Xác định hàm lượng vitamin e trong một số mẫu thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (hplc

NGUYỄN THỊ DUNG Xác định hàm lƣợng Vitamin E số mẫu thực phẩm phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Nguyễn Thị Dung Khóa : 49K - Hóa Thực Phẩm MSV : 0852040434 Ngành : Công nghệ thực phẩm 1.Tên đề tài : Xác định hàm lƣợng Vitamin E số mẫu thực phẩm phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: - Nghiên cứu tính chất vật lý, hóa học phƣơng pháp định tính, định lƣợng Vitamin E - Nghiên cứu quy trình tách, chiết Vitamin E mẫu thực phẩm - Nghiên cứu quy trình định lƣợng Vitamin E phƣơng pháp HPLC Cán hƣớng dẫn : ThS Lê Thế Tâm Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2012 Ngày hoàn thành đồ án Ngày tháng năm 2012 : Ngày tháng năm 2012 Chủ nhiệm môn Cán hƣớng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký, ghi rõ họ tên) ii Sinh viên hoàn thành nộp đồ án vào ngày tháng năm 2012 Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc - BẢN NHẬN XẾT TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Nguyễn Thị Dung Khóa : 49K - Hóa Thực Phẩm MSV : 852040434 Ngành : Công nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn : Cán duyệt ThS Lê Thế Tâm : Nội dung nghiên cứu, thiết kế: Nhận xét cán hƣớng dẫn: Ngày iii tháng năm 2012 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc - BẢN NHẬN XẾT TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Nguyễn Thị Dung Khóa : 49K - Hóa Thực Phẩm MSV : 0852040434 Ngành : Công nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn : Cán duyệt ThS Lê Thế Tâm : Nội dung nghiên cứu, thiết kế: Nhận xét cán duyệt: Ngày tháng năm 2012 Cán duyệt iv C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an (Ký, ghi rõ họ tên) v Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an LỜI CẢM ƠN Luận văn đƣợc thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trƣờng, Trƣờng Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn ThS Lê Thế Tâm – Khoa Hóa Học, Trƣờng Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình ngiên cứu hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa HọcTrƣờng Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình làm thí nghiệm, phân tích kết Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, cán tổ hóa Thực Phẩm, Khoa Hóa Học, Gia Đình, bạn bè động viên gúp đỡ tơi hồn thành luận văn Nghệ An, tháng 12 năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thị Dung MỤC LỤC vi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an LỜI CẢM ƠN ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tƣợng nghiên cứu CHƢƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu vitamin 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Đặc điểm chung phân loại 1.2 Tổng quan vitamin E 1.3 Tính chất vitamin E 13 1.3.1 Tính chất vật lý 13 1.3.2 Tính chất hóa học 14 1.3.3 Tính chất chống viêm 15 1.4 Chức vitamin E 15 1.5 Nhu cầu sử dụng vitamin E 22 1.6 Sự chuyển hóa- biến đổi vitamin E 23 1.7 Phƣơng pháp phân tích 26 1.7.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng 26 Hình 1.7 : Sơ đồ sắc ký lỏng hiệu cao 28 CHƢƠNG : PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 CHƢƠNG 3: KỸ THUẬT THỰC NGHIỆM 31 3.1 Thiết bị ,dụng cụ hóa chất ,dung dịch chuẫn 31 3.2 Kỹ thuật thực nghiệm 34 3.2.1 Sơ đồ xử lý chất chuẩn 34 3.2.2 Sơ đồ xử lý mẫu 34 CHƢƠNG : TÍNH KẾT QUẢ 37 4.1 Xác định khoảng tuyến tính định lƣợng mẫu 37 vii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 4.2 Xác định hàm lƣợng chuẩn a –tocopherol mẫu mẫu thực phẩm 39 4.3 Xác định độ lặp lại phƣơng pháp 43 4.4 Đánh giá hiệu suất thu hồi phƣơng pháp 43 CHƢƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 5.1 Kết luận 45 5.2 Đề xuất 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 viii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.2.1 Hàm lƣợng tocopherol số loại dầu thực vật Bảng 1.2.2 Hàm lƣợng -tocopherol, γ-tocopherol số loại thực phẩm khác: Bảng 1.2.3 Hàm lƣợng tocopherol số loại thực phẩm ( RDA: Hàm lƣợng vitamin E cho phép sử dụng) 10 Bảng 1.5.1 Nhu cầu RRR-alpha-tocopherol ( D-alpha-tocopherol) độ tuổi 22 Bảng 1.6.1 Độ bền tocopherol trình chiên rán nhiệt độ cao 24 Bảng 1.6.2 Hàm lƣợng vitamin E số thực phẩm thị trƣờng 25 Bảng 1.7.1 Các loại cột thông dùng 28 Bảng 4.1 Diện tích peak α-tocopherol tƣơng ứng với nồng độ chuẩn 39 Bảng 4.2 Kết phân tích hàm lƣợng α-tocopherol mẫu xốt trứng gà , bơ, sữa Anmum Materna, sữa frisomum Gold 40 Bảng 4.3.1 Kết xác định độ lặp phƣơng pháp 43 Bảng 4.4.1 Kết xác định hiệu suất thu hồi phƣơng pháp 44 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.7 : Sơ đồ sắc ký lỏng hiệu cao 28 Hình 3.1 Mẫu bơ sốt trứng gà tƣơi 34 Hình 3.2 Mẫu sữa bột Anmum Materna Frisomum Gold 35 Hình 4.1.1 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 10ppm 37 Hình 4.1.2 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 20ppm 38 Hình 4.1.3 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 50 ppm 38 Hình 4.1.4 Đƣờng chuẩn biểu thị mối quan hệ giửa diện tích peak nồng độ chuẩn a –tocopherol 39 Hình 4.2.1 Sắc đồ mẫu Xốt trứng gà tƣơi 40 Hình 4.2.2 Sắc đồ mẫu bơ 41 Hình 4.2.3 Sắc đồ mẫu sữa Frisomum Gold 41 Hình 4.2.4 Sắc đồ mẫu sữa AnmumMaterna 42 Hình 4.2.5 Sắc đồ mẩu bơ thêm chuẩn 42 ix Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT GC : Sắc ký khí MS : Sắc ký khối phổ GC-MS : Sắc ký khí khối phổ UV – VIS : ultraviolet – spectrophotometer RDA : Hàm lƣợng vitamin E cho phép sử dụng IU : đơn vị quốc tế dể đánh giá hoạt tính vitamin E chế phẩm thƣơng mại thị trƣờng PUFA : hàm lƣợng axit béo khơng bảo hịa thể BPC : Sắc ký pha liên kết LLC : Sắc ký lỏng – lỏng x Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an c Hóa chất: - Nƣớc cất - N- hexan -Axit ascobic - Kali hydroxit - Natri sunfat khan - 1,4 dioxan phải loại tinh khiết phân tích đạt tiêu chuẩn cho HPLC; Chất chuẩn (  )-α-tocopherol-synthetic,  96% (HPLC) d Dung dịch chuẫn Chất chuẩn gốc: α-tocopherol  96% Bảo quản: Chuẩn gốc bảo quản 20C đến 80C, hạn sử dụng dựa theo khuyến cáo nhà sản xuất Tất dung dịch chuẩn phải đƣợc chuẩn bị trƣớc phân tích - Dung dịch chuẩn gốc 100 μg/ml: Cân 10mg (±0.1mg) chất chuẩn αtocopherol  96% (M(C29H50O2)=430,7 g/mol) vào bình định mức 100 ml, hịa tan định mức đến vạch n-hexan - Dung dịch chuẩn 10 µg/ml : hút xác ml dung dịch chuẩn gốc 100 µg/ml vào bình định mức 10ml Định mức đến vạch dung dịch pha động - Dung dịch chuẩn 20 µg/ml : Hút xác ml dung dịch chuẩn gốc 100 µg/ml vào bình định mức 10ml Định mức đến vạch dung dịch pha động - Dung dịch chuẩn 50 µg/ml : Hút xác ml dung dịch chuẩn gốc 100 µg/ml vào bình định mức 10ml Định mức đến vạch dung dịch pha động Thu dịch lọc vào vial dùng cho HPLC , bơm vào máy có ghi ký hiệu mẫu chuẩn 33 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.2 Kỹ thuật thực nghiệm 3.2.1 Sơ đồ xử lý chất chuẩn Chất chuẩn α-tocopherol  96% (HPLC) Định mức 100ml pha động Cân xác 10mg Bơm qua đầu lọc Dung dịch Chất chuẩn bơm vào HPLC 3.2.2 Sơ đồ xử lý mẫu Hình 3.1 Mẫu bơ sốt trứng gà tƣơi 34 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Siêu âm 15 phút Pha dảy chuẩn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Mẫu bơ xốt trứng gà tƣơi Cân xác 2g loại mẫu Trộn mẫu với natri sunfat khan Loại bỏ dung môi quay Hịa tan phần cặn, định mức 25ml Lọc bỏ chất rắn, rữa Thêm n-hexan Siêu ân phút Dung dịch Bơm qua đầu lọc Mẫu bơm vào HPLC Hình 3.2 Mẫu sữa bột Anmum Materna Frisomum Gold 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Sữa bột 2g KOH+0,5g axit ascorbic+30ml MeOH Xà phịng hố Dung dịch phía dƣới Đun cách thuỷ 30 phút Lắc rung hồ tan dung dịch 30 phút Loại bỏ Chiết lần với nhexan: lắc 1h để yên 1h chiết 40ml n- hexan Để nguội Giữ lại Dung dịch phía 100ml H2O cất đề ion Chiết với nƣớc: lắc 45phút, để yên 45phút chiết Dung dịch phía Giữ lại Loại bỏ Dung dịch phía dƣới Thử quỳ khơng cịn màu xanh Lọc qua phễu có Na2SO4 khan Mẫu bơm vào HPLC Cất quay chân không đến cô cạn MeOH định mức Dung dịch Màng lọc 36 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƢƠNG : TÍNH KẾT QUẢ 4.1 Xác định khoảng tuyến tính định lƣợng mẫu Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng α-tocopherol dựa đánh giá thơng số, tính tƣơng thích hệ thống, tính đặc hiệu, thời gian lƣu, khoảng tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lƣợng đƣợc đối chiếu với pic dung dịch chuẩn gốc Qua tham khảo tài liệu tiến hành khảo sát yếu tố thực nghiệm xây dựng đƣợc điều kiện phân tích HPLC nhƣ sau: Điều kiện tiến hành sắc ký: */ Cột sắc ký: cột Lichrospher 100RP – 18 ( µm ) */ Nhiệt độ lò cột : 300C */ Pha động : 1,4 dioxan / n –hexan = 1,2 / 98,8 */ Bƣớc sóng đầu dò : 293 – 326 nm */ Tốc độ dịng : 0,5ml/ phút */ Thể tích bơm : 10ml Kết đo phổ chuẩn α-tocopherol nồng độ khác Hình 4.1.1 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 10ppm 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 4.1.2 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 20ppm Hình 4.1.3 Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 50 ppm Dãy chuẩn α-tocopherol đƣợc khảo sát có nồng độ nhƣ sau : 10; 20 ;50; (ppm) Tiến hành chạy máy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) từ kết thu 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an đƣợc chúng tơi xây dựng phƣơng trình hồi quy đƣờng chuẩn α-tocopherol theo diện tích peak có dạng nhƣ sau: R2 = 0,9996 y = 59,647x + 59,647 Bảng 4.1 Diện tích peak α-tocopherol tƣơng ứng với nồng độ chuẩn Nồng độ chuần Diện tic pic 10ppm 632,09131 20ppm 1276,98425 50ppm 3031,81055 A b R2 59,647 59,647 0,9996 3500 y = 59,647x + 56,372 R2 = 0,9996 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 10 20 30 40 50 60 Hình 4.1.4 Đƣờng chuẩn biểu thị mối quan hệ giửa diện tích peak nồng độ chuẩn a –tocopherol 4.2 Xác định hàm lƣợng chuẩn a –tocopherol mẫu mẫu thực phẩm Từ giá trị diện tích peark đo đƣợc ta tính đƣợc hàm lƣợng C (mg/g) Sau ta tính hàm lƣợng a –tocopherol (mg/g) có mẫu theo cơng thức sau : C = (C0/ m) Vdm.f Trong đó: C: Nồng độ a –tocopherol có mẫu tính (mg/g) C0: Nồng độ a –tocopherol dịch chiết từ đƣờng chuẩn, tính theo ppm Vdm: Thể tích bình định mức f: Hệ số pha lỗng ( có ) 39 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an m: Khối lƣợng mẫu (g) Bảng 4.2 Kết phân tích hàm lƣợng α-tocopherol mẫu xốt trứng gà , bơ, sữa Anmum Materna, sữa frisomum Gold Khối lƣợng Mẫu Các mẫu C0 (ppm) mẫu (mg) Diện tich pic C (mg/g) Bơ 5.44835 2,0012.103 481,84274 0,067901 Xốt trứng gà tƣơi 7.98866 2,0013.103 678,94958 0,099843 AnmumMaterna 2,94992 5,0016.103 204,50304 0,0589984 19,92950 5,0011.103 1230,95935 0,039859 Frisomum Gold Hình 4.2.1 Sắc đồ mẫu Xốt trứng gà tƣơi 40 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 4.2.2 Sắc đồ mẫu bơ Hình 4.2.3 Sắc đồ mẫu sữa Frisomum Gold 41 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 4.2.4 Sắc đồ mẫu sữa AnmumMaterna Hình 4.2.5 Sắc đồ mẩu bơ thêm chuẩn 42 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 4.3 Xác định độ lặp lại phương pháp Theo lý thuyết thống kê, đại lƣợng đặc trƣng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% (RSD) Thực phân tích g mẫu, lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phƣơng pháp đƣợc ghi bảng 3.3.1 Bảng 4.3.1 Kết xác định độ lặp phương pháp Hàm lƣợng α-tocopherol TT Khối lƣợng (g) 5,0080 2,94992 5,0028 2,88121 5,0012 2,91263 (ppm) Độ lệch chuẩn: S = 0,0325 Độ lệch chuẩn tƣơng đối: RSD(%) =1,1608% - Giá trị trung bình hàm lƣợng α-tocopherol mẫu tính theo cơng thức Xtb= n x n i 1 n Độ lệch chuẩn: S= (x i 1 i  xtb ) n 1 Độ lệch chuẩn tƣơng đối: CV(%) = S  100 xtb Trong Đó: Xi nồng độ α-tocopherol lần chạy thứ i Xtb nồng độ trung bình n lần chạy n số lần chạy lặp lại 4.4 Đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp Độ thu hồi phƣơng pháp đƣợc xác định cách tiến hành phân tích lần lặp lại mẫu đƣợc tiến hành tách chiết theo quy trình xử lý phân tích mẫu với nồng độ thêm chuẩn 10 ppm Kết thu đƣợc ghi bảng 3: Hiệu suất thu hồi đƣợc xác định theo công thức sau: 43 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Cm - Cs+m H = x CS0 m x 100% Trong đó: Cm: Hàm lƣợng α-tocopherol có mẫu có thêm chuẩn (ppm) Cs + m::Hàm lƣợng α-tocopherol có mẫu khơng thêm chuẩn (ppm) Cso: Hàm lƣợng chuẩn α-tocopherol cho vào mẫu (ppm) Bảng 4.4.1 Kết xác định hiệu suất thu hồi phương pháp Mẫu Số lần m (mg) Cm Cs+m Cso.10-3 1 2,0012.103 0,068084 2,0016 103 0.080087 10 98,6 2,0021.103 0,080114 10 97,5 2,0017 103 0,080098 10 96,5 H% Qua kết phân tích cho thấy, hiệu suất thu hồi cao, tỷ lệ % trung bình tìm thấy chất phân tích Htb (%) = 97,53 %, đáp ứng yêu cầu phân tích 44 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƢƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Căn vào nhiệm vụ đề tài luận văn hoàn thành đƣợc nhửng nhiệm vụ sau: + Về lý thuyết: - Lý thuyết phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp - Lý thuyết chung vitamin E + Về thực nghiệm: - Nghiên cứu quy trình xác định hàm lƣợng α-tocopherol số thực phẩm - Đã định lƣợng đƣợc hàm lƣợng α-tocopherol sữa, bơ, nƣớc sốt 5.2 Đề xuất Vấn đề sử dụng vitamin E điều trị bệnh thiếu vitamin E, thực phẩm nhƣ sản phẩm từ rau quả, đƣợc coi tiến khoa học công nghệ áp dụng y học đời sống sức khỏe Tuy nhiên không nên lạm dụng xem thƣờng cách sử dụng vitamin E mà dẫn đến biến tính xảy Chúng ta biết đƣợc triệu chứng xảy thừa thiếu vitamin E mục 1.2.7 Để bảo tồn đƣợc lƣợng vitamin E nhiều thực phẩm : - Chọn mua hoa rau tƣơi Nếu bạn mua đƣợc rau trực tiếp từ ngƣời nông dân trồng rau lý tƣởng loại rau tồn lại sau nhiều ngày bán lƣợng lớn vitamin E Cịn nhƣ khơng thể chắn độ tƣơi rau quả, dành ƣu tiên cho sản phẩm đơng lạnh đóng hộp Tuy q trình chế biến đóng hộp đơng lạnh làm hao hụt phần lƣợng vitamin, nhƣng lƣợng có cịn nhiều so với rau héo úa - Bảo quản rau nơi khơng có ánh sáng nhiệt độ thấp (tủ lạnh) nhằm tránh hao hụt vitamin E - Không nên chế biến kỹ hoa rau củ Tuy nhiên điều không áp dụng với tất loại thực phẩm 45 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an - Nếu có thể, sử dụng thực phẩm tƣơi chế biến ngày, trình cấp rã đông nguyên nhân gây hao hụt vitamin - Để nguyên phần vỏ chế biến rau củ phần lớn chất dinh dƣỡng nằm phía dƣới lớp vỏ - Nấu rau thời gian ngắn có thể, đủ để vừa chín tới thơi nấu kỹ rau cách nhanh để phá huỷ lƣợng vitamin E Có nghiều cơng ty sản xuất loại thuốc chức chứa hàm lƣợng vitamin E công ty nƣớc sản xuất nhập khẩu, ngƣời tiêu dùng khó tự nhận biết, phân biệt đƣợc chất lƣợng, vậy, có doanh nghiệp lợi dụng điều để quảng cáo, ghi nhãn khơng với chất lƣợng sản phẩm Thậm chí đƣa thị trƣờng sản phẩm chất lƣợng thấp kém.Vì quyền lợi, ngƣời tiêu dùng nhiều lần đƣa kiến nghị thắc mắc đến quan chức năng, doanh nghiệp sản xuất chất lƣợng thật sản phẩm Tuy nhiên, tới chƣa có chế tài xử phạt doanh nghiệp sản xuất làm ăn gian dối, làm giảm uy tín doanh nghiệp làm ăn đáng ngang nhiên móc túi Cần phải tăng cƣờng kiểm sốt chất lƣợng vệ sinh an tồn thực phẩm, quy trình sản xuất sản phấm thuốc nhƣ loại sản phẩm có chứa nhiều vitamin E Cần nghiên cứu lƣợng vitamin E diện rộng sản phẩm thực phẩm khác để từ có lựa chọn đắn 46 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn