Xây dựng quy trình kỹ thuật phát hiện điểm đa hình agt m235t và agtr1 a166c

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐIỂM ĐA HÌNH AGT M235T VÀ AGTR1 A166C Đơn vị chủ trì nhiệm vụ: Bộ mơn Sinh lý-Sinh lý bệnh Miễn dịch, Khoa Y Chủ trì nhiệm vụ: TS MAI PHƢƠNG THẢO - TS ĐỖ ĐỨC MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - 2019 i BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐIỂM ĐA HÌNH AGT M235T VÀ AGTR1 A166C Đơn vị chủ trì nhiệm vụ: Bộ mơn Sinh lý-Sinh lý bệnh Miễn dịch, Khoa Y Chủ trì nhiệm vụ: TS MAI PHƢƠNG THẢO - TS ĐỖ ĐỨC MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - 2019 ii DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu: Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Mai Phương Thảo Sinh lý học ĐH Y Dược TP.HCM Lê Gia Hoàng Linh Y sinh học phân tử ĐH Y Dược TP.HCM Đỗ Đức Minh Y sinh học phân tử ĐH Y Dược TP.HCM STT Nơi thực đề tài: Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iii MỤC LỤC Bảng chữ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình biểu đồ vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tăng huyết áp nguyên phát 1.2 Gen hệ thống Renin-Angiotesin 1.3 Kỹ thuật khảo sát biến thể gen Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tượng nghiên cứu 10 2.2 Phương pháp nghiên cứu 11 2.3 Y đức 13 Chƣơng KẾT QUẢ 14 3.1 Phát đa hình đơn giải trình tự Sanger 14 3.2 Chuẩn hóa điều kiện ASO-PCR 15 3.3 Kết khảo sát điểm đa hình đơn mẫu bệnh nhân kỹ thuật ASO-PCR 18 Chƣơng BÀN LUẬN 20 KẾT LUẬN 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 iv BẢNG CHỮ VIẾT TẮT ACE Angiotensin converting enzyme AGT Angiotensinogen AGTR1 Agiotensin II receptor type ASOPCR Alelle-Specific Oligonucleotide Polymerase chain reaction THA Tăng huyết áp v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự mồi sử dụng phản ứng PCR khuếch đại gen mục tiêu……………………………………………………… 12 Bảng 3.1: Trình tự tỉ lệ mồi thực phản ứng ASO-PCR phát điểm đa hình đơn M235T gen AGT ………………… 14 Bảng 3.2: Trình tự tỉ lệ mồi thực phản ứng ASO-PCR phát điểm đa hình đơn A1166C gen AGTR1…………… 15 Bảng 3.3: Trình tự thực phản ứng PCR phát biến thể I/D (rs1799752) gen ACE……………………………………… 17 Bảng 3.4 Tần số kiểu gen gen hệ renin – angiotensin …… 18 vi DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Hình 3.1: Điểm đa hình đơn M235T gen AGT …………… 15 Hình 3.2: Điểm đa hình đơn A1166C gen AGTR1………… 16 Hình 3.3: Kết điện di gen AGT……………………………… 17 Hình 3.4: Kết điện di gen AGTR1…………………………… 18 Hình 3.5: Kết điện di gen ACE……………………………… 18 vii THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG Thông tin chung:  Tên đề tài: XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐIỂM ĐA HÌNH AGT M235T VÀ AGTR1 A166C  Mã số:  Chủ nhiệm đề tài: TS BS Mai Phương Thảo Điện thoại: 0918329999 Email: drmaithao@ump.edu.vn (maithao292@gmail.com)  Đơn vị quản lý chuyên môn: Khoa Y, Bộ môn Sinh lý – Sinh lý bệnh Miễn dịch  Thời gian thực hiện: từ 02/7/2018 đến 1/7/2019 Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật ASO PCR phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C liên quan đến bệnh lý nhồi máu tim tăng huyết áp Nội dung chính:  Thiết kế mồi đặc hiệu thiết lập phản ứng ASO PCR xác định điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C  Đối chiếu kết ASO PCR với tiêu chuẩn vàng giải trình tự Sanger  Khảo sát tỉ lệ alen đối tượng nghiên cứu Kết đạt đƣợc:  Xây dựng thành cơng quy trình phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C kỹ thuật ASO PCR ĐẶT VẤN ĐỀ Hệ renin-angiotensin (Renin angiotensin system: RAS) đóng vai trị quan trọng việc điều hồ huyết áp, tưới máu mơ trì thể tích dịch ngoại bào, hệ thống điều hoà rối loạn dù nguyên phát hay thứ phát liên quan chặt chẽ đến sinh bệnh học bệnh lý tăng huyết áp, suy tim, suy thận Về bản, đường RAS bắt đầu renin phân cắt angiotensin (AGT) để sản xuất tiền chất bất hoạt angiotensin I, sau đó, men chuyển angiotensin I (Angiotensin converting enzym: ACE) chuyển angiotensin I thành angiotensin II có hoạt tính sinh học gây co mạch phóng thích aldosteron từ vỏ thượng thận gây tác dụng giữ muối từ làm gia tăng huyết áp Gần đây, tiến kỹ thuật di truyền cho phép giả mã tồn trình tự gen người cho ta nhìn cụ thể cách thức thay đổi di truyền liên quan đến bệnh lý người, đặc biệt bệnh lý mang tính di truyền đa gen (polygenic) tăng huyết áp, đái tháo đường… Các nghiên cứu tương quan toàn nhiễm sắc thể (Genome-wide association Study: GWAS) xem công cụ tầm soát hiệu yếu tố di truyền liên quan đến bệnh lý di truyền đa gen Gen AGT nằm nhánh dài nhiễm sắc thể số 1, bao gồm exon, mã hóa cho protein angiotensinogen Biến thể M235T (rs699) có liên quan đến nhiều biến cố tim mạch biến thể cho thấy gia tăng đáng kể nồng độ agiotensinogen sản xuất người mang alen T so với người mang alen C3 Gene AGTR1 nằm nhánh dài nhiễm sắc thể số 3, mã hóa cho protein thụ thể típ angiotensin II (AT1R: agiotensin II receptor type 1) Điểm đa hình đơn rs5186 (A1166C) nằm gen AGTR1 cho thấy mối liên quan với bệnh lý tăng huyết áp nhiều chủng tộc nghiên cứu Điểm đa hình nằm ngồi vùng mã hóa exon gen AGTR1 lại ảnh hưởng đến mức độ biểu hình thành protein AT1R Trong trình điều hòa phiên mã gen AGTR1, micro RNA miR-155 bám vào trình tự khu vực làm giảm phiên mã gen AGTR1, người mang SNP rs5186, vị trí 1166 chuyển từ A thành C làm cho miR155 khơng bám lên trình tự dẫn đến tăng biểu thụ thể AT1R6 Hiện nay, tiêu chuẩn vàng để xác định điểm đa hình phương pháp giải trình tự gen Dù có tính xác cao phương pháp nhược điểm đắt tiền tốn thời gian, vậy, việc việc dùng cơng cụ rẻ tiền, hiệu xác cần thiết việc phát điểm đa hình gen AGT AGTR1.Thông qua nghiên cứu này, chúng tơi muốn tiến hành xây dựng quy trình phản ứng ASO-PCR nhằm phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C MỤC TIÊU TỔNG QUÁT: Ứng dụng kỹ thuật ASO PCR phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C MỤC TIÊU CỤ THỂ: Thiết kế mồi đặc hiệu thiết lập phản ứng ASO PCR xác định điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C Đối chiếu kết ASO PCR với tiêu chuẩn vàng giải trình tự Sanger Khảo sát tỉ lệ alen đối tượng nghiên cứu 12 Cặp mồi khuếch đại vùng mang đa hình đơn gen thiết kế phần mềm CLC Main Workbench v5.5 Các mồi chọn vị trí có vùng GC tương tự để có nhiệt độ bắt mồi Bảng 2.1 Trình tự mồi sử dụng phản ứng PCR khuếch đại gen mục tiêu Gen Đoạn mồi ACE Mồi xuôi Mồi ngược AGT AGTR1 Trình tự (5’ >3’) ACTCTGTAAGCCACTGCTGG GATGTGGCCATCACATTCGTCA Mồi xi CCACGCTCTCTGGACTTCAC Mồi ngược TTCTCAAGGGTGGTCACCAG Mồi xuôi ATCCACCAAGAAGCCTGCAC Mồi ngược CTTCGAGCAGCCGTCATCTG Thiết lập điều kiện PCR Mỗi tube PCR tích 15 l chứa thành phần: 1,5μl PCR buffer 10X; 1,5μl dNTP 2,5mM; 0,75μl mồi xuôi ngược (10nM/μl), 0,1μl TaKaRa TaqTM HotStart Polymerase (Takara, Nhật Bản), 2μl genomic DNA (2050ng/μl) 8,4μl nước cất lần khử ion Các phản ứng kèm theo chứng âm không chứa DNA để kiểm soát ngoại nhiễm Sản phẩm PCR điện di kiểm tra tinh trước thực phản ứng cycle sequencing với BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystems, Mỹ) theo chiều xuôi ngược cho đoạn cần đọc Sản phẩm sau kết tủa ethanol, hịa tan Hi-di formamide, biến tính 950C phút trước làm lạnh đột ngột Trình tự DNA đọc máy ABI 13 3500 (Applied Biosystems, Mỹ) Kết phân tích phần mềm CLC Main Workbench v5.5 2.2.4 Định gen kỹ thuật ASO-PCR Sau xác định kiểu gen làm chứng âm chứng dương cho kỹ thuật ASO-PCR Sanger Sequencing, tiến hành thực kỹ thuật phản ứng ASO-PCR phân tích kết điện di 2.3 Y ĐỨC − Nghiên cứu tiến hành sau bệnh nhân tư vấn đầy đủ ký vào đồng thuận tham gia nghiên cứu Bệnh nhân có quyền chấm dứt việc tham gia nghiên cứu thời điểm − Việc thăm khám lấy mL máu tĩnh mạch khơng làm nặng thêm tình trạng bệnh khơng ảnh hưởng đến q trình điều trị − Thơng tin bảo mật sử dụng cho mục đích nghiên cứu − Đề cương nghiên cứu Hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh học Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh 14 CHƢƠNG KẾT QUẢ 3.1 PHÁT HIỆN CÁC ĐA HÌNH ĐƠN BẰNG GIẢI TRÌNH TỰ SANGER Để thiết kế chuẩn hóa phản ứng ASO-PCR giúp phát điểm đa hình đơn, chúng tơi dùng cặp mồi xuôi ngược gen AGT AGTR1 để giải trình tự DNA kỹ thuật Sanger Hình mô tả kết Sanger cho loại biến thể đồng hợp tử TT dị hợp tử MT gen AGT, hình mơ tả kết Sanger cho loại biến thể đồng hợp tử AA dị hợp tử AC gen AGTR1 Các kết sử dụng làm chứng dương cho phản ứng ASO-PCR Hình 3.1: Điểm đa hình đơn M235T gen AGT 15 Hình 3.2: Điểm đa hình đơn A1166C gen 3.2 CHUẨN HÓA ĐIỀU KIỆN ASO-PCR Sau có chứng dương, chúng tơi tiến hành chuẩn hóa điều kiện ASO-PCR để phát điểm đa hình gen Trong phản ứng chúng tơi sử dụng lúc cặp mồi Cặp mồi thứ dùng để kiểm tra chất lượng DNA hiệu phản ứng PCR lần chạy, cặp mồi thứ hai dùng để phát điểm đa hình đơn Trình tự tỉ lệ mồi thể bảng 1, Bảng 3.1: Trình tự tỉ lệ mồi thực phản ứng ASO-PCR phát điểm đa hình đơn M235T gen AGT Trình tự mồi Tên 5’AGT-F Chiều dài Tỷ lệ (bp) mồi Chứng CCACGCTCTCTGGACTTCAC-3’ nội: 282 16 AGT-R 5’- Alen TTCTCAAGGGTGGTCACCAG- M:204 3’ Alen 5’- 118 T: AAGACTGGCTGCTCCCTGAT- AGT-WT-F 3’ 5’1 AGT-699C-R2 TGCTGTCCACACTGGCTCTCA3’ Bảng 3.2: Trình tự tỉ lệ mồi thực phản ứng ASO-PCR phát điểm đa hình đơn A1166C gen AGTR1 Trình tự mồi Tên Chiều Tỷ lệ dài (bp) mồi AGTR1-F2 5’- GCCATGCCTATCACCATTTG - Chứng 3’ nội: 544 AGTR1-R2 5’- AAAGCAGGCTAGGGAGATTG Alen A:342 -3’ 5’AGTR1- TTCAATTCTGAAAAGTAGCTCAT 5186A-R2 -3’ 5’- AGTR1- TTCAATTCTGAAAAGTAGCTCAG 5186C-R2 -3’ 17 Bảng 3.3: Trình tự thực phản ứng PCR phát biến thể I/D (rs1799752) gen ACE Trình tự mồi Tên ACE-F 5’- ACTCTGTAAGCCACTGCTGG-3’ Chiều dài (bp) Biến thể DD: 206 Biến thể II: 510 5’ACE-R Biến thể ID:206 GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT- 510 3’ Thơng qua q trình chuẩn hóa điều kiện, chúng tơi thiết lập chu trình nhiệt cho gen AGT, AGTR1, ACE: khởi đầu 980C phút, với 40 chu kỳ lặp lại bước 980C : 20 giây, 560C : 20 giây, 720C : 30 giây; với bước 720C : phút Các phản ứng kèm theo chứng âm khơng chứa DNA để kiểm sốt ngoại nhiễm Kết điện di thể hình 3,4 Hình 3.3: Kết điện di gen AGT 18 Hình 3.4: Kết điện di gen AGTR1 Hình 3.5: Kết điện di gen ACE 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐIỂM ĐA HÌNH ĐƠN TRÊN MẪU BỆNH NHÂN BẰNG KỸ THUẬT ASO-PCR Ứng dụng kỹ thuật ASO-PCR xây dựng trên, tiến hành khảo sát tần số kiểu gen 100 bệnh nhân: bao gồm 50 bệnh nhân tăng huyết áp 50 người nhóm chứng tham gia Kết tần số kiểu gen, 19 allele biến thể gen AGT M235T, ACE I/D AGTR1 A1166C trình bày bảng Bảng 3.4 Tần số kiểu gen gen hệ renin – angiotensin Gen Nhóm Tăng Nhóm chứng Huyết Áp AGT M235T MM, n (%) (0,0) (0) TT, n (%) 42 (84) 35 (70) MT, n (%) (16) 15 (30) II, n (%) 29 (58) 24 (48) DD, n (%) 21 (42) 20 (40) ID, n (%) (0) (12) AA, n (%) 44 (88) 40 (80) CC, n (%) (4) (4) AC, n (%) (8) (16) ACE I/D AGTR1 A1166C 20 CHƢƠNG BÀN LUẬN Các bệnh lý tim mạch mối quan tâm lớn sức khỏe hầu phát triển, đặc biệt, tăng huyết áp ngun nhân phòng ngừa bệnh tật tử vong biến cố tim mạch Các yếu tố dự đoán di truyền (chủ yếu đa hình nucleotide đơn, SNPs) trọng tâm số nghiên cứu thu hút nhiều quan tâm, với tiềm cá thể hóa điều trị, khả đáp ứng với thuốc điều trị bệnh nhân Tăng huyết áp bệnh lý đa gen, có tương tác yếu tố di truyền mơi trường Cho đến có khoảng 150 gen ghi nhận có liên quan đến tăng huyết áp, gen angiotensinogen (AGT) enzyme chuyển đổi angiotensin-1 (ACE), thụ thể Angiotensin típ (AGTR1) mã hóa protein hệ thống renin-angiotensin (RAS) đánh giá rộng rãi [7, 8] Ban đầu, Jeunemaitre cộng [9] khám phá vai trò tiềm gen AGT tăng huyết áp thông qua nghiên cứu liên kết Hai phân tích tổng hợp khác dân số Trung Quốc xác nhận alen T đa hình AGTM235T có liên quan đến tăng huyết áp nguyên phát [10, 11].Tuy nhiên, Niu cộng kết luận khơng có mối liên quan tăng huyết áp nguyên phát với đa hình đơn AGTM235T, sau phân tích theo độ tuổi, giới tính mức độ nghiêm trọng bệnh Tương tự, nghiên cứu Caulfiels cộng khơng tìm thấy mối liên quan bệnh tăng huyết áp nguyên phát đa hình đơn Trong nghiên cứu Mohana cộng sự tăng nguy mắc bệnh tăng huyết áp bệnh nhân nữ mang biến thể AGTM235T (OR = 2.82; 95% CI = 1.22-6.49; p=0.012)[12] Trong nghiên cứu nay, tỷ lệ kiểu gen TT bệnh nhân tăng huyết áp cao so với nhóm đối chứng ( p < 0,001) Hơn nữa, alen T yếu tố nguy gây tăng huyết áp, đối tượng nghiên cứu mang alen T có nguy tăng huyết áp cao gấp bảy lần (OR = 7.267, p 21 < 0,001) Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu thực đối tượng người Malaysia [13], người Hán [10], nam giới Uzbekistan [14], Hồng Kông [15] Ngược lại, khơng có mối liên quan đáng kể tăng huyết áp kiểu gen AGT MT TT Anh [16], người da trắng [17], Mông Cổ Lebanon [18] ACE enzyme chủ chốt hệ renin – angiotensin, xúc tác cho việc chuyển đổi angiotensin I thành angiotensin II gen mã hóa cho protein ACE Gen ACE tồn nhiễm sắc thể 17q23 chứa 26 exon 25 intron với tổng chiều dài 21 kb Tuỳ theo diện vắng mặt đoạn 287 bp intron 16 mà xác định kiểu đa hình chèn /xóa (I / D) Một số nghiên cứu xác định có diện ba kiểu gen: kiểu gen xoá đồng hợp tử DD, kiểu gen chèn đồng hợp tử II ID kiểu gen dị hợp tử Trong báo cáo phân tích tổng hợp cơng bố gần đây[19] cho thấy tổng 41 nghiên cứu (4708 ca bệnh + 5368 ca chứng) phân tích liên quan đa hình ACE I / D yếu tố nguy T2DM dân số Trung Quốc cho kết mối liên quan khơng có ý nghĩa thống kê tất mơ hình di truyền (mơ hình đồng trội: DD so với II: OR = 1.17, CI 95% 0.97-1.42 ID so với II: OR = 1,01, 95% CI 0,93-1,10 Tuy nhiên, Zarouk cộng [20] báo cáo kiểu gen DD alen D có liên quan đến tăng huyết áp bệnh tiểu đường típ bệnh nhân Ai Cập Theo nghiên cứu Zhou cộng [21] báo cáo tần số kiểu gen ID, DD tần số alen D tăng đáng kể nhóm chứng, so với nhóm bệnh tăng huyết áp nhóm tăng huyết áp đái tháo đường Nghiên cứu đa hình gen ACE I/D khơng phải yếu tố nguy bệnh đái tháo đường típ dân số, kết luận phù hợp với nghiên cứu trước đó[22, 23] Một nghiên cứu cắt ngang bệnh-chứng người da trắng biến thể A1166C gen thụ thể angiotensin típ (AGTR1/AT1) có liên 22 quan đến người mắc tăng huyết áp có tiền sử gia đình[24] Tuy nhiên, kết gây tranh cãi vài nghiên cứu chứng minh có mối liên quan [25-27] số khác khơng [28] Một nghiên cứu gần cho thấy biến thể giải thích cho chứng tăng huyết áp mức người Mỹ gốc Phi [29] Trong nghiên cứu khác, số huyết áp thấp người mang kiểu gen đồng hợp tử CC [30] Qua việc tổng kết nghiên cứu mối tương quan biến thể gen thuộc hệ RAS nghiên cứu chủng tộc người khác giới cho kết khác theo độ tuổi, giới tính đặc điểm dân số Nghiên cứu chúng tơi bước đầu xây dựng quy trình xác định biến thể AGT M235T, ACE I/D, AGTR1 A1166C nhằm ứng dụng quy trình để khảo sát mối tương quan biến thể với số bệnh liên quan đến tim mạch việc đáp ứng với thuốc điều trị, làm tiền đề cho nghiên cứu với cỡ mẫu lớn sau 23 KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 100 bệnh nhân nhóm tăng huyết áp nhóm chứng, chúng tơi thiết lập thành cơng quy trình ASO-PCR để xác định điểm đa hình đơn gen AGTR1 A1166C, AGT M235T biến thể gen ACE I/D Kiểm tra lại kết với 10% mẫu Sanger Sequencing cho kết xác Trong tương lai, nghiên cứu khác với cỡ mẫu lớn cần tiến hành để kiểm định yếu tố nguy alen so với nhóm bệnh lý liên quan nhóm chứng, tần số kiểu gen nhóm bệnh nhóm chứng 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO Sarkar, T and N.P Singh, Epidemiology and Genetics of Hypertension J Assoc Physicians India, 2015 63(9): p 61-98 Klein, R.J., et al., Complement factor H polymorphism in age-related macular degeneration Science, 2005 308(5720): p 385-9 Padmanabhan, S., M Caulfield, and A.F Dominiczak, Genetic and molecular aspects of hypertension Circ Res, 2015 116(6): p 937-59 Winkelmann, B.R., et al., Angiotensinogen M235T polymorphism is associated with plasma angiotensinogen and cardiovascular disease Am Heart J, 1999 137(4 Pt 1): p 698-705 Rigat, B., et al., An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin Iconverting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels J Clin Invest, 1990 86(4): p 1343-6 Sethupathy, P., et al., Human microRNA-155 on chromosome 21 differentially interacts with its polymorphic target in the AGTR1 3' untranslated region: a mechanism for functional single-nucleotide polymorphisms related to phenotypes Am J Hum Genet, 2007 81(2): p 40513 Rigat, B., et al., PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (DCP1) (dipeptidyl carboxypeptidase 1) Nucleic Acids Res, 1992 20(6): p 1433 Russ, A.P., et al., Rapid detection of the hypertension-associated Met235->Thr allele of the human angiotensinogen gene Hum Mol Genet, 1993 2(5): p 609-10 Jeunemaitre, X., et al., Molecular basis of human hypertension: role of angiotensinogen Cell, 1992 71(1): p 169-80 10 Ji, L.D., et al., Association of angiotensinogen gene M235T and angiotensinconverting enzyme gene I/D polymorphisms with essential hypertension in Han Chinese population: a meta-analysis J Hypertens, 2010 28(3): p 41928 11 Xi, B., et al., Association of polymorphisms in the AGT gene with essential hypertension in the Chinese population J Renin Angiotensin Aldosterone Syst, 2012 13(2): p 282-8 12 Mohana, V.U., et al., Gender-related association of AGT gene variants (M235T and T174M) with essential hypertension a case-control study Clin Exp Hypertens, 2012 34(1): p 38-44 25 13 Say, Y.H., et al., Angiotensinogen M235T gene variants and its association with essential hypertension and plasma renin activity in Malaysian subjects: a case control study BMC Cardiovasc Disord, 2005 5(1): p 14 Kurbanova, D and M Eliseyeva, Genetic background of left ventricular hypertrophy in Uzbek hypertensive men Turk Kardiyol Dern Ars, 2010 38(7): p 466-72 15 Fang, Y.J., et al., Linkage of angiotensinogen gene polymorphisms with hypertension in a sibling study of Hong Kong Chinese J Hypertens, 2010 28(6): p 1203-9 16 Hingorani, A.D., et al., Blood pressure and the M235T polymorphism of the angiotensinogen gene Hypertension, 1996 28(5): p 907-11 17 Glavnik, N and D Petrovic, M235T polymorphism of the angiotensinogen gene and insertion/deletion polymorphism of the angiotensin-1 converting enzyme gene in essential arterial hypertension in Caucasians Folia Biol (Praha), 2007 53(2): p 69-70 18 Ying, C.Q., et al., Association of the renin gene polymorphism, three angiotensinogen gene polymorphisms and the haplotypes with essential hypertension in the Mongolian population Clin Exp Hypertens, 2010 32(5): p 293-300 19 Zhou, D., et al., Angiotensin-converting enzyme I/D polymorphism is not associated with type diabetes in a Chinese population J Renin Angiotensin Aldosterone Syst, 2012 13(3): p 372-8 20 Bhaskar, L.V., et al., Role of the ACE ID and PPARG P12A Polymorphisms in Genetic Susceptibility of Diabetic Nephropathy in a South Indian Population Nephrourol Mon, 2013 5(3): p 813-7 21 Zhou, Y.F., et al., Association study of angiotensin converting enzyme gene polymorphism with elderly diabetic hypertension and lipids levels Lipids Health Dis, 2013 12: p 187 22 Arfa, I., et al., Lack of association between the angiotensin-converting enzyme gene (I/D) polymorphism and diabetic nephropathy in Tunisian type diabetic patients J Renin Angiotensin Aldosterone Syst, 2008 9(1): p 326 23 Arfa, I., et al., Lack of association between renin-angiotensin system (RAS) polymorphisms and hypertension in Tunisian type diabetics Tunis Med, 2010 88(1): p 38-41 24 Wang, W.Y., R.Y Zee, and B.J Morris, Association of angiotensin II type receptor gene polymorphism with essential hypertension Clin Genet, 1997 51(1): p 31-4 26 25 Ono, K., et al., Lack of association between angiotensin II type receptor gene polymorphism and hypertension in Japanese Hypertens Res, 2003 26(2): p 131-4 26 Chandra, S., et al., Association of angiotensin II type receptor (A1166C) gene polymorphism and its increased expression in essential hypertension: a case-control study PLoS One, 2014 9(7): p e101502 27 Parchwani, D.N., et al., Analysis of Association of Angiotensin II Type Receptor Gene A1166C Gene Polymorphism with Essential Hypertension Indian J Clin Biochem, 2018 33(1): p 53-60 28 Dzida, G., et al., Polymorphisms of angiotensin-converting enzyme and angiotensin II receptor type genes in essential hypertension in a Polish population Med Sci Monit, 2001 7(6): p 1236-41 29 Henderson, S.O., C.A Haiman, and W Mack, Multiple Polymorphisms in the renin- angiotensin-aldosterone system (ACE, CYP11B2, AGTR1) and their contribution to hypertension in African Americans and Latinos in the multiethnic cohort Am J Med Sci, 2004 328(5): p 266-73 30 Deng, A.Y and J.P Rapp, Evaluation of the angiotensin II receptor AT1B gene as a candidate gene for blood pressure J Hypertens, 1994 12(9): p 1001-6 ... muốn tiến hành xây dựng quy trình phản ứng ASO-PCR nhằm phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C MỤC TIÊU TỔNG QUÁT: Ứng dụng kỹ thuật ASO PCR phát điểm đa hình AGT M235T AGTR1 A166C MỤC TIÊU... CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐIỂM ĐA HÌNH AGT M235T VÀ AGTR1 A166C Đơn vị chủ... KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG Thông tin chung:  Tên đề tài: XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐIỂM ĐA HÌNH AGT M235T VÀ AGTR1 A166C  Mã số:  Chủ nhiệm đề tài: