyranoside khiến khuẩn lạc có

màu từ hồng đến đỏ

=> Màu hồng, đỏ là Coliform giả định

=>

Thuốc thử Oxydase

(-) Coliforms

(+) không

phải Coliforms

3.5 TÍNH TOÁN VÀ BIỂU THỊ KẾT QUẢ

Cs: giá trị ước lượng các CFU trong thể tích chuẩn sử dụng Vs của mẫu

Z: tổng số các khuẩn lạc đếm trên đĩa hoặc trên màng từ các độ pha loãng d1, d2, …, di

Vs: thể tích chuẩn được chọn để biểu thị nồng độ của vi sinh vật có trong mẫu

Vtot: thể tích tổng tính được của các mẫu ban đầu bao gồm các đĩa được đếm

Trong đó:

Z: Số khuẩn lạc trên màng

k: Số khuản lạc cho kết quả âm tính

n: Số khuẩn lạc được chọn để khẳng định a: Tổng số khuẩn lạc giả định

Chọn 10 khuẩn lạc giả định để tiến hành khẳng định

Nhận thấy có 7 khuẩn lạc âm tính oxidase

VD:

Coliform là một trong những chỉ tiêu quan trọng đối với các

lượng vi khuẩn Vì vậy không thể

thiếu phương pháp phát hiện

nhanh, có độ tin cậy, độ nhạy đòi

hỏi những thiết bị, vật liệu đặc biệt

Kỹ thuật màng lọc là kỹ thuật

thích hợp nhất.

Kết luận

CẢM ƠN CÁC BẠN ĐÃ LẮNG

NGHE

1.Môi trường TSA tên đầy đủ là gì?

A.Trysptone Soya Agar

B.Tryptone Soyas Agar

C.Tryptone Soya Agar

D.Tryptone Soya Agars

Đáp án: C

2 Kích thước lỗ lọc của màng lọc thường là:

A 0,30μm hay 0,25μmm hay 0,25μmμm hay 0,25μmm

B 0,25μmμm hay 0,25μmm hay 0,45μmμm hay 0,25μmm

C 0,47μm hay 0,22μmμm hay 0,25μmm hay 0,22μm hay 0,25μmm

D 0,45μmμm hay 0,25μmm hay 0,20μm hay 0,25μmm

Đáp án: C

CÂU HỎI CỦNG CỐ

3.Khi định lượng Coliform bằng phương pháp màn lọc thì khuẩn lạc coliform giả định xuất hiện màu gì?

A.Màu xanh dương

5 Vai trò của Tergitol-7 trong thành phần CCA là:

A Cung cấp C và N

B Là chất đệm

C Ức chế vi khuẩn Gram (+) và một số vi khuẩn Gram (-)

D Hòa tan các thành phần trong

7 Mục đích của thuốc thử oxidase là gì?

A Nuôi cấy coliforms

B Chỉnh pH môi trường

C Kiểm tra hiệu năng của CCA

D Khẳng định coliforms

8 Những loại nào là thành phần của môi trường CCA?

A Pancreatic Digest of Casein, Soy peptone, Sorbitol, Tergitol-7

B.Sorbitol, Tergitol-7, Isopropyl- β-D-thiogalactopyranoide (IPTG)

C.Sodium Chloride, Agar, Isopropyl- β-D-thiogalactopyranoide (IPTG) D.Sorbitol, Tergitol-7, Peptic digest of animal tissue, Dextrose

Đáp án: D

Đáp án B

9 Môi trường TSA tên đầy đủ là gì?

A Trysptone Soya Agar

B Tryptone Soyas Agar

C Tryptone Soya Agar

D Tryptone Soya Agars

10 Khi pha môi trường CCA cần lưu ý điều gì?

A Làm mát môi trường cho đến khi đạt 45-50 °C

B Đun sôi cho đến khi môi trường vi sinh được hòa tan hoàn toàn

C Không được hấp khử trùng và không đun quá nhiệt

D Đun cách thủy cho đến khi các thành phần tan hết

Đáp án C

Đáp án C

11 Làm sao để nhận biết coliform khi cho coliform giả định tác dụng

với thuốc thử Oxydase?

A Màu xanh xuất hiện là dương tính có coliform

B Màu xanh xuất hiện là âm tính không có coliform

C Không màu là âm tính có coliform

D Không màu là dương tính không có coliform

12 Vai trò của Bromothymol xanh là gì?

A.Cung cấp các thành phần dinh dưỡng

B.Ức chế hầu hết các vi khuẩn gram dương

C.Tạo khuôn

D.Là một chỉ thị thể hiển độ pH và tạo màu

Đáp án C

Đáp án D

13 Nếu không sử dụng que thử oxidase thương mại thì :

A Phép thử Oxydase không được thực hiện

B Phép thử Oxydase được thực hiện nhưng không hiệu quả

C Phép thử Oxy dase được thực hiện bằng cách nhỏ hai đến ba giọt thuốc thử oxidase lên

giấy lọc sau đó sử dụng que cấy vòng bằng nhựa hoặc platin để thực hiện

D Tất cả các đáp án đều sai

14 Nếu có nhiều khuẩn lạc phát triển trên màng lọc :

A.Phép thử oxidase không được thực hiện với các chủng cấy thuần

B.Có thể cấy truyền tiếp để chắc chắn rằng phép thử oxidase được thực hiện với các chủng cấy thuần

C.Đáp án A và B đều sai

D.Đáp án A và B đều đúng

Đáp án D

Đáp án D

15 Nếu sau khẳng định, không có khuẩn lạc nghiệm đúng thì kết quả nhận được là :

A Nhỏ hơn 1/Vtot (CFU /Vs mL)

B Lớn hơn 1/Vtot (CFU /Vs mL)

17 Bromothymol xanh có vai trò gì?

A Ức chế vi khuẩn Gram (+) và một số vi khuẩn Gram (-)

B Cung cấp C và N

C Chỉ thị thể hiện độ pH và màu

D a và b đều đúng

18 Đối với thử nghiệm oxidase thì âm tính oxidase sẽ có xuất hiện màu gì?

A.Xuất hiện màu xanh đậm

B.Không xuất hiện màu xanh đậm

C.Xuất hiện màu hồng

D.Không xuất hiện màu hồng

Đáp án C

Đáp án B

19 Tổng số khuẩn lạc trên màng lọc trong một đơn vị thể tích mẫu lọc sẽ được tính thức công thức nào ?

A.Cs =

B.Cs =

C.Cs =

D.Cs =

20 Coliform có khả năng sinh acid, sinh hơi do lên men lactose ở nhiệt độ

và thời gian thế nào?

21 Trong trường hợp nào thì sử dụng phương pháp màng lọc?

A.Phân tích mật độ vi khuẩn trong một thể tích lớn

B.Phân tích mật độ vi sinh trong một thể tích nhỏ

C.Phân tích mật độ vinh sinh trong điều kiện môi trường nước

D.a và b đều đúng

22 Phản ứng indol là một phản ứng dùng để làm gì?

A.Xác định khả năng sinh hóa tổng hợp

B.Xác định khả năng sinh indol từ tryptophan

C.a và b đều đúng

D.a và b đều sai

Đáp án A

Đáp án D

23 Để khẳng định vi khuẩn coliform giả định nhưng không phải E Coli thì dùng phép thử nào?

27 Vai trò của Peptone, Canh thịt và cao nấm mem là gì?

A.Cung cấp các thành phần dinh dưỡng như: nitơ, các hợp chất cacbon, vitamin và proteinB.Cung cấp các thành phần dinh dưỡng như: nitơ, các hợp chất cacbon, vitamin và axit aminC.Cung cấp các thành phần dinh dưỡng như: nitơ, các hợp chất cacbon, vitamin và photphoD.Cung cấp các thành phần dinh dưỡng như: nitơ, các hợp chất cacbon, photpho và protein

28 Tên của thành phần Tergitol 7 nào sau đây là đúng?

A.Sodium heptadecyl sulfat

B.Sodium heptadecyl sulfua

C.Sodium heptadexyl sulfat

D.Sodium heptadexyl sulfua

Đáp án B

Đáp án A

29 Có bao nhiêu thành phần hóa chất trong môi trường Lactose TTC Agar?