Nghiên cứu định lượng các vitamin b2, c và e trong nấm lớn ở vùng bắc trung bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao hplc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ NGỌC MAI NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG CÁC VITAMIN B2, C VÀ E TRONG NẤM LỚN Ở VÙNG BẮC TRUNG BỘ BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA PHÂN TÍCH NGHỆ AN - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ NGỌC MAI NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG CÁC VITAMIN B2, C VÀ E TRONG NẤM LỚN Ở VÙNG BẮC TRUNG BỘ BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Chun ngành: HĨA PHÂN TÍCH Mã số: 60.14.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA PHÂN TÍCH Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN ĐÌNH THẮNG NGHỆ AN - 2014 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm - Trung tâm thực hành thí nghiệm - Trường Đại Học Tác giả xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Phó Giáo sư - Tiến sĩ Trần Đình Thắng, người giao đề tài, tận tình bảo, hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo Th.S Hồng Văn Trung – Khoa Hóa Học – Trường Đại học Vinh giúp đỡ bảo tận tình cho tơi hồn thành luận văn Tác giả xin chân thành cảm ơn Hội đồng khoa học – khoa Hóa trường Đại học Vinh, thầy giáo, cô giáo trực tiếp giảng dạy lớp cao học 20 truyền đạt kiến thức quý báu cho làm tảng để thực luận văn Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu – Các phòng ban – Trung tâm thực thí nghiệm trường Đại học Vinh tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trường học tập khoa học Và cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, người thân bạn bè động viên, cổ vũ, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình học tập nghiên cứu hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Vinh, ngày tháng 10 năm 2014 Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Mai MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm 1.1.1 Giới thiệu nấm 1.1.2 Phân loại nấm 1.1.3 Tổng quan vitamin nấm 1.1.4 Tầm quan trọng nấm 1.2 Giới thiệu vitamin – Vitamin B2, vitamin C vitamin E 1.2.1.Giới thiệu vitamin 1.2.2 Vitamin B2 1.2.2.1 Lịch sử 1.2.2.2 Cấu trúc vitamin B2 1.2.2.3 Tính chất vitamin B2 1.2.2.4 Chức vitamin B2 11 1.2.2.5 Nhu cầu vitamin B2 11 1.2.2.6 Nguồn thực phẩm cung cấp vitamin B2 12 1.2.3 Vitamin C 13 1.2.3.1 Lịch sử 13 1.2.3.2 Cấu trúc vitamin C 14 1.2.3.3 Tính chất vitamin C 15 1.2.3.4 Chức vitamin C 16 1.2.3.5 Nhu cầu vitamin C 17 1.2.3.6 Nguồn thực phẩm cung cấp Vitamin C 18 1.2.4 Vitamin E 20 1.2.4.1 Lịch sử 20 1.2.4.2 Cấu trúc vitamin E 20 1.2.4.3 Tính chất vitamin E 22 1.2.4.4 Chức vitamin E 23 1.2.4.5 Nhu cầu vitamin E 24 1.2.4.6 Nguồn thực phẩm cung cấp Vitamin E 24 1.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 25 1.3.1 Giới thiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 25 1.3.1.1 Nguyên lý 25 1.3.1.2 Phân loại sắc ký 25 1.3.1.3 Các đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 26 1.3.2 Hệ thống HPLC 30 1.3.3 Chọn điều kiện sắc ký 31 1.3.3.1 Lựa chọn pha động 31 1.3.3.2 Lựa chọn pha tĩnh 31 1.3.3.3 Detector 34 1.3.4 Tiến hành đo sắc ký 35 1.3.4.1 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 35 1.3.4.2 Chuẩn bị dung môi pha động 35 1.3.5 Định lượng phương pháp HPLC 36 1.3.5.1 Các bước định lượng phương pháp HPLC 36 1.3.5.2 Các phương pháp định lượng 36 Chƣơng 2: PHƢƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 38 2.1 Trang thiết bị dụng cụ 38 2.2 Hóa chất 38 2.3 Thực nghiệm 39 2.3.1 Hình mẫu 39 2.3.2 Vitamin B2 40 2.3.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn vitamin B2 cho phép đo HPLC 40 2.3.2.2 Sơ đồ xử lý mẫu vitamin B2 41 2.3.2.3 Cách tiến hành 41 2.3.2.4 Điều kiện sắc ký 42 2.3.3 Vitamin C 42 2.3.3.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn vitamin C cho phép đo HPLC 42 2.3.3.2 Sơ đồ xử lý mẫu vitamin C 43 2.3.3.3 Cách tiến hành 43 2.3.3.4 Điều kiện sắc ký 44 2.3.4 Vitamin E 44 2.3.4.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn vitamin E cho phép đo HPLC 44 2.3.4.2 Sơ đồ xử lý mẫu vitamin E 45 2.3.4.3 Cách tiến hành 45 2.3.4.4 Điều kiện sắc ký 46 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 nghiên cứu định lƣợng vitamin B2 47 3.1.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn vitamin B2 47 3.1.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp phân tích 51 3.1.2.1 Giới hạn phát LOD 51 3.1.2.2 Giới hạn định lượng LOQ 52 3.1.3 Xác định hàm lượng vitamin B2 nấm 52 3.1.4 Đánh giá phương pháp 53 3.1.4.1 Đánh giá độ lặp lại phương pháp 53 3.1.4.2 Xác định độ thu hồi 55 3.1.5 Các sắc đồ vitamin B2 phép đo HPLC 56 3.2 Nghiên cứu định lƣợng vitamin C 58 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.2.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn vitamin C 58 3.2.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp phân tích 60 3.2.2.1 Giới hạn phát LOD 60 3.2.2.2 Giới hạn định lượng LOQ 61 3.3.3 Xác định hàm lượng vitamin C nấm 61 3.2.4 Đánh giá phương pháp 62 3.2.4.1 Đánh giá độ lặp lại phương pháp 62 3.2.4.2 Xác định độ thu hồi 65 3.2.5 Các sắc đồ vitamin C phép đo HPLC 66 3.3 Nghiên cứu định lƣợng vitamin E 68 3.3.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn vitamin E 68 3.3.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp phân tích 71 3.3.2.1 Giới hạn phát LOD 71 3.3.2.2 Giới hạn định lượng LOQ 72 3.3.3 Xác định hàm lượng vitamin E nấm 72 3.3.4 Đánh giá phương pháp 73 3.3.4.1 Đánh giá độ lặp lại phương pháp 73 3.3.4.2 Xác định độ thu hồi 75 3.3.5 Các sắc đồ vitamin E phép đo HPLC 76 KẾT LUẬN 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên đầy đủ Tên tiếng anh AA Axit L - ascorbic Acid ascorbic AOAC Hiệp hội nhà phân tích Association of Official Analytical hóa học thống Chemists DHAA Axit dehydro - L - ascorbic Acid dehydro ascorbic IAA Axit isoascorbic Acid isoascorbic FAD Riboflavin -5’- Flavin adenine dinucleotide adenosydiphotphat FLD Detector huỳnh quang Fluorescence detector FMN Riboflavin-5’-photphat Flavin mononucleotide HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao High performance liquid chromatography LOD Giới hạn phát Limit of detection LOQ Giới hạn định lượng Limit of quantitation MW Trọng lượng phân tử Molecular weight NP-HPLC Sắc ký hấp phụ pha thường Normal phase – High performance liquid chromatography RDA Khuyến nghị chế độ ăn Recommended dietary allowance uống RP-HPLC Sắc ký hấp phụ pha đảo Reversed phase – High performance liquid chromatography Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Vitamin khống chất Bảng 1.2: Hàm lượng vitamin B2 thực phẩm 12 Bảng 1.3: Các dấu hiệu thiếu axit ascorbic 18 Bảng 1.4: Hàm lượng vitamin C số loại rau trái 19 Bảng 1.5: Tổng hàm lượng vitamin C số loại rau trái 20 Bảng 1.6: Danh pháp vài α-tocopherol 22 Bảng 3.1: Diện tích vitamin B2 tương ứng với nồng độ chuẩn 50 Bảng 3.2: Nồng độ chuẩn vitamin B2 qua lần đo 51 Bảng 3.3: Kết phân tích hàm lượng vitamin B2 nấm 53 Bảng 3.4 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm 54 Bảng 3.5 Kết độ thu hồi mẫu nấm lỗ 56 Bảng 3.6: Diện tích vitamin C tương ứng với nồng độ chuẩn 60 Bảng 3.7: Nồng độ chuẩn vitamin C qua lần đo 61 Bảng 3.8: Kết phân tích hàm lượng vitamin C nấm 62 Bảng 3.9 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm 63 Bảng 3.10 Kết độ thu hồi mẫu nấm 01 65 Bảng 3.11: Diện tích vitamin E tương ứng với nồng độ chuẩn 70 Bảng 3.12: Nồng độ chuẩn vitamin E qua lần đo 72 Bảng 3.13: Kết phân tích hàm lượng vitamin E nấm 73 Bảng 3.14 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm 74 Bảng 3.15 Kết độ thu hồi mẫu nấm lỗ 76 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1: Cấu trúc riboflavin, FMN FAD Hình 1.2: Sản phẩm thối quang riboflavin mơi trường có tính bazơ axit 10 Hình 1.3: Chất đồng phân lập thể 2-hexenon-1,4 lactone 14 Hình 1.4: Cấu trúc hóa lập thể tocol tocotrienol 21 Hình 1.5: Pic sắc ký thời gian lưu 27 Hình 1.6: Hệ thống máy sắc ký HPLC agilent 1100 30 Hình 2.1: Mẫu Nấm 01 40 Hình 2.2: Mẫu Nấm lỗ 40 Hình 2.3: Mẫu nấm TH04 40 Hình 2.4: Mẫu HKG 406 40 Hình 2.5: Mẫu nấm HKG 401 40 Hình 3.1: Sắc đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 0,1ppm 47 Hình 3.2: Sắc đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 0,2ppm 47 Hình 3.3: Sắc đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 0,5ppm 48 Hình 3.4: Sắc đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 10ppm 48 Hình 3.5: Sắ5c đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 20ppm 49 Hình 3.6: Sắc đồ chuẩn vitamin B2 có nồng độ 50ppm 49 Hình 3.7: Đường chuẩn vitamin B2 50 Hình 3.8: Sắc đồ mẫu nấm HKG 406 56 Hình 3.9: Sắc đồ mẫu nấm HKG 401 57 Hình 3.10: Sắc đồ mẫu nấm TH04 57 Hình 3.11: Sắc đồ chuẩn vitamin C có nồng độ 5ppm 58 Hình 3.12: Sắc đồ chuẩn vitamin C có nồng độ 10ppm 58 Hình 3.13: Sắc đồ chuẩn vitamin C có nồng độ 20ppm 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 70 Hình 3.24: Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin E có nồng độ 40ppm Kết thu bảng 3.11 Bảng 3.11: Diện tích vitamin E tƣơng ứng với nồng độ chuẩn Nồng độ chuẩn Diện tích pic 97,936 121,699 10 357,460 20 969,863 40 1924,540 Từ kết xác định bảng 3.11, vẽ đồ thị phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ ta có đường chuẩn vitamin E sau: Phương trình đường chuẩn vitamin E có dạng: Y= 48,9606 x - 41,5855 Hệ số tương quan R2 = 0,9975 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 71 Hình 3.25: Đƣờng chuẩn vitamin E 3.3.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng phƣơng pháp phân tích 3.3.2.1 Giới hạn phát LOD LOD xác định dựa vào độ dốc đường chuẩn độ lệch chuẩn tính hiệu đo Trong đó: SD độ lệch chuẩn tín hiệu √ ∑ ̅ a độ dốc đường chuẩn Giá trị LOD phương pháp qua lần đo lặp lại lần nồng độ khác 2ppm; 4ppm; 10ppm; 20ppm 40ppm thể qua bảng 3.12 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 72 Bảng 3.12: Nồng độ chuẩn vitamin E qua lần đo Nồng độ Diện tích pic SD chuẩn ppm Lần Lần Lần 97,936 97,815 98,018 0,102 121,699 121,584 121,699 0,066 10 357,460 357,531 357,459 0,042 20 969,863 969,705 969,865 0,092 40 1924,540 1924,690 1924,538 0,087 SDtb 0,078 Giá trị LOD chuẩn vitamin E: 3.3.2.2 Giới hạn định lƣợng LOQ LOQ nồng độ tối thiểu chất có mẫu thử mà ta định lượng phương pháp khảo sát cho kết qủa có độ chụm mong muốn Do đó, giới hạn định lượng chuẩn vitamin E qua lần đo lặp lại lần với nồng độ khác 2ppm; 4ppm; 10ppm; 20ppm 40ppm 0,016ppm 3.3.3 Xác định hàm lƣợng vitamin E nấm Qua số liệu LOD LOQ ta thấy phương pháp có khoảng giới hạn phát khoảng giới hạn định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát hàm lượng vitamin E dạng vết có mẫu phân tích Hàm lượng vitamin E (ppm) có mẫu nấm tính theo cơng thức sau: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 73 Trong đó: C hàm lượng vitamin E có mẫu, tính theo ppm Co hàm lượng vitamin E có dịch chiết thông qua đường chuẩn, mg/l f hệ số pha lỗng (nếu có) m khối lượng mẫu thử (g) Vdm thể tích bình định mức mẫu (ml) Ta có bảng kết phân tích hàm lượng vitamin E mẫu nấm Bảng 3.13: Kết phân tích hàm lƣợng vitamin E nấm Khối lƣợng Thể tích Diện tích mẫu (g) mẫu (ml) pic 1,809 15 10 46,968 1,206 Nấm lỗ 34,896 15 10 1673,659 23,264 HKG 401 40,736 15 10 1952,864 27,157 TH 04 5,873 15 10 245,967 3,915 01 92,500 15 10 4487,170 61,667 Mẫu Co (ppm) HKG 406 C (ppm) 3.3.4 Đánh giá phƣơng pháp 3.3.4.1 Đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp Thực phân tích 15g nấm, tiến hành phân tích lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lặp lại lần độ lặp lại phương pháp nêu bảng 3.14 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 74 Bảng 3.14 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm TT HKG 406 Nấm lỗ Thể Nồng Thể HKG 401 Nồng Thể Nồng TH 04 01 Thể Nồng Thể Nồng tích độ tích độ tích độ tích độ tích độ 10 1,206 10 23,264 10 27,157 10 3,915 10 61,667 10 1,226 10 23,204 10 27,196 10 3,875 10 61,695 10 1,186 10 23,297 10 27,118 10 3,966 10 61,608 1,206 23,255 27,157 3,919 61,657 SD 0,02 0,047 0,039 0,045 0,044 CV 1,66% 0,2% 0,14% 1,17% 0,07% - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm HKG 406 ∑ = 1,206 Độ lệch chuẩn: √∑ = 0,02 Hệ số biến thiên: - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm lỗ ∑ = 23,255 Độ lệch chuẩn: √∑ = 0,047 Hệ số biến thiên: - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm HKG 401 ∑ = 27,157 Độ lệch chuẩn: √∑ = 0,039 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 75 Hệ số biến thiên: - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm TH04 ∑ = 3,919 Độ lệch chuẩn: √∑ = 0,046 Hệ số biến thiên: - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin E mẫu nấm HKG 01 ∑ = 61,657 Độ lệch chuẩn: √∑ = 0,044 Hệ số biến thiên: Nhận xét: Theo AOAC hệ số biến thiên CV phép đo nằm khoảng ±10,5% Kết cho thấy phương pháp có độ lặp lại cao đáp ứng yêu cầu định lượng 3.3.4.2 Xác định độ thu hồi Độ thu hồi tính theo cơng thức sau: Trong đó: R% độ thu hồi, % Cm+c nồng độ chất phân tích mẫu thêm chuẩn Cm nồng độ chất phân tích mẫu thử Cc nồng độ chuẩn thêm (lý thuyết) Ta có bảng kết độ thu hồi mẫu nấm lỗ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 76 Bảng 3.15 Kết độ thu hồi mẫu nấm lỗ TT Nồng độ (ppm) Cm+c - Cm Cc (ppm) %R 23,264 3,851 96,28% 27,118 23,264 3,854 96,33% 27,120 23,2672 3,853 96,33% Cm+c Cm 27,115 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình %R mẫu nấm lỗ là: ∑ = 96,31% √∑ Độ lệch chuẩn Hệ số biến thiên: = 0,03 = 0,03% Nhận xét: Dựa vào kết tính ta thấy độ thu hồi phép đo lặp lại 96% nằm giới hạn cho phép AOAC (96 - 108%) Điều chứng tỏ phương pháp phân tích hàm lượng vitamin E nấm có độ xác cao Đáp ứng nhu cầu phân tích 3.3.5 Các sắc đồ vitamin E phép đo HPLC Hình 3.26: Sắc đồ mẫu nấm 01 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 77 Hình 3.27: Sắc đồ mẫu nấm HKG 401 Hình 3.28: Sắc đồ mẫu nấm lỗ không thêm chuẩn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 78 Hình 3.29: Sắc đồ mẫu nấm lỗ thêm chuẩn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 79 KẾT LUẬN Trên sở nhiệm vụ đặt kết đạt rút số kết luận sau: Đã khảo sát xác định khoảng tuyến tính diện tích pic nồng độ vitamin B2 0,1-50ppm, vitamin C 5-50ppm vitamin E 2-40ppm Đã xây dựng phương trình đường chuẩn đầy đủ thể mối quan hệ diện tích pic nồng độ vitamin B2, vitamin C vitamin E Đã đánh giá LOD, LOQ cho thấy đủ tiêu chuẩn xác định lượng vết vitamin với độ lặp lại tốt giới hạn phát bé Vitamin B2 có giới hạn phát LOD 0,003; giới hạn định lượng LOQ 0,009 Vitamin C có giới hạn phát LOD 0,032; giới hạn định lượng LOQ 0,097 Vitamin E có giới hạn phát LOD 0,0053; giới hạn định lượng LOQ 0,016 Đã áp dụng kết nghiên cứu để xác định ba loại vitamin B2, vitamin C vitamin E nấm cho kết sau: + Hàm lượng vitamin B2 xác định nấm HKG 406 1,135ppm; nấm lỗ 1,060ppm; nấm HKG 401 1,590ppm; nấm TH 04 0,525ppm nấm 01 0,750ppm + Hàm lượng vitamin C xác định nấm HKG 406 3,3810ppm; nấm lỗ 137,773ppm; nấm HKG 401 106,563ppm; nấm TH 04 45,393ppm nấm 01 40,228ppm + Hàm lượng vitamin E xác định nấm HKG 406 1,206ppm; nấm lỗ 23,264ppm; nấm HKG 401 27,157ppm; nấm TH 04 3,915ppm nấm 01 61,667ppm Từ kết thu tơi thấy áp dụng phương pháp phân tích hàm lượng vitamin B2, C E mẫu nấm với độ tin cậy cao đề Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 80 nghị áp dụng phương pháp phân tích vitamin B2, vitamin C vitamin E cho nhiều đối tượng thực phẩm khác Đây phương pháp có nhiều ưu điểm phân tích vitamin B2, vitamin C vitamin E Nếu có thể, mong muốn tiếp tục nghiên cứu để hoàn chỉnh mở rộng đề tài khác, tiếp tục đánh kết để so sánh hàm lượng vitamin loài nấm khác từ đánh giá giá trị loài nấm bổ sung số liệu vào bảng thành phần thực phẩm Việt Nam Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn Quốc gia, Trung tâm khuyến nông Quốc gia (2008), Nấm ăn sở khoa học công nghệ nuôi trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hồng Minh Châu (2001), Hóa phân tích, NXB Giáo dục Hồng Minh Châu, Từ Văn Mạc, Từ Vọng Nghi (2002), Cơ sở phân tích hóa học ại, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1999), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội Nguyễn Tinh Dung (2000), Hóa học phân tích, c c ph ơng ph p phân tích ịnh l ng hóa học, NXB Giáo dục Nguyễn Bá Hai (2009), Bài giảng kỹ thuật trồng nấm, Trường ĐH Nông lâm Huế Trần Tứ Hiếu (2000), Hóa học phân tích, NXB Đại học quốc gia Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Đặng Ứng Vận, Mai Xuân Trường (2007), Ph ơng ph p trắc quang ịnh l ng ồng thời vitamin B1, B2, B3, B6, B12 vitamin PP hỗn h p theo ph ơng ph p lọc KALMAN, Tạp chí phân tích hóa lý sinh học, tập 12 (2), p.21-24 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam tập I, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ 10 Phạm Luận (1987), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Khoa Hóa học, Trường Đại học quốc gia Hà Nội 11 Nguyễn Khắc Nghĩa (2000), C c ph ơng ph p phân tích sắc ký, ĐHSP Vinh 12 Nguyễn Khắc Nghĩa (2000), Cơ sở lý thuyết phân tích, ĐHSP Vinh 13 Hồ Viết Quý (1994), Xử lý s liệu thực nghiệm, ph ơng ph p to n học th ng kê, ĐHSP Quy Nhơn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 82 14 Tiêu chuẩn quốc gia 8276:2010, X c ịnh vitamin E sắc ký lỏng hiệu cao – Định l ng α-,β-,γ- δ- tocopherol, NXB Hà Nội 15 Tiêu chuẩn quốc gia 8975:2011, X c ịnh vitamin B sắc ký lỏng hiệu cao, NXB Hà Nội 16 Tiêu chuẩn quốc gia 8977:2011, X c ịnh vitamin C sắc ký lỏng hiệu cao, NXB Hà Nội 17 Lê Lý Thùy Trâm (2007), Bài giảng Nấm ăn vi nấm, ĐHBK Đà Nẵng 18 Huỳnh Văn Trung, Đỗ Quý Sơn (2006), Xử lý th ng kê s liệu thực nghiệm hóa học, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội 19 Lê Ngọc Tú (2002), Hóa sinh cơng nghệ, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 20 Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, 2010, Thẩm ịnh ph ơng ph p phân tích hóa học vi sinh vật, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 21 Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Việt Hùng (1985), C c ph ơng ph p sắc ký, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội 22 Trần Thị Xô (2007), Hóa sinh I, ĐHBK – Khoa Hóa ĐH Đà Nẵng Tiếng anh 23 Angelika Gratzfeld-Huesgen (1997), HPLC analysis of viatmins in tables using HPLC, Agilent technologies, publication number 5966 -0639E 24 Asser SP, Nevo E, Sokolov D, Reshetnikov S, Timor-Tismenetsky M (2000), Dietary supplements from medicinal mushrooms: diversity of types and variety of regulations, International Journal of Medicinal Mushrooms, (1), p.1-19 25 Bilal Ahmad Wani, R.H Bodha, and A.H.Wani (2010), Nutritional and medicinal imfortance of mushrooms, Journal of medicinal Plants research, vol (24), p.2598- 2604 26 Chang S.T (2008), Mushrooms as Functional Foods, Wiley 27 Chang S.T and Miles P.G (2004), Mushroom cultivaton, nutritional value, medicinal effect, and enviroment impact, Second edition, CRC press, p.1-41 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 83 28 Chang ST (1999), Global impact of edible and medicinal mushrooms on human welfare in the 21st century: nongreen evolution, International Journal of Medicinal Mushrooms, Vol 29 David A B (2003), Nutritional biochemistry of the vitamins, Second edition, Cambridge university press, p.109-384 30 George F.M Ball (2006), Vitamins in foods Analysis, Bioavailability, and Stability, Taylor & Francis group, p.149 31 Gerald Litwack (2007), Vitamins and hormomones: Vitamin E, Volume 76 ISBN: 978-0-12-373592-8, p.1-588 32 Hung K.T (2013), Development of HPLC methods for the determination of water-soluble vitamine in pharmaceuticals and for tified food products, Clemson University 33 Janos Z, Robert B.R, Donald M.C, John W.S (2007), Handbook of vitamins, Fourth edition, CRC Press, Taylor & Francis group 34 Kakon A.J, Md Bazlul Karim Choudhury, Shusmita Saha (2012), Mush is an ideal food supplement, J.Dhaka National Med.Cod Hoss, 18(01), p.58-62 35 Leo M.L Nollet (2000), Foods analysis by HLPC, Second edition, Revised and expanded, Hogeschool Gent, Ghent, Belgium 36 Malviya R, Bansal V, Pal O.P and Sharma P.K (2009), High Performance Liquid Chromatography: A short review, Journal of Global pharma Technology, ISSN 0975-8542, p.22-29 37 Pilar Vinas, Nuria Balsalobre, Carmen Lospez-Erroz, and Manuel Hernández-Córdoba (2004), Liquid Chromatographic analysis of riboflavin vitamers in foods using fluorescence detection, Department of analytical chemistry, Faculty os chemistry, University of Murcia, Murcia, Spain, Food chemitry 52 (7), p.1789-1794 38 Regina Prado Zanes Furlani, Helena T.G (2008), Analytical nutritional and Clinical Methods Vitamin B1 and B2 contents in cultivated mushrooms, Food chemitry, 106(1), p.816-819 39 Ronald R Eitenmiller, Lin Ye, Lander W.O, Jr (2006), Vitamin analysis for the health and food sciences, Second edition, CRC Press 40 Wei Yi, Xiaoqin Wu, Rihui Cao, Huacan Song, Lin Ma (2009), Biological evaluation of novel vitamin C esters as mushroom tyrosinase inhibitors, Food chemistry 117 (3), p.381-386 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn