xây dựng quy trình kỸ thuật để định lượng tobramycin bằng phương pháp HPLC

- - ÁN T T NGHI P tài: “Xây d ng quy trình k thu t nh lư ng tobramycin b ng phương pháp HPLC.” -3- M CL C PH N 1: T NG QUAN - 1.1 T NG QUAN V TOBRAMYCIN - 1.1.1 Công th c c u t o - 1.1.2 Tính ch t lý hóa - 1.1.3 Ngu n g c - 1.1.4 Dư c ng h c - 1.1.5 Tác d ng ch tác d ng - 1.1.6 Ch nh - 1.1.7 Ch ng ch nh - 1.1.8 D ng bào ch li u lư ng - 1.2 M T S PH NG PHÁP NH L NG TOBRAMYCIN - 1.2.1 nh lư ng tobramycin b ng phương pháp vi sinh - 1.2.1.1 Ph ng pháp [15] .- 1.2.1.2 Ph ng pháp [3] .- 10 1.2.1.3 Ph ng pháp 3:[14], [20] - 10 1.2.2 nh lư ng tobramycin b ng phương pháp o quang ph h p th UV-VIS - 11 1.2.2.1 Ph ng pháp 1: [4] - 11 1.2.2.2 Ph ng pháp 2: [19] - 11 1.2.3 nh lư ng tobramycin b ng phương pháp HPLC .- 12 1.2.2.1 Ph ng pháp [14] - 12 1.2.2.2 Ph ng pháp [20], [23] - 12 1.2.2.3 Ph ng pháp [15] - 13 1.2.2.4 Ph ng pháp [16] .- 13 1.2.2.5 Ph ng pháp [15] - 14 1.2.2.6 Ph ng pháp [5] .- 14 1.2.2.7 Ph ng pháp [9] .- 15 1.3 T NG QUAN V PH NG PHÁP S C KÍ L!NG HI U N"NG CAO (HPLC) - 16 1.3.1 Nguyên t#c - 16 1.3.2 Cơ s$ lý thuy t - 17 1.3.3 Nguyên t#c c u t o h% th ng HPLC - 17 1.3.3.1 H th ng b m - 17 1.3.3.2 Bình ch a dung môi h th ng x lý dung môi - 17 1.3.3.3 H tiêm m u - 17 1.3.3.4 C t s c ký l ng HPLC - 18 1.3.3.5 Detector HPLC - 18 1.3.3.6 Thi t b hi n th k t qu .- 18 - -4- 1.3.4 Các thông s &c trưng c'a trình s#c ký - 19 1.3.5 Cơ s$ lý thuy t c'a vi%c l(a ch n i u ki%n s#c ký .- 21 1.3.5.1 L a ch n c t (pha t nh) [12], [18] .- 21 1.3.5.2 L a ch n pha ng cho HPLC [12], [18] - 22 1.3.5.3 Ch n m pH .- 23 1.3.5.4 T c dòng - 23 1.3.6 Cách ánh giá pic - 23 1.3.7 )ng d ng c'a HPLC - 24 1.3.7.1 nh tính th tinh t: .- 24 1.3.7.2 S c ký i u ch : - 24 1.3.7.1 nh l ng: - 24 PH N 2: TH*C NGHI M VÀ K+T QU, - 26 2.1 NGUYÊN V-T LI U VÀ PH NG PHÁP TH*C NGHI M - 26 2.1.1 Nguyên v.t li%u : - 26 2.1.1.1 Nguyên li u hoá ch t: .- 26 2.1.1.2 D ng c : - 26 2.1.2 N i dung phương pháp nghiên c u - 26 2.1.2.1 Phương pháp nghiên c u .- 26 2.1.2.2 N i dung nghiên c u - 27 2.2 TH*C NGHI M VÀ K+T QU, - 28 2.2.1 Xây d(ng quy trình k/ thu.t nh lư ng tobramycin b ng phương pháp HPLC .- 28 2.2.1.1 Nguyên t#c l(a ch n i u ki%n s#c ký .- 28 2.2.1.2 Kh1o sát l(a ch n i u ki%n s#c kí: - 28 a Kh o sát ch n bư c sóng thích h p - 28 Hình 1: Ph h p th c a dung d ch tobramycin 0,02% .- 29 b L a ch n c t: - 29 c L a ch n m: - 29 d L a ch n pha ng: - 30 e L a ch n t c dòng - 30 i u ki n s c ký l a ch n - 31 2.2.2 Qui trình nh lư ng - 31 2.2.2.1 Kh o sát tính thích h p c a h th ng - 32 2.2.2.2 Xây d ng phương pháp nh lư ng .- 32 2.2.2.3 i u ki n s c ký - 33 2.2.2.4 Tính k t qu - 33 2.2.3 nh lư ng tobramycin nguyên li%u b ng phương pháp m2i xây d(ng - 34 2.2.4 ánh giá phương pháp nh lư ng - 35 2.2.4.1 Tính n tính - 35 - -5- 2.2.4.2 Tính xác - 37 2.2.4.3 Tính úng - 37 B ng 6: K t qu ánh giá tính úng c a ph ng pháp - 38 2.2.4.4 Tính &c hi%u .- 39 2.3 BÀN LU-N VÀ K+T QU, - 40 K+T LU-N VÀ XU3T - 43 3.1 K+T LU-N .- 43 3.2 XU3T - 43 - -6- PH N 1: T NG QUAN 1.1 T NG QUAN V TOBRAMYCIN 1.1.1 Công th c c u t o C18H37N5O9 PTL: 467.5 Tên khoa h c: 4-O-(3-Amino-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-2-deoxy-6-O-(2,6- diamino-2,3,6-trideoxy-α-D-ribo-hexopyranosyl)-L-streptamine [21] 1.1.2 Tính ch t lý hóa B t màu tr ng ho c tr ng ngà D tan nư c, r t khó tan ethanol, th c t khơng tan cloroform ether Góc quay c c riêng [α]D20 : +1380 n +1480[7] 1.1.3 Ngu n g c Chi t xu t t môi trư ng ni c y Streptomyces tenebrarius, có th bán t ng h p t kanamycin B [7] 1.1.4 Dư c ng h c Tobramycin h u không h p thu qua ng tiêu hoá h p thu t t qua ng tiêm b p, tiêm t nh m ch Thu c liên k t v i protein huy t -7- tương Do phân t! phân c c m nh nên khó i vào mơ k c não Thu c t n"ng cao v# th n Khi s! d ng cho ph n$ mang thai, thu c tích l%y thai gây c cho c m& Tobramycin th i ch y u qua th n nên ph i gi m li u suy th n, thư ng d a vào creatinin huy t c tính Hi n nay, tobramycin c dùng v i ch tránh nh t ngày Cách dùng cho th y hi u qu m t li u cao i u tr cao c tính so v i dùng li u nh# nhi u l n ngày trư c ây i v i ca n ng (nhi m Pseu aeruginosa ' ngư i gi m neutrophile ca suy th n) c n kho ng cách li u dài 24 gi Th i gian bán th i c a tobramycin: - gi [6] 1.1.5 Tác d ng ch tác d ng Tobramycin m t kháng sinh nhóm aminoglycosid có tác d ng nhi u vi khu(n Gr (-) hi u khí m t s vi khu(n Gr (+) hi u khí Thu c khơng có tác d ng v i Chlamydia, n m, virus a s vi khu(n y m khí Tobramycin r t gi ng gentamycin v tính ch t sinh h c chúng có n!a i th i tr , n"ng c tính: )nh huy t thanh, liên k t v i protein, th tích phân b s ti t ch y u qua l c ' c u th n i m quan tr ng nh t c a tobramycin có ho t tính i v i ph n l n ch ng Pseudomonas aeruginose, m nh c gentamycin Cơ ch tác d ng: Tobramycin c ch s t ng h p protein ' vi khu(n nh y c m b ng cách g n không thu n ngh ch v i ti u phân 30S c a ribosom [2], [11] 1.1.6 Ch nh c ch) nh b nh nhi m khu(n n ng e d a t i tính m ng, c bi t v i b nh mà nguyên nhân chưa rõ ràng ho c b nhi m khu(n huy t vi khu(n Gr (-) -8- Trong i u tr b nh nhi m khu(n n ng, ho c b nh nhi m khu(n n ng toàn thân Pseudomonas sp gây ra, tobramycin có th dùng ph i h p v i m t kháng sinh nhóm beta-lactam Trong b nh viêm n i tâm m c Streptococcus faecalis ho c alpha Streptococcus gây ra, có th dùng tobramycin ph i h p v i ampicilin ho c benzylpenicilin ph i tiêm riêng r* [2] 1.1.7 Ch ng ch nh Ngư i có ti n s! d ng v i kháng sinh lo i aminoglycosid, ngư i nghe ngư i có b nh th n [2] 1.1.8 D ng bào ch li u lư ng Tobramycin sulphat: Dung d ch tiêm b p, tiêm t nh m ch 40 mg/ml (ngư i l n), 10 mg/ml (tr+ em) B t pha tiêm 30 - 40 mg/l L ml 0,3 % nh# m t Tuýp 3,5 g m, tra m t 0,3 % D ng thu c hít qua ng mi ng b ng máy dùng i u tr nhi m P aeruginosa ng hô h p ' b nh nhân b xơ nang hóa [11] 1.2 M T S 1.2.1 PH NG PHÁP NH L NG TOBRAMYCIN nh lư ng tobramycin b ng phương pháp vi sinh 1.2.1.1 Ph ng pháp [15] - Ch ng vi khu(n: Bacillus subtilis CMCC(B)63501 - Dung d ch m phosphat pH 7,8 ± 0,1 Dikali hydrophosphat : 5,59 g Kali dihydrophosphat : 0,41 g - Môi trư ng nh lư ng: Pepton : 5,0 g Cao th t : 3,0 g Dikali hydrophosphat : 3,0 g Th ch : 15,0 - 20,0 g -9- Nư c c t : 1000 ml pH sau ti t trùng : 7,8 ± 0,2 - Chu(n b dung d ch chu(n th! sau ó ti n hành th! tính k t qu theo [15] 1.2.1.2 Ph ng pháp [3] - Ch ng vi khu(n: Bacillus pumilus NCTC 8241 - Dung d ch m phosphat pH 8,0 ± 0,1 Dikali hydrophosphat : 16,75 g Kali dihydrophosphat : 0,523g - Môi trư ng nh lư ng: Cao men bia : 3,0 g Pepton : 6,0 g Casein pancreatic : 4,0 g Glucose : 1,0 g Cao th t : 1,5 g Th ch : 15,0 g Nư c c t : 100 ml pH sau ti t trùng : 8,2 ± 0,2 - Chu(n b dung d ch chu(n th! Cân xác kho ng 25,0 mg tobramycin hịa tan dung d ch m phosphat pH 8,0 có n"ng tobramycin xác kho ng 10 IU/ml; 20 IU/ml 40 IU/ml - Ti n hành th! tính tốn k t qu theo phương pháp ho t l c kháng sinh - D VN III 1.2.1.3 Ph - Xác ng pháp 3:[14], [20] nh ho t l c kháng sinh c a tobramycin b ng phương pháp vi sinh v t theo BP 2000 hay JP14 - 10 - - Ch ng vi khu(n : Bacillus subtilis ATCC 6633 - Môi trư ng nuôi c y : Môi trư ng c - Dung d ch chu(n Cân xác m t lư ng tobramycin chu(n, tương ương kho ng 25 mg (hi u l c), hoà tan dung d ch m phosphat 0,1 mol/l, pH thành xác 25 ml ó dung d ch chu(n g c Gi$ dung d ch chu(n g c ' nhi t t 5οC n 15οC s! d ng vịng 30 ngày Pha lỗng dung d ch b ng dung d ch chu(n d ch có n"ng m phosphat 0,1M, pH c dung 8µg/ml 2µg/ml (theo hi u l c) - Dung dich th!: Cân xác m t lư ng tobramycin, tương ương kho ng 25 mg (hi u l c), hoà tan dung d ch m phosphat 0,1 mol/l, pH thành xác 25ml Pha lỗng dung d ch b ng dung d ch chu(n c dung d ch có n"ng pH 1.2.2 m phosphat 0,1M, 8µg/ml 2µg/ml (theo hi u l c) nh lư ng tobramycin b ng phương pháp o quang ph h p th UV-VIS 1.2.2.1 Ph ng pháp 1: [4] Cân m t lư ng tobramycin sulfat tương ng v i kho ng 0,3 g tobramycin nguyên li u , cho vào bình nh m c có dung tích 100 ml, b sung nư c c t l n v a u L y ml dung d ch cho vào bình n v ch, tr n nh m c có dung tích 20 ml, thêm ml dung d ch NaOH 0,01N, ml dung d ch KMnO4 Dung d ch v a pha em un cách thu- ' 400C 60 phút Song song ti n hành i u ch dung d ch chu(n b ng cách dùng ch t i chi u tobramycin M.u tr ng ti n hành m.u th! khơng có tobramycin Sau un cách thu- ' 400C, th i gian 60 phút, em o m t c a dung d ch ' bư c sóng 425 nm, cuvet dày 1cm 1.2.2.2 Ph ng pháp 2: [19] - 11 - quang D a s' t o s n ph(m m u xanh v i 3-methyl-2 benzothiazolinon hydrazon hydrochlorid FeCl3 S n ph(m có l n nh t ' 645 nm h p th nh lu t Lambert-Beer c áp d ng kho ng n"ng t 50-500 mUI/ml 1.2.3 nh lư ng tobramycin b ng phương pháp HPLC 1.2.2.1 Ph ng pháp [14] - C t styren - divinylbenzen copolymer (4,6 x 250 mm, 8µm) - Nhi t c t: 55 0C ng: H/n h p pha 1l nư c ã lo i CO2 g"m: 52 g natri - Pha sulfat khan; 1,5 g natri octansulfonat; ml tetrahydrofuran 50 ml dung d ch kali dihydrophosphat 0,2 M ã c ch)nh pH v 3,0 b ng acid phosphoric -T c dòng: ml/phút - Dung d ch thêm vào sau c t: Dung d ch natri hydroxyd 2% pha nư c ã lo i CO2 T c 0,3 ml/phút - Detector: Detector ampe k ho c thi t b tương t - Th tích tiêm: 20 µl - N"ng 1.2.2.2 Ph dung d ch chu(n th!: 0,1 mg/ml ng pháp [20], [23] - C t RP 18 (3,9 mm x 30 cm) - Pha ng: Hòa tan 2,0 g tris (hydroxymethyl) aminomethan kho ng 800 ml nư c, thêm vào dung d ch 20 ml dung d ch acid sulfuric 1N, sau ó pha loãng b ng acetonitril t i 2000 ml, l c u - Thu c th! 2,4-dinitrofluorobenzen: Dung d ch 2,4dinitrofluorobenzen 1% ethanol 96% -T c dòng: 1,2 ml/phút - Detector UV: 365 nm - 12 - Khi pH gi m, h s b t i gi m, pic tobramycin tách t t cân x ng Tuy nhiên, d th y h s b t i c a pic tobramycin t i pH 3,0 pH 2,5 khác bi t khơng k Trong ó, n u s! d ng t i pH 2,5 s* làm gi m tu i th c a c t ó chúng tơi ã l a ch n m phosphat 0,01 M, pH 3,0 kh o sát ti p d L a ch n pha ng: ch n c h pha ng phù h p ã ti n hành kh o sát i u ki n s c kí: T c dịng 1,0 ml/phút, n"ng tobramycin 3,0 mg/ml, th tích tiêm 20µl h pha ph n g"m acetonitril dõi s thay ch t chu(n ng v i thành m phosphat pH 3,0 v i t) l khác Theo ih s b t i c a pic tobramycin, k t qu thu c ghi ' b ng 1: B ng 1: Giá tr h s b t i c a pic tobramycin kh o sát l a ch n pha Acetonitril ng m pH 3,0 H s b t 20 80 2,43 10 90 2,02 95 1,75 100 1,52 i Nh n xét: V i pha ng 100% cân x ng, h s b t m phosphat 0,01 M pH 3,0 cho pic g n, i th p nh t K t lu n: Pha ng c ch n nghiên c u m phosphat 0,01 M pH 3,0 e L a ch n t c dòng - 30 - nh lư ng tobramycin 100% Ti n hành s c kí v i i u ki n ã ch n v i t c dòng thay i 1,0 ml/phút; 0,8 ml/phút: 0,6 ml/phút K t qu sau:  V it c dòng 0,6 ml/phút th i gian lưu c a tobramycin 2,95 V it c dòng 0,8 ml/phút th i gian lưu c a tobramycin 2,32 V it c dòng 1,0 ml/phút th i gian lưu c a tobramycin 1,86 phút  phút  phút Nh n xét: V it c dòng 1,0 ml/phút th i gian lưu ng n nên ch t c n tách b r!a gi i ' th i gian g n v i th i gian ch t, tách khơng t t V it c dịng 0,8 ml/phút pic c a tobramycin pic t p b ch"ng ph m t ph n, hi u l c tách V i t c dòng 0,6 ml/phút k t qu tách t t, pic cân i, th i gian phân tích tR= 2,95 phút th i gian ch y s c ký phù h p K t lu n: Ch n t c dòng 0,6 ml/phút nghiên c u nh lư ng tobramycin i u ki n s c ký l a ch n T k t qu kh o sát, ã xây d ng m t quy trình s c kí có kh n1ng phân tích t t tobramycin ngun li u sau: - C t Nucleosil C18 (250x4,6 mm, 5µm) - Pha - T c - Th tích tiêm: 30 µl - Detector UV: Bư c sóng o 195 nm - Nhi t 2.2.2 Qui trình ng: m phosphat 0,01M pH dịng: 0,6 ml/phút phân tích: Nhi t nh lư ng - 31 - phòng 2.2.2.1 Kh o sát tính thích h p c a h th ng Cân xác kho ng 30,0 mg tobramycin i chi u cho vào bình m c 10,0ml Hồ tan pha loãng b ng nư c v a n v ch, l c nh u L c qua màng l c 0,45 µm, dùng d ch l c tiêm s c ký Tiêm l n m.u i chi u vào h th ng HPLC, ti n hành s c ký theo i u ki n ã ch n ' Ghi k t qu : th i gian lưu, di n tích h s b t i c a pic tobramycin K t qu kh o sát tính thích h p c a h th ng s c ký c trình bày b ng B ng 2: K t qu kh o sát tính thích h p c a h th ng STT Pic c a tobramycin Th i gian lưu (phút) Di n tích pic (mAU) H s b t 2,94 12,2985 1,52 2,95 12,3001 1,53 2,96 12,2805 1,51 2,96 12,2230 1,52 2,96 12,1916 1,52 RSD(%) 0,30 0,40 i (AF) Nh n xét: K t qu kh o sát tính thích h p c a h th ng HPLC cho th y:  l ch chu(n tương i (RSD %) c a th i gian lưu di n tích pic phép th! 0,30 0,40  Các giá tr c a h s b t i giao u nh# 2% ng t 1,51 n 1,53 K t lu n: H th ng HPLC mà chúng tơi s! d ng thích h p tobramycin nguyên li u 2.2.2.2 Xây d ng phương pháp nh lư ng - 32 - nh lư ng a Dung d ch th! Cân xác kho ng 30,0 mg tobramycin nguyên li u cho vào bình nh m c 10,0 ml Hồ tan pha lỗng b ng nư c v a n v ch, l c u L c qua màng l c 0,45 µm b Dung d ch chu(n ( i chi u) Cân xác kho ng 30,0 mg tobramycin i chi u, cho vào bình nh m c 10,0 ml Hồ tan pha loãng b ng nư c v a n v ch, l c u L c qua màng l c 0,45 µm c M.u tr ng: Nư c c t l n, l c qua màng l c 0,45 µm, siêu âm u i khí 15 phút d Pha ng: Dung d ch m phosphat 0,01 M, pH 3,0 Cách pha: Hoà tan 0,68g KH2PO4 nư c pha loãng b ng nư c v a 500 ml i u ch)nh v pH 3,0 b ng H3PO4 c L c qua màng l c 0,45µm, siêu âm u i khí 15 phút 2.2.2.3 i u ki n s c ký - C t Nucleosil C18 (250 x 4,6 mm; 5µm) - Pha - T c ng: m phosphat 0,01 M pH 3,0 dòng: 0,6 ml/phút - Th tích tiêm: 30 µl - Detector UV 195 nm - Nhi t phân tích: Nhi t phịng 2.2.2.4 Tính k t qu Ghi di n tích pic thu c s c ký " c a m.u chu(n m.u th! tương ng Tính hàm lư ng % tobramycin có m.u th! theo cơng th c sau: - 33 - A ×m ×P A ×m %X = Trong ó: t c c t At, Ac di n tích pic tương ng c a m.u th! m.u chu(n mt, mc lư ng cân tương ng c a m.u th! m.u chu(n (mg) P hàm lư ng % ghi nhãn c a tobramycin chu(n 2.2.3 nh lư ng tobramycin nguyên li%u b ng phương pháp m2i xây d(ng Chu(n b cho h th ng HPLC ch y n nh v i pha ng 30 phút Tiêm l n lư t 30 µl m/i dung d ch ã chu(n b vào h th ng s c ký Ti n hành nh lư ng m.u th! m.u chu(n tobramycin theo i u ki n ã ch n Ghi giá tr di n tích pic thu c s c ký " c a m.u chu(n m.u th! tương ng K t qu B ng : K t qu Kh i lư ng cân (mg) 29,6 29,7 29,9 30,1 30,3 m( chu(n) =29,0 nh l nh lư ng c trình bày ' b ng ng tobramycin nguyên li u Di n tích pic(mAU.min) 11,9207 11,9585 11,9165 11,9975 12,0954 12,1916 Hàm lư ng % 90,97 90,95 90,02 90,03 90,17 94,96 S li u th ng kê: Giá tr trung bình X = 90, 43 l ch chu(n : S = 0,46 l ch chu(n tương i : RSD = 0,51% Sai s chu(n : Sx= 0,21 ∆X = tα ( n −1) × S x = 0,5962 Kho ng tin c y = 90,43 ± 0,59 K t lu n: - 34 - K t qu trình bày ' b ng cho th y nguyên li u tobramycin em nh lư ng có hàm lư ng là: 90,43% ± 0,59 % 2.2.4 ánh giá phương pháp nh lư ng Chúng ti n hành ánh giá phương pháp nh lư ng tobramycin nguyên li u b ng HPLC m i xây d ng d a vào ch) tiêu sau - ánh giá tính n tính - ánh giá tính xác - ánh giá tính úng - ánh giá tính c hi u 2.2.4.1 Tính n tính Ti n hành kh o sát s ph thu c n tính gi$a n"ng v i di n tích pic c a d.n ch t tobramycin (tính theo lư ng tobramycin ưa vào) ch t chu(n tobramycin Cách pha: Cân xác kho ng 375 mg tobramycin chu(n cho vào bình nh m c 50,0 ml Hồ tan pha lỗng b ng nư c v a Dung d ch thu c có n"ng n v ch 7,5 mg/ml Ti n hành pha loãng theo b ng thu c dung d ch có n"ng l n lư t 2,4; 2,7; 3,0; 3,3; 3,6 mg/ml L c qua màng l c 0,45µm B ng : Cách pha dung d ch Bình kh o sát kho ng n tính Tobramycin (mg) 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0 Nư c c t v a 25 25 25 25 25 2,4 2,7 3,0 3,3 3,6 N"ng (ml) (mg/ml) Tiêm l n lư t 30 µl dung d ch ã chu(n b vào h th ng s c ký Ti n hành s c ký theo i u ki n ã ch n Ghi gía tr di n tích pic o c - 35 - ng v i n"ng c a dung d ch K t qu kh o sát kho ng n tính c trình bày ' b ng B ng : K t qu kh o sát kho ng n tính N"ng (mg/ml) 2,4 Di n tích pic (mAU.min) 9,6023 2,7 3,0 3,3 3,6 10.7959 12,0322 13,1989 14,3825 T k t qu thu c ' b ng thi t l p m i tương quan gi$a di n tích pic thu c s c ký " n"ng c a dung d ch (tính theo lư ng tobramycin ưa vào) Phương trình h"i quy bi u th m i tương quan là: y= 3,9878 x + 0,039 v i h s tương quan r= 0,9999 l ch chu(n y_intercept: Sb= 0,064 Kho ng tin c y 95% c a y_intercept: 0,039 ± 0,204 hay -0,165 y_intercept 0,243 ch a g c to " th bi u di n s ph thu c n tính gi$a n"ng dung d ch di n tích pic c a tobramycin c ghi ' hình Di n tích pic (mAU*min) Tính n tính 16 y = 3.9878x + 0.039 R2 = 0.9999 12 0 N ng - 36 - (mg/ml) Hình : " th bi u di n s ph thu c n tính gi$a n"ng dung d ch di n tích pic c a tobramycin T k t qu thu c ' hình cho th y:  T t c giá tr thu c n m ng h"i quy ho c phân b "ng u c phía c a ng h"i quy  H s tương quan r= 0,9999  Kho ng tin c y c a y_intercept ch a g c to Nh n xét: Phương pháp n tính kho ng n"ng kh o sát t 2,4 n 3,6 mg/ml (tính theo lư ng tobramycin ưa vào) hay n tính kho ng n"ng t 80 % n 120% n"ng làm vi c 2.2.4.2 Tính xác Nguyên t c: Tính xác c a phương pháp c ánh giá b ng l ch chu(n tương i c a phép th! song song Cách ti n hành k t qu K t qu th! c trình bày ph n 2.2.3 xác c a phương pháp cho th y i u ki n s c ký ã ch n l ch chu(n tương i c a k t qu r t nh# (RSD = 0,51%