Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH LÊ VĂN THUYÊN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG HỢP CHẤT HYPOPHYLLANTHIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Vinh, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH LÊ VĂN THUYÊN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG HỢP CHẤT HYPOPHYLLANTHIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Mã số: 60.44.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS ĐINH THỊ TRƢỜNG GIANG Vinh, 2015 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm - Trung tâm thực hành thí nghiệm - Trường Đại học Vinh Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Giảng viên TS Đinh Thị Trường Giang, người giao đề tài, tận tình bảo, hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Trần Đình Thắng – Khoa Hóa Học – Trường Đại học Vinh giúp đỡ bảo tận tình cho tơi hồn thành luận văn Tác giả xin chân thành cảm ơn Hội đồng Khoa học – khoa Hóa học trường Đại học Vinh, thầy giáo, cô giáo trực tiếp giảng dạy lớp cao học 21 truyền đạt kiến thức quý báu cho làm tảng để thực luận văn Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu – Các phịng ban – Trung tâm thực hành thí nghiệm trường Đại học Vinh tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trường học tập khoa học Và cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, người thân bạn bè động viên, cổ vũ, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình học tập nghiên cứu hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Vinh, ngày 10 tháng 10 năm 2015 Tác giả Lê Văn Thuyên MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi phyllanthus 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Hoạt tính sinh học chi Phyllanthus 1.1.3.1 Tác dụng dƣợc lí 1.1.3.2 Một số cơng trình nghiên cứu dƣợc lý diệp hạ châu 1.2 Giới thiệu hợp chất lignan 1.2.1.Phyllanthin 1.2.2.Hypophyllanthin 10 1.3 Những nghiên cứu hypophyllanthin loài phyllanthus 11 1.3.1 Ở nƣớc 11 1.3.2 Ở Việt Nam 12 1.4 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 14 1.4.1 Giới thiệu phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao 14 1.4.1.1 Cơ sở lí thuyết phƣơng pháp 14 1.4.1.2 Phân loại sắc ký ứng dụng 15 1.4.1.3 Các đại lƣợng đặc trƣng sắc ký đồ 17 1.4.2 Hệ thống HPLC 20 1.4.3 Chọn điều kiện sắc ký 21 1.4.3.1 Lựa chọn pha động 21 1.4.3.2 Lựa chọn pha tĩnh 22 1.4.3.3 Detector 24 1.4.4 Tiến hành đo sắc ký 26 1.4.4.1 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 26 1.4.4.2 Chuẩn bị dung môi pha động 26 1.4.5 Định lƣợng phƣơng pháp HPLC 26 1.4.5.1 Nguyên tắc định lƣợng phân tích HPLC 26 1.4.5.2 Các bƣớc định lƣợng phƣơng pháp HPLC 27 1.4.5.3 Các phƣơng pháp định lƣợng 27 Chƣơng 2: PHƢƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 30 2.1 Trang thiết bị dụng cụ 30 2.2 Hóa chất chất chuẩn 30 2.3 Phƣơng pháp phân lập xác định cấu trúc 30 2.3.1 Phƣơng pháp phân lập 31 2.3.2 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 31 2.4 Phƣơng pháp định lƣợng 31 2.4.1.Các loại mẫu dùng nghiên cứu định lƣợng hypophyllanthin 31 2.4.2 Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu 35 2.4.2.1 Phân lập, tinh chế xác định cấu trúc chất chuẩn .35 2.4.2.2 Chuẩn bị dung dịch chuẩn hypophyllanthin cho phép đo HPLC 35 2.4.2.3 Chuẩn bị mẫu chế phẩm cách tiến hành 36 2.4.2.4 Điều kiện sắc ký 39 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Xác định cấu trúc chất hypophyllanthin 40 3.2 Xác định định lƣợng hypophyllanthin 43 3.2.1 Xác định khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn hypophyllanthin 43 3.2.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng phƣơng pháp phân tích 48 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.2.2.1 Giới hạn phát LOD 48 3.2.2.2 Giới hạn định lƣợng LOQ 49 3.2.3 Kết phân tích hypophyllanthin mẫu chế phẩm 50 3.2.4 Đánh giá phƣơng pháp xác định hypophyllanthin 51 3.2.4.1 Đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp 51 3.2.4.2 Xác định độ thu hồi 55 3.2.5 Các sắc đồ hypophyllanthin phép đo HPLC 60 KẾT LUẬN 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AOAC Tên đầy đủ Tên tiếng anh Hiệp hội hóa học phân Association of tích Analytical Chemists ACN Axetonitrin Acetonitril MeOH Metanol Methanol FLD Detector huỳnh quang Fluorescence detector LOD Giới hạn phát Limit of detection LOQ Giới hạn định lƣợng Limit of quantitation MW Khối lƣợng phân tử Molecular weight HPLC Sắc ký lỏng hiệu High cao NP-HPLC Performance Liquid Chromatography Sắc ký hấp phụ pha Normal thƣờng Official phase – performance High liquid chromatography RP-HPLC Sắc ký hấp phụ pha đảo Reversed phase performance chromatography Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn – High liquid C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Cách pha dung dịch chuẩn 36 Bảng 3.1: Số liệu NMR hợp chất 42 Bảng 3.2: Diện tích píc hypophyllanthin tƣơng ứng với nồng độ chuẩn 47 Bảng 3.3: Kết tính độ lệch chuẩn 10 phép đo lặp lại xác định diện tích píc hypophyllanthin 49 Bảng 3.4: Kết phân tích hàm lƣợng trung bình hypophyllanthin mẫu chế phẩm 51 Bảng 3.5.: Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu chế phẩm 52 Bảng 3.6: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M1 56 Bảng 3.7: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M2 56 Bảng 3.8: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M3 57 Bảng 3.9: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M4 57 Bảng 3.10: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M5 58 Bảng 3.11: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M6 58 Bảng 3.12: Kết tính tốn độ thu hồi mẫu M7 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1: Cấu trúc phyllanthin 10 Hình 1.2: Cấu trúc hypophyllanthin 10 Hình 1.3: Píc sắc ký thời gian lƣu 17 Hình 1.4: Hệ thống máy sắc ký HPLC Agilent 1100 20 Hình 2.1: Mẫu M1 34 Hình 2.2: Mẫu M2 34 Hình 2.3: Mẫu M3 34 Hình 2.4: Mẫu M4 34 Hình 2.5: Mẫu M5 34 Hình 2.6: Mẫu M6 35 Hình 2.7: Mẫu M7 35 Hình 3.1: Phổ khối lƣợng ESI-MS hợp chất .40 Hình 3.2: Phổ 1H-NMR hợp chất 41 Hình 3.3: Phổ 13C-NMR hợp chất .41 Hình 3.4: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ 0,5ppm 44 Hình 3.5: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ ppm 44 Hình 3.6: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ ppm 45 Hình 3.7: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ ppm 45 Hình 3.8: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ 10 ppm 46 Hình 3.9: Sắc đồ chuẩn hypophyllanthin có nồng độ 50 ppm 46 Hình 3.10: Đƣờng chuẩn hypophyllanthin 47 Hình 3.11: Sắc đồ mẫu M1- VRXOGA-PV 60 Hình 3.12: Sắc đồ mẫu M2- Diệp hạ châu BPV 60 Hình 3.13: Sắc đồ mẫu M3- Diệp hạ châu- DANAPHA 61 Hình 3.14: Sắc đồ mẫu M4- Chancapiedra Diệp hạ châu 61 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.15: Sắc đồ mẫu M5- Diệp hạ châu V 62 Hình 3.16: Sắc đồ mẫu M6- Diệp hạ châu phylanthus unirania 62 Hình 3.17: Sắc đồ mẫu M7- L’ANGFARM Diệp hạ châu sấy khô 63 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 56 Bảng 3.6 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M1: VRXOGA-PV TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 19.4352 20 97.176 18.88856 19.4622 20 97.311 37.89614 18.54104 19.3551 20 96.7755 38.00744 18.49594 19.5115 20 97.5575 37.93449 18.51129 19.4232 20 97.116 Cm+c Cm (ppm) 37.44058 18.00538 38.35076 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M1 là: R% n X = 97,187% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M1 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo yêu cầu phân tích Bảng 3.7 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M2: TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 19.6357 20 98.18 24.3787 19.6392 20 98.2 45.74256 26.18946 19.5531 20 97.77 44.3024 24.7012 19.6012 20 98.01 43.19751 23.53531 19.6622 20 98.31 Cm+c Cm (ppm) 42.73815 23.10245 44.0179 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M2 là: R% n X = 98,09% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M2 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo u cầu phân tích Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 57 Bảng 3.8 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M3: Diệp hạ châu DANAPHA Nồng độ (ppm) TT Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 9.7235 10 97.235 13.45883 9.7929 10 97.929 23.0864 13.31223 9.7742 10 97.742 22.8745 13.12968 9.7448 10 97.448 22.7234 12.99815 9.7252 10 97.252 Cm+c Cm (ppm) 22.6832 12.95971 23.2517 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M3 là: R% n X = 97,52% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M3 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo yêu cầu phân tích Bảng 3.9 Kết tính toán độ thu hồi Mẫu M4: Chancapiedra Diệp hạ châu TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 9.8441 10 98.441 31.31865 9.8548 10 98.548 41.29641 31.40101 9.8954 10 98.954 40.58786 30.72976 9.8581 10 98.581 41.54201 31.67631 9.8657 10 98.657 Cm+c Cm (ppm) 40.40394 30.55984 41.17345 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M4 là: R% n X = 98,64% n i 0 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 58 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M4 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo u cầu phân tích Bảng 3.10 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M5: Diệp hạ châu V TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 9.7924 10 97.924 30.46626 9.8018 10 98.018 40.0476 30.26253 9.7851 10 97.851 40.1239 30.32217 9.8017 10 98.017 39.9563 30.15337 9.8029 10 98.029 Cm+c Cm (ppm) 40.54 30.74759 40.2681 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M5 là: R% n X = 97,97% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M5 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo yêu cầu phân tích Bảng 3.11 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M6: Diệp hạ châu Phylanthus unirania TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 9.8512 10 98.51 38.93476 9.8031 10 98.03 49.0121 39.1847 9.8274 10 98.27 49.61252 39.79682 9.8157 10 98.16 50.56514 40.71764 9.8475 10 98.48 Cm+c Cm (ppm) 50.76512 40.91392 48.73786 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M6 là: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 59 R% n X = 98,29% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M6 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo u cầu phân tích Bảng 3.12 Kết tính tốn độ thu hồi Mẫu M7: L’ANGFARM Diệp hạ châu sấy khô- Đặc sản Đà Lạt TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) R% 49.3624 50 98.72 207.4304 49.4101 50 98.82 256.985 207.5927 49.3925 50 98.79 255.113 205.8947 49.2185 50 98.44 256.757 207.5308 49.2258 50 98.45 Cm+c Cm (ppm) 256.454 207.0916 256.84 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu M7 là: R% n X = 98,64% n i 0 Nhận xét: Dựa vào kết tính, độ thu hồi phép đo lặp lại mẫu M7 tiêu chuẩn AOAC hiệu suất thu hồi ngƣỡng 80- 120% Nhận thấy kết phân tích mẫu có độ đáp ứng theo yêu cầu phân tích Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 60 3.2.5 Các sắc đồ hypophyllanthin phép đo HPLC Hình 3.11: Sắc đồ mẫu M1- VRXOGA-PV Hình 3.12: Sắc đồ mẫu M2- Diệp hạ châu BPV Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 61 Hình 3.13: Sắc đồ mẫu M3- Diệp hạ châu- DANAPHA Hình 3.14: Sắc đồ mẫu M4- Chancapiedra Diệp hạ châu Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 62 Hình 3.15: Sắc đồ mẫu M5- Diệp hạ châu V Hình 3.16: Sắc đồ mẫu M6- Diệp hạ châu phylanthus unirania Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 63 Hình 3.17: Sắc đồ mẫu M7- L’ANGFARM-Diệp hạ châu sấy khô Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 64 KẾT LUẬN Trên sở nhiệm vụ đặt đề tài kết đạt đƣợc rút số kết luận sau: Đã phân lập, tinh chế xác định cấu trúc chất hypophyllanthin Chó đẻ dùng làm chất chuẩn HPLC Đã khảo sát xác định khoảng tuyến tính làm việc diện tích píc nồng độ hypophyllanthin vùng 0,5- 50 ppm Đã xây dựng phƣơng trình đƣờng chuẩn đầy đủ thể mối quan hệ diện tích píc nồng độ hypophyllanthin mẫu chuẩn với nồng độ từ 0,5- 50ppm là: y= 23.27154x - 0.781347 (R2 = 0,99999) Đã tiến hành đánh giá LOD, LOQ hypophyllanthin, kết tính tốn cho thấy LOD = 0,625 ppb, LOQ = 2,06 ppb Đã đánh giá độ phƣơng pháp phân tích qua việc xác định độ lặp lại tính tốn hiệu suất thu hồi đối tƣợng mẫu khác Kết hệ số biến động nhỏ từ 0,3046- 4,9059%; hiệu suất thu hồi đạt đƣợc từ 97,197- 98,644% Đã áp dụng kết nghiên cứu để xác định hypophyllanthin chế phẩm cho kết nhƣ sau: + Hàm lƣợng hypophyllanthin xác định đƣợc chế phẩm: STT TÊN CHẾ PHẨM VRXOGA-PV - Công ty cổ phần dƣợc phẩm Phúc Vinh Diệp hạ châu BPV- Công ty Khối lƣợng Hàm lƣợng % hypophyllanthin hypophyllanthin viên có sản xuất (mg/1viên) viên 0,9244 0,071 0,3048 0,093 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 65 cổ phần BV PHARMA Diệp hạ châu: công ty cổ phần dƣợc DANAPHA 0,2195 0,064 0,7784 0,11 0,7598 0,134 0,9978 0,179 10,326 mg/1g 1,0326% Chancapiedra Diệp hạ châu: Công ty cổ phần hóa dƣợc Việt Nam Diệp hạ châu V: Công ty TNHH Vạn Xuân Diệp hạ châu Phylanthus unirania: công ty cổ phần dƣợc phẩm 2/9- NADYPHAR L’ANGFARM Diệp hạ châu sấy khô- đặc sản Đà Lạt Từ kết thu đƣợc cho thấy áp dụng phƣơng pháp phân tích hàm lƣợng Hypophyllanthin mẫu chế phẩm với độ tin cậy cao đề nghị đƣợc áp dụng phƣơng pháp phân tích hypophyllanthin cho nhiều đối tƣợng khác Đây phƣơng pháp có nhiều ƣu điểm phân tích hypophyllanthin Nếu có thể, chúng tơi mong muốn đƣợc tiếp tục nghiên cứu để hoàn chỉnh mở rộng đề tài khác, tiếp tục đánh giá kết để so sánh đƣợc hàm lƣợng hypophyllanthin loại chế phẩm khác nhau, từ đánh giá đƣợc giá trị loài chế phẩm bổ sung số liệu vào bảng thành phần dƣợc phẩm Việt Nam Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Hồng Minh Châu (2001), Hóa phân tích, NXB Giáo dục Hồng Minh Châu, Từ Văn Mạc, Từ Vọng Nghi (2002), Cơ sở phân tích hóa học đại, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1999), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội Nguyễn Tinh Dung (2000), Hóa học phân tích, phương pháp phân tích định lượng hóa học, NXB Giáo dục Trần Tứ Hiếu (2000), Hóa học phân tích, NXB Đại học quốc gia Hà Nội Nguyễn Văn Đậu, Lƣu Hồng Ngọc, Nguyễn Đình Chung(2003), “Phân lập số hoạt chất từ chó đẻ cƣa”, Tạp chí dược học, số 9, tr.12-15 Nguyễn Văn Đậu, Trần Thị Thu Hà (2007), “Nghiên cứu hóa học thực vật chó để cƣa( Phullanthus uticulatus niruri L.)”, Tạp chí dược học, số 369 năm thứ 47, tr 15-18 Nguyễn Ngọc Hạnh, Trần Lê Quân (2004), “Khảo sát hoạt tính bảo vệ gan lignan từ Phyllanthus niruri L Trên mơ hình gây độc tế bào D-GaIN/TNF”, Tạp chí dược học, 8, tr 10-11 Nguyễn Thanh Hồng(2002), “Khảo sát thành phần lignan loài phyllanthus thuộc họ thầu dầu (Euphobiaceae)- Xác định lignan chó đẻ( Phyllanthus niruri L.)”, Tạp chí Hóa học, 40(2), tr.11-16 10 Phạm Luận (1987), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Khoa Hóa học, Trƣờng Đại học quốc gia Hà Nội 11 Nguyễn Đức Minh(2006), Sắc ký lỏng hiệu cao số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất thiên nhiên, Nhà xuất y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh, tr.49-126 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 67 12 Nguyễn Khắc Nghĩa (2000), Các phương pháp phân tích sắc ký, ĐHSP Vinh 13 Nguyễn Khắc Nghĩa (2000), Cơ sở lý thuyết phân tích, ĐHSP Vinh 14 Lê Quân (2009), Nghiên cứu tính đa dạng sinh học lồi mang tên “chó đẻ” thuộc chi phyllanthus L Tại Việt Nam, Luận văn tốt nghiệp dƣợc sỹ, ĐH Dƣợc Hà nội 15 Hồ Viết Quý (1994), Xử lý số liệu thực nghiệm, phương pháp tốn học thống kê, ĐHSP Quy Nhơn 16 Ngơ Đức Trọng(2008), Nghiên cứu hóa học nhận dạng số nhóm chất có chó đẻ cưa( Phyllanthus urinaria L., Euphorbiaceae), Luận văn thạc sỹ hóa học, Trƣờng ĐH sƣ phạm- ĐH Thái Nguyên 17 Lê Thị Thu, Lê Quang Thảo, Nguyễn Thị Kim Thanh, Trịnh Văn Lẩu(2010), “Xây dựng thẩm định phƣơng pháp HPLC định lƣợng Phyllanthin nguyên liệu”, Tạp chí kiểm nghiệm thuốc, số 3.2010, tập 8.(29), trang 11-15 18 Huỳnh Văn Trung, Đỗ Quý Sơn (2006), Xử lý thống kê số liệu thực nghiệm hóa học, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội 19 Huỳnh Ngọc Thụy(2008), Nghiên cứu dược liệu Hạ châu đắng (phyllathus amarus Schun et Thonn.), họ Thầu dầu( Euphorbiaceae), Luận án tiến sĩ dƣợc học, trƣờng đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh 20 Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng(2010), Nghiên cứu chiết tách, tinh chế số hợp chất tự nhiên đặc trung từ dược liệu để làm chất chuẩn phục vụ kiểm nghiệm dược, Báo cáo nghiệm thu đề tài cấp Bộ, Chủ nghiệm đề tài: PGS.TS Trịnh Văn Lẩu 21 Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Việt Hùng (1985), Các phương pháp sắc ký, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 68 Tiếng anh 22 A Annamalai Analysis of and P.T.V Lakshmi (2009), “HPTLC and Bioactive Phyllanthin HPLC from Different Organs of Phyllanthus amarus”, Asian Journal of Biotechnology, 1, pp.154-162 23 Anupam Sharma, Ravneet T.Singh and Sukhdev S.Handa (1993) , “Estimation of Phyllanthin and Hypophyllanthin by High Performance Liquid Chromatography in Phyllanthus amarus”, Phytochemical Analysis, 4, pp.226-229 24 Arvind K.Tripathi, Ram K Verma, Anil K Gupta, Madan M Gupta and Suman P S.Khanuja (2006), “Quantitative Determination of Phyllanthin and Hypophyllanthin in Phyllanthus Species by High-performance Thin Layer Chromatography”, Phytochemical anlysis,17, pp 394-397 25 Atul R Chopade and F J Sayyad (2015), “Pain Modulation by Lignans (Phyllanthin and Hypophyllanthin ) and Tannin (Corilagin) Rich Extracts of Phyllanthus amarus in Carrageenan-induced Thermal and Mechanical Chronic Muscle Hyperalgesia”, Phytotherapy Research, 29(8), pp.1202–1210 26 Chia-Chuan Chang, Yu-Chin Lien (2003), “Four lignans were isolated from Phyllanthus urinaria L” , Phytochemistry, 63(7), pp.825-833 27 Deb S, Mandal S.K (1996), “TLC-densitometric determination of Phyllanthin and Hypophyllanthin in Phyllanthus amarus (Bhumiamalaki) and in polyherbal formulations”, Indian Drugs, 33, pp.415–416 28 Hongyan Fan, Wei Zhang, Jing Wang, Mengying Lv, Pei Zhang, Zunjian Zhang & Fengguo Xu (2015), “HPLC–MS/MS method for the determination of four lignans fromPhyllanthus urinaria L in rat plasma and its application”, Bioanalysis,7(6), pp.701-712 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 69 29 K M Nitnaware, D G Naik , T D Nikam (2011), “Thidiazuroninduced shoot organogenesis and production of hepatoprotective in Phyllanthus amarus”, lignan Phyllanthin and Hypophyllanthin Plant cell tiss Organ Cult,104, pp 101- 110 30 Murali B., Amit A., Anand M S., Dinesh T K., Samiulla D S (2001), “An improved HPLC method for estimation of Phyllanthin and Hypophyllanthin in Phyllanthus amarus”, Journal of Natural Remedies ,1(1), pp 55-59 31 Naphassamon Sukhaphirom, Nontima Chirdchupunseree, Pornpen Pramyothin Vardhanabhuti, Hemvala and (2013), “Phyllanthin and Hypophyllanthin Suree Jianmongkol inhibit function of P-gp but not MRP2 in Caco-2 cells”, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 65(2), pp.292–299 32 Parvathaneni, Madhukiran; Battua, Ganga Rao; Jangiti, Ravikumar; Keerthana Diyya (2014), “Pharmacokinetic study of Phyllanthin and Hypophyllanthin after oral administration to rats”, Pharmacognosy Journal, 6(2), pp.124-130 33 R Srirama, H B Deepak, U Senthilkumar, G Ravikanth, B R Gurumurthy, M B Shivanna, C V Chandrasekaran, Amit Agarwal, and R Uma Shaanker (2012), “Hepatoprotective activity of Indian Phyllanthus”, Pharmaceutical Biology, 50(8), pp 948–953 34 S.G.Bhope, V.V.Kuber, D.H Nagore, P.S.Gaikwad, and M.J.Patil (2013), “Development and Validation of RP-HPLC Method for Simultaneous Analysis of Andrographolide, phyllanthin , and hypophyllanthin from Herbal Hepatoprotective Formulation”, Acta chromatographica, 25, pp.159-169 35 Srivastava P , Raut H N , Puntambekar H M , Desai A C.(2015), Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn
Ngày đăng: 21/08/2023, 01:04
Xem thêm:
