Hiện nay các loại sữa dành cho trẻ em được bổ sung một lượng đáng kể các vitamin là các hợp chất hữu cơ có trong thực phẩm và là nguồn vi chất quan trọng cho quá trình trao đổi chất và d
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - VŨ THỊ THU HƯƠNG PHÂN TÍCH CÁC VITAMIN NHĨM B TRONG SỮA BỘT TRẺ EM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC M· sè: 2.76 HÀ NỘI - 2009 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 17051113898761000000 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VŨ THỊ THU HƯƠNG PHÂN TÍCH CÁC VITAMIN NHĨM B TRONG SỮA BỘT TRẺ EM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) NGÀNH HÓA CƠ BẢN MÃ SỐ: LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Thị Thảo HÀ NỘI - 2009 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn thân thực hiện, kết nghiên cứu đưa luận văn thân chưa nghiên cứu, sử dụng công bố tạp chí khoa học trước đây, số liệu kết nghiên cứu thực cách trung thực xác LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Tạ Thị Thảo - Khoa Hóa - Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà nội tận tình hướng dẫn chun mơn, phương pháp nghiên cứu tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài Xin gửi lời trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học thầy, giáo Khoa Cơng nghệ Hóa học – Đại học Bách khoa Hà Nội tận tình dạy dỗ, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành nội dung học tập thực đề tài thuận lợi Xin trân trọng cảm ơn bạn đồng nghiệp Ds Trần Cao Sơn, CN Vũ Thị Trang, Ban giám đốc, lãnh đạo cán Labo Hóa độc thực phẩm - Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia tạo điều kiện, giúp đỡ chúng tơi q trình triển khai nghiên cứu đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, bạn lớp Cao học Hóa 2007 - 2009 giúp đỡ động viên hai năm học tập trình làm luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2009 Vũ Thị Thu Hương MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH, PHỤ LỤC MỞ ĐẦU 12 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 14 1.1 Sữa thành phần sữa 14 1.1.1 Nước 14 1.1.2 Cacbohydrat 14 1.1.3 Chất béo 15 1.1.4 Protein 16 1.1.5 Vitamin, khoáng chất enzym 17 1.1.5.1 Vitamin A 17 1.1.5.2 Vitamin C 18 1.1.5.3 Vitamin D 18 1.1.5.4 Vitamin E 18 1.1.5.5 Vitamin K 18 1.1.5.6 Các khoáng chất 18 1.1.5.7 Enzymes 19 1.2 Vitamin nhóm B sữa 20 1.2.1 Tên gọi, cấu trúc, cơng thức cấu tạo vitamin nhóm B 20 1.2.2 Vai trò vitamin nhóm B sữa 21 1.2.3 Tính chất vitamin nhóm B sữa 22 1.2.3.1 Thiamine (vitamin B1) 22 1.2.3.2 Riboflavin (vitamin B2) 22 1.2.3.3 Niacin (vitamin PP) 22 1.2.3.4 Pantothenic acid (vitamin B5) 23 1.2.3.5 Pyridoxine (vitamin B6) 23 1.2.3.6 Muối folat (vitamin B9) 23 1.2.3.7 Cyanocobalamin (vitamin B12) 23 1.2.4 Độc tính vitamin nhóm B 23 1.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC – công cụ ứng dụng 25 hữu hiệu để phân tích thành phần dinh dưỡng thực phẩm 25 1.3.1 Nguyên tắc chung phương pháp HPLC 25 1.3.2 Pha tĩnh HPLC 26 1.3.3 Pha động HPLC 27 1.3.4 Các loại detector HPLC 28 1.3.5 Một số đại lượng đặc trưng HPLC 29 1.3.6 Phân tích định tính HPLC 31 1.3.7 Phân tích định lượng HPLC 32 1.3.8 Phương pháp sắc ký lỏng hấp phụ pha ngược RP-HPLC 32 1.3.9 Các phương pháp xác định vitamin nhóm B thực phẩm 33 1.4 Ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC phân tích vitamin tan nước nhóm B sữa 34 1.4.1 Phương pháp sắc ký lỏng pha ngược (RP-HPLC) sử dụng detector PDA (Photo – diode - array) 34 1.4.2 Phương pháp sắc ký lỏng cặp ion sử dụng cột tách pha ngược RP-LC, detector UV35 1.4.3 Phương pháp sắc ký lỏng HPLC sử dụng detector huỳnh quang 36 1.4.4 Phương pháp sắc ký lỏng HPLC sử dụng detector PDA với chế độ chạy rửa giải gradient 36 1.4.5 Các phương pháp xử lý mẫu 37 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 41 2.1 Đối tượng, mục tiêu nội dung nghiên cứu 40 2.1.1.Đối tượng nghiên cứu 40 2.1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 40 2.2 Hóa chất, thiết bị phương pháp nghiên cứu 41 2.2.1 Chất chuẩn, hóa chất thuốc thử 41 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 42 2.2.3 Mẫu phân tích 43 2.3 Phương pháp nghiên cứu 43 2.3.1 Phương pháp xử lý mẫu sữa 43 2.3.2 Phương pháp phân tích điều kiện chạy sắc ký 43 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích 45 3.1.1 Tối ưu hoá điều kiện xác định Vitamin nhóm B HPLC 45 3.1.1.1 Chọn van bơm mẫu 45 3.1.1.2 Chọn cột tách 46 3.1.1.3 Chọn Detector 46 3.1.1.4 Chọn bước sóng phát 47 3.1.1.5 Khảo sát tỷ lệ thành phần pha động 48 3.1.2 Tối ưu hóa điều kiện xử lý mẫu 58 3.1.2.1 Khảo sát dung dịch chiết mẫu 58 3.1.2.2 Độ thu hồi phương pháp 59 3.1.2.3 Độ lệch chuẩn 61 3.2 Nghiên cứu đánh giá phương pháp phân tích 63 3.2.1 Khảo sát lập đường chuẩn 63 3.2.2 Giới hạn phát LOD 67 3.2.3 Giới hạn định lượng LOQ 71 3.2.4 Giới hạn tuyến tính (LOL) 71 3.2.5 Khoảng tuyến tính 71 3.2.6 Độ xác phương pháp 72 3.2.6.1 Độ 72 3.2.6.2 Độ chụm 73 3.2.6.3 Độ xác 75 3.2.7 Độ tái lặp phương pháp (Đánh giá độ xác phương pháp phịng thí nghiệm) 77 3.3 Ứng dụng phân tích mẫu thực tế 80 3.3.1 Quy trình xử lý mẫu 80 3.3.2 Kết phân tích thực tế 82 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 88 TÓM TẮT NGHIÊN CỨU 90 TÀI LIỆU THAM KHẢO 94 PHỤ LỤC 98 Phụ lục 1: Một số sắc đồ khảo sát tối ưu hóa điều kiện sắc ký 98 Phụ lục 2: Sắc đồ khảo sát lập đường chuẩn 100 Phụ lục 3: Sắc đồ khảo sát điều kiện tối ưu hóa xử lý mẫu 103 Phụ lục 4: Một số sắc đồ phân tích mẫu thực 105 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril UV/VIS Ultraviolet-visible spectrophotometry Quang phổ tử ngoại khả kiến PDA Photo Diode Array Chuỗi điốt quang ND Not detected NC Not compared Không thực so sánh SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối theo of Horwitz’s cơng thức tính Horwitz Degrees of freedoms Bậc tự RSDH DF MINITABS Dưới giới hạn phát phương pháp Phần mềm phân tích thống kê DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1.Thơng tin chung số vitamin nhóm B Bảng 1.2 Mức hấp thụ cho phép số vitamin Bảng 3.1.Thời gian lưu bước sóng hấp thụ cực đại vitamin tan nước nhóm B Bảng 3.2 Thời gian lưu vitamin thành phần pha động khác Bảng 3.3 Thành phần pha động Bảng 3.4 Chương trình rửa giải gradient pha động Bảng 3.5 Các loại tốc độ dòng lựa chọn tương ứng cho loại cột tách Bảng 3.6 Kết khảo sát tốc độ dòng Bảng 3.7 Diện tích pic vitamin nồng độ TCA khác Bảng 3.8 Độ thu hồi phương pháp xác định vitamin mẫu sữa bột M8 03 mức thêm chuẩn khác Bảng 3.9 Độ thu hồi phương pháp xác định vitamin mẫu sữa bột DDP1tại 03 mức thêm chuẩn khác Bảng 3.10 Độ lệch chuẩn phương pháp xác định vitamin tan nước nhóm B mẫu sữa bột Bảng 3.11.Sự phụ thuộc nồng độ vitamin diện tích pic tương ứng Bảng 3.12 Độ tuyến tính đường chuẩn vitamin tan nước nhóm B Bảng 3.13 Giới hạn phát (LOD) phương pháp Bảng 3.14 Giới hạn phát (LOD) theo phương pháp lý thuyết tính theo phương trình đường chuẩn Bảng 3.15 Giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp