Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ xây dựng phương pháp định lượng cefixim trong nước thải bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ LAN ANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CEFIXIM TRONG NƯỚC THẢI BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 Tài liệu môi trường học BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ LAN ANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CEFIXIM TRONG NƯỚC THẢI BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1.PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh 2.DS Trần Thị Thanh Huế Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa Phân Tích Phịng Dược lí – Viện KN thuốc TW HÀ NỘI – 2013 Tài liệu môi trường học LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, người thầy trực tiếp hướng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn đến TS Nguyễn Thị Kim Hương – Trưởng khoa Dược lý – Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương tập thể cán khoa nhiệt tình hướng dẫn tạo điều kiện cho trình thực khóa luận Đặc biệt, tơi xin chân thành cảm ơn DS Trần Thị Thanh Huế, người giúp đỡ tận tình cho tơi góp ý chân thành suốt thời gian thực khóa luận Nhân dịp tơi xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu toàn thể thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập trường thực khóa luận Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè, người ln động viên, khích lệ, tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập thực khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Lan Anh Tài liệu môi trường học MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CEPHALOSPORIN 1.1.1 Lịch sử đời, nguồn gốc 1.1.2 Công thức cấu tạo, phân loại phổ tác dụng 1.1.3 Đặc tính cephalosporin nghiên cứu .5 1.2 TỔNG QUAN VỀ CEFIXIM 1.2.1 Công thức cấu tạo 1.2.2 Tính chất lí hóa 1.2.5 Chỉ định 1.2.6 Một số phương pháp nghiên cứu định lượng cefixim 1.2.6.1 Nghiên cứu định lượng cefixim phương pháp đo quang 1.2.6.2 Nghiên cứu định lượng cefixim phương pháp HPLC 1.4 SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 10 1.4.1 Khái niệm 10 1.4.2 Nguyên tắc .10 1.4.3 Phân loại 10 1.4.4 Các thông số đặc trưng .10 1.4.5 Ứng dụng HPLC 12 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 15 2.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 15 2.2.1 Hóa chất – thuốc thử - chất chuẩn 15 2.2.2 Thiết bị - dụng cụ 16 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.3.1 Khảo sát phương pháp xử lí mẫu .17 2.3.2 Xây dựng điều kiện sắc kí .17 2.3.3 Đánh giá phương pháp 17 2.3.4 Phương pháp xử lí số liệu 18 Tài liệu môi trường học CHƯƠNG : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH .19 3.1.1 Khảo sát phương pháp xử lí mẫu .19 3.1.1.1 Lựa chọn loại dung mơi xử lí mẫu 19 3.1.1.2 Lựa chọn tỉ lệ dung môi xử lí mẫu 21 3.1.2 Khảo sát quy trình phân tích 23 3.1.2.1 Khảo sát lựa chọn cột sắc kí .24 3.1.2.2 Khảo sát thành phần pha động tốc độ dòng 25 3.1.2.3 Khảo sát thể tích tiêm mẫu .26 3.1.3 Quy trình phân tích 27 3.2.ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP .29 3.2.1.Độ thích hợp hệ thống .29 3.2.2 Độ đặc hiệu 30 3.2.3 Độ tuyến tính 32 3.2.4 Độ 34 3.2.5 Khảo sát độ xác 36 3.2.5.1 Độ lặp lại 36 3.2.5.2 Độ xác trung gian 36 3.2.6.Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) .38 3.2.6.1.Giới hạn phát 38 3.2.5.2 Giới hạn định lượng 39 3.3.BÀN LUẬN 39 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 4.1 KẾT LUẬN 42 4.2 ĐỀ XUẤT .43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu mơi trường học DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril BP 2010 The Bristist Pharmacopoeia (Dược điển Anh 2010) C18 Octadecyl DAD Diode array derector (derector chuỗi diod) HPLC High perform liquid chromatography (sắc kí lỏng hiệu cao) HPLC-MS High perform liquid chromatography –Mas Spectrometry (sắc kí lỏng khối phổ) MeOH Methanol mg miligram ml mililit PA Pro analysis (tinh khiết phân tích) SĐK Số đăng kí USP 32 The United States Pharmacopoeia (Dược điển Mỹ 34) UV - VIS Ultraviolet and visiable absorption Spectrophotometry (phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến) Tài liệu môi trường học DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Phổ tác dụng cephalosporin Bảng 1.2 Đặc tính cephalosporin nghiên cứu đề tài Bảng 3.1 Khảo sát lựa chọn dung mơi xử lí mẫu 20 Bảng 3.2 Kết khảo sát thể tích tiêm mẫu 27 Bảng 3.3 Kết độ thích hợp hệ thống 29 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ tuyến tính 33 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ 35 Bảng 3.6 Kết độ lặp lại độ xác trung gian 37 Bảng 3.7 Kết khảo sát LOD 38 Tài liệu môi trường học DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình vẽ, đồ thị Trang Hình 1.1 Cơng thức chung cephalosporin Hình 1.2 Công thức cấu tạo cefixim Hình 2.1 Hóa chất,thuốc thử, chất chuẩn, thiết bị, dụng cụ .16 Hình 3.1 Sắc kí đồ khảo sát lựa chọn dung mơi xử lí mẫu 20 Hình 3.2 Sắc kí đồ khảo sát lựa chọn lượng dung mơi xử lí mẫu 22 Hình 3.3 Khảo sát lựa chọn cột sắc kí .25 Hình 3.4 Sắc kí đồ khảo sát thành phần pha động tốc độ dịng 26 Hình 3.5 Mối liên quan thể tích tiêm mẫu diện tích pic .27 Hình 3.6 Sắc kí đồ khảo sát độ đặc hiệu: mẫu chuẩn (a), mẫu trắng (b), mẫu thử (c) 31 Hình 3.7 Phổ cefixim dung dịch thử dung dịch chuẩn 31 Hình 3.8 Sắc kí đồ khảo sát độ đặc hiệu phân tích cefixim cephalosporin khác 32 Hình 3.9.a Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ (ng/ml) diện tích pic (mAu.s) cefixim 33 Hình 3.9.b Sắc kí đồ khảo sát độ tuyến tính 34 Hình 3.10 Sắc kí đồ sát LOD 39 Tài liệu môi trường học 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Năm 1929, Alexander Fleming phát khả kháng khuẩn nấm Penicillium notatum, mở đầu cho nghiên cứu sử dụng kháng sinh Từ tới có nhiều dòng kháng sinh mạnh, phổ rộng cephalosporin, macrolid, quinolon, cloramphenicol… đời Sự đời loại thuốc kháng khuẩn kháng sinh thành tựu vĩ đại y học Các bác sĩ có loại thuốc kì diệu giá rẻ hiệu điều trị nhiễm khuẩn Kháng sinh với biện pháp vệ sinh, tiêm phịng góp phần gia tăng tuổi thọ người nhiều năm, chí nhiều thập kỉ Mỗi lần phát lồi vi khuẩn kháng thuốc, phịng thí nghiệm lại đưa loại thuốc kháng sinh mới[7], [25] Tuy nhiên theo cảnh báo WHO, loại kháng sinh công hiệu điều trị bệnh dần bị vơ hiệu hóa Trong chiến vi khuẩn người, phần thắng nghiêng phía loại vi khuẩn kháng thuốc Đây gần dấu chấm hết cho thời kì hồng kim thuốc kháng sinh [26] Từ năm 1987 khơng có loại kháng sinh phát vi khuẩn lại khơng ngừng biến đổi [25], [26] Do đó, giảm tỉ lệ kháng thuốc vi khuẩn công việc cấp bách hết Một nguyên nhân quan trọng dẫn đến vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh tồn dư nước thải đặc biệt nước thải nhà máy sản xuất kháng sinh Việc loại bỏ khơng hồn tồn kháng sinh nước thải nhà máy dẫn đến việc xả nước vào môi trường tiềm ảnh hưởng đến sức khỏe người tác động đến hệ sinh thái, tạo điều kiện cho vi khuẩn kháng thuốc nồng độ dấu vết [24] Do hướng nghiên cứu dư lượng kháng sinh, chất chuyển hóa chúng ảnh hưởng chúng lên người môi trường quan tâm ý đặc biệt nước phát triển [24], [17]…Đã có nhiều nghiên cứu định lượng kháng sinh nước thải ảnh hưởng lên động thực vật sức khỏe người [19] Tại Việt Nam vấn đề dư lượng kháng sinh nước thải quan tâm nghiên cứu định lượng kháng sinh nước thải bệnh viện [3] Công nghiệp dược phát triển mạnh với gia tăng số lượng nhà máy sản xuất Tài liệu môi trường học dược phẩm với lượng kháng sinh thải môi trường ngày nhiều Tuy nhiên lại chưa có nghiên cứu dư lượng kháng sinh nước thải nhà máy sản xuất dược phẩm Cefixim kháng sinh cephalosporin hệ có phổ rộng, có hiệu nhiều vi khuẩn kháng nhiều loại kháng sinh cephalosporin hệ 1, cephalosporin hệ 2, penicillin,… đặc biệt cefixim dùng theo đường uống – đường dùng đơn giản dễ sử dụng so với nhiều cephalosporin khác Vì mà cefixim ngày sử dụng nhiều Để góp phần kiểm sốt dư lượng kháng sinh, cụ thể kháng sinh cefixim nhà máy sản xuất dược phẩm thực đề tài: “ Xây dựng phương pháp định lượng cefixim nước thải sắc kí lỏng hiệu cao” Với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp xử lí mẫu điều kiện phân tích định lượng cefixim nước thải nhà máy sản xuất dược phẩm - Thẩm định phương pháp định lượng cefixim mẫu nước Tài liệu môi trường học 32 Hình 3.8 Sắc kí đồ khảo sát độ đặc hiệu phân tích cefixim cephalosporin khác Nhận xét: - Trên sắc kí đồ dung dịch mẫu trắng không xuất pic thời gian lưu tương ứng cefixim sắc kí đồ dung dịch chuẩn - Trên sắc kí đồ dung dịch thử xuất pic tương ứng với thời gian lưu cefixim sắc kí đồ dung dịch chuẩn - Bước sóng hấp thụ cực đại chuẩn λ = 285 nm, thử λ = 285 nm, so phổ DAD chất cho hệ số SI = 0,9902 0,990 Do kết luận phương pháp có độ đặc hiệu cao Khi phân tích hỗn hợp cephalosporin khác cefixim: - Trên sắc kí đồ phân tích cephalosporin khác khơng chứa cefixim khơng xuất pic thời gian lưu tương ứng cefixim sắc kí đồ dung dịch chuẩn - Trên sắc kí đồ phân tích cephalosporin cefixim xuất pic thời gian lưu tương ứng cefixim sắc kí đồ dung dịch chuẩn Như vậy, phương pháp đặc hiệu cao phân tích cefixim dung dịch thử có chứa hay nhiều loại cephalosporin kể 3.2.3 Độ tuyến tính Chúng tơi tiến hành khảo sát độ tuyến tính diện tích sắc kí nồng độ chất phân tích, cụ thể sau: Từ mẫu chuẩn gốc chuẩn bị phần 3.1.3 chuẩn bị mẫu chuẩn làm việc: pha loãng mẫu chuẩn gốc với nước cất để dung dịch có nồng độ từ 30 ng/ml đến 1200 ng/ml, lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiến hành sắc kí theo điều kiện chọn mục 3.1.3, thu kết sau: Tài liệu môi trường học 33 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ tuyến tính Dung dịch Nồng độ thực Diện tích pic (ng/ml) (mAu.s) 30,46 10007 60,91 16931 121,82 36312 609,10 188626 1218,20 385332 Phương trình y = 316,70x - 1838 Hệ số tương quan r = 0,99995 Hình 3.9.a Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ (ng/ml) diện tích pic (mAu.s) cefixim Tài liệu mơi trường học 34 Hình 3.9.b.Sắc kí đồ khảo sát độ tuyến tính Nhận xét: Kết khảo sát tính tuyến tính cho thấy khoảng nồng độ từ 30 ng/ml đến 1200 ng/ml có tương quan chặt chẽ nồng độ diện tích pic (hệ số tương quan r = 0,99995 0,997) 3.2.4 Độ Độ phương pháp tiến hành theo quy trình phân tích mẫu tự tạo chứa lượng hoạt chất biết Từ mẫu chuẩn gốc 50 µg/ml chuẩn bị mục 3.1.3, chúng tơi pha lỗng lần để mẫu chuẩn nồng độ 10 µg/ml Lấy mẫu chuẩn nồng độ 10 µg/ml thêm vào mẫu trắng để mẫu thử có nồng độ 60 ng/ml, 500ng/ml, 800ng/ml Mỗi nồng độ mẫu Lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiến hành phân tích theo quy trình lựa chọn phần 3.1.3 Tính lượng chuẩn thu hồi theo phương trình hồi quy xây dựng so sánh với lượng chuẩn thêm vào Kết thu bảng 3.5 Tài liệu môi trường học 35 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ Thứ tự Nồng độ Lượng Diện tích Lượng Khả mẫu thử (ng/ml) chuẩn pic chuẩn tìm thêm vào (mAu.s) lại thu hồi (µg/100ml) (%) (µg/100ml) Chuẩn 162893 1.1 60 6,24 13873 4,96 79,49 1.2 60 6,24 12791 4,62 74,04 1.3 60 6,24 11985 4,36 69,87 Trung bình 74,47 RSD (%) 6,48 2.1 500 51,99 132012 42,25 81,27 2.2 500 51,99 135313 43,29 83,27 2.3 500 51,99 125926 40,33 77,57 Trung bình 80,70 RSD (%) 3,58 3.1 800 83,18 223377 71,09 85,47 3.2 800 83,18 215313 68,55 82,41 3.3 800 83,18 209546 66,72 80,21 Trung bình 82,70 RSD (%) 3,19 Nhận xét: - Tại nồng độ 60 ng/ml, độ thu hồi 74,47 % (nằm khoảng từ 60 – 115%), RSD% = 6,48 (nằm khoảng 21%) - Tại nồng độ 500 ng/ml, độ thu hồi 80,70 % (nằm khoảng từ 80 – 110%), RSD% = 3,58 (nằm khoảng 15 %) Tài liệu môi trường học 36 - Tại nồng độ 800 ng/ml, độ thu hồi 82,70 % (nằm khoảng từ 80 – 110%), RSD% = 3,19 (nằm khoảng 15 %) Kết cho thấy phương pháp có độ đạt yêu cầu 3.2.5 Khảo sát độ xác 3.2.5.1 Độ lặp lại Độ lặp lại phương pháp tính kết phân tích mẫu độc lập điều kiện phân tích Chúng tơi sử dụng mẫu thử chuẩn bị phần 3.1.3 Tiến hành định lượng độc lập mẫu thử theo quy trình lựa chọn mục 3.1.3 Tính hàm lượng trung bình, tính RSD hàm lượng thu kết bảng 3.7 Nhận xét: Kết thử độ lặp lại phương pháp cho thấy với điều kiện phân tích chọn, độ lệch chuẩn tương đối thu khoảng 4,88% < 15% Như phương pháp có độ lặp lại đáp ứng yêu cầu 3.2.5.2 Độ xác trung gian - Chúng tơi khảo sát độ xác trung gian phương pháp sở phân tích mẫu độc lập điều kiện phân tích Chúng tơi sử dụng mẫu thử chuẩn bị phần 3.1.3 - Định lượng lần mẫu thử theo quy trình chọn phần 3.1.3, tiến hành vào ngày phân tích khác - Tính kết hàm lượng chất mẫu thử, độ lệch chuẩn, thu kết bảng 3.6 Tài liệu môi trường học 37 Bảng 3.6 Kết độ lặp lại độ xác trung gian Độ lặp lại Độ xác trung gian Chuẩn Lần Lần Lần Lần Lần Lần Chuẩn Lần Lần Lần Lần Lần Lần Diện tích pic (mAu.s) 150252 116667 127300 118239 129555 130141 119321 154624 126353 119206 129887 123073 105313 131169 Nồng độ (µg/100ml) 48,72 37,41 40,76 37,90 41,58 41,56 38,25 49,31 40,47 38,21 41,58 39,43 33,82 41,99 Thông số thống kê CTB = 39,78 (µg/100ml) SA = 1,93 RSD (%) = 4,88 CTB = 39,25 (µg/100ml) SB = 3,00 RSD (%) = 7,65 Nhận xét: Kết độ xác khác ngày có độ lệch chuẩn tương đối 7,65 % < 15% Để đánh giá kết phân tích có tương tự phân tích mẫu thử vào ngày khác, so sánh với kết phần độ lặp lại phương pháp So sánh kết thử độ lặp lại hai lần thử nghiệm sử dụng test F: FTN = Kết : FTN = = 2,42 FTN < 5,05 (FLT (0,05,5,5) =5,05) Vậy phương pháp có độ xác đạt u cầu Tài liệu môi trường học 38 3.2.6.Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 3.2.6.1.Giới hạn phát Chúng xác định LOD phương pháp dựa vào đường tuyến tính độ lệch chuẩn đáp ứng - Dung dịch thử: Từ dung dịch chuẩn 500 ng/ml (chuẩn bị phần 3.1.3), pha loãng vào mẫu trắng để có nồng độ cefixim xác khoảng 20 ng/ml Chuẩn bị mẫu - Tiến hành phân tích theo quy trình xây dựng dung dịch, ghi lại đáp ứng diện tích pic - Tính độ lệch chuẩn diện tích pic cefixim - Giới hạn phát tính theo cơng thức: LOD = Trong đó: S: Độ lệch chuẩn đáp ứng a: Độ dốc đường chuẩn Kết thu bảng 3.7 hình 3.10 Bảng 3.7 Kết khảo sát LOD Thứ tự Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn (S) Hệ số góc (a) LOD (ng/ml) Diện tích pic (mAu.s) 9912 9372 9382 7890 7818 9612 8997,7 907,721 316,70 9,46 Tài liệu môi trường học 39 Hình 3.10 Sắc kí đồ sát LOD Nhận xét: Như vậy, giới hạn phát cefixim 9,46 ng/ml 3.2.5.2 Giới hạn định lượng Giới hạn định lượng lượng nhỏ chất phân tích mẫu thử định lượng với độ độ xác thích hợp Cách xác định: LOQ = 3,3 LOD = 3,3 x 9,46 = 28,37 ng/ml Như vậy, giới hạn định lượng phương pháp 28,37 ng/ml 3.3.BÀN LUẬN Như qua nghiên cứu, xây dựng quy trình định lượng cefixim nước thải nhà máy với có mặt đồng thời cephalosporin khác Quy trình phân tích bao gồm giai đoạn xử lí mẫu giai đoạn phân tích hệ thống HPLC UV-DAD Giai đoạn xử lí mẫu bao gồm kết tủa protein loại tạp dung môi loại bỏ nhiều tạp chất mẫu nước thải, mẫu tương đối sạch, hiệu suất cao 80% Quy trình xử lí mẫu tương đối đơn giản, dễ thực hiện, chi phí thấp, áp dụng rộng rãi Tuy nhiên so sánh với SPE quy trình xử lí có hiệu suất sau xử lí thấp đặc biệt chưa làm giàu mẫu trước phân tích Phân tích hệ thống HPLC UV-DAD áp dụng rộng rãi hệ thống HPLC UV-DAD phổ biến phịng thí nghiệm Trong đó, hệ thống Tài liệu môi trường học 40 LC-MS LC-MS/MS đắt tiền chưa phổ biến Việt Nam Tuy nhiên, hệ thống LC-MS LC-MS/MS lại cho phép phân tích mẫu nước có nồng độ cefixim nhỏ thích hợp cho phân tích dư lượng kháng sinh nước thải Vì kháng sinh gây kháng thuốc vi khuẩn nồng độ dấu vết Nồng độ cefixim mẫu nước thải dao động lớn khảo sát độ tuyến tính khoảng rộng từ 30 ng/ml đến 1200 ng/ml Phương pháp xây dựng có khả định lượng cefixim mẫu nước thải có chứa cephalosporin khác cephadroxil, cefdinir, cefuroxim, ceftazidim, cefotaxim, cefoperazon Điều phù hợp với thực tế dây chuyền sản xuất cephalosporin không sản xuất đơn lẻ loại cephalosporin mà sản xuất đồng thời nhiều cephalosporin lúc cephalosporin cefixim loại kháng sinh sử dụng sản xuất nhiều Việt Nam, phương pháp áp dụng cho mẫu nước thải nhiều nhà máy khác Hiện nay, vấn đề dư lượng kháng sinh nước thải chưa quan tâm mức Ngày 28/12/2011, Bộ Tài Nguyên Môi Trường ban hành thông tư số 47/2011/TT-BTNMT quy định quy chuẩn quốc gia môi trường Ban hành kèm theo thông tư quy chuẩn kĩ thuật quốc gia nước thải công nghiệp Trong có quy định giá trị tối đa cho phép thông số ô nhiễm nước thải công nghiệp xả nguồn tiếp nhận nước thải Các thông số quy định tiêu pH, màu, nhiệt độ, oxy nước, dư lượng kim loại nặng chì, thủy ngân, đồng, kẽm,…, số chất hữu nói chung tổng lượng cyanua, tổng lượng dầu mỡ khoáng, chất bảo vệ thực vật, chất phóng xạ…[4] Dư lượng kháng sinh nước thải chưa quy định cụ thể Trong đó, với ngành công nghiệp dược phát triển mạnh mẽ nhiều nhà máy sản xuất kháng sinh đời Nhiều nhà máy nghĩ đến lợi ích trước mắt, thải trực tiếp nước thải chưa qua xử lí vào mơi trường Nguồn nước có dư lượng kháng sinh cao Tồn dư kháng sinh nước thải dẫn đến chúng có mặt nước bề mặt, nước ngầm cuối nước uống Cefixim nhiều kháng sinh khác phát triển Tài liệu môi trường học 41 dựa tác dụng sức khỏe người, chúng có tác dụng lên hệ thống sinh học nồng độ dấu vết Nguy lớn cefixim tồn dư nước thải làm cho vi sinh vật thích ứng nhiều nhiều chủng kháng thuốc phát triển vùng nước tự nhiên Tuy nhiên lại chưa có nghiên cứu đưa mức nồng độ cụ thể cefixim nước thải gây kháng thuốc vi khuẩn Jerker Fick cộng nghiên cứu nồng độ cefixim nước thải ảnh hưởng đến cá, từ đề xuất với nồng độ cefixim nước thải cao mức 6,2 µg/ml gây ảnh hưởng tiêu cực lên môi trường sức khỏe người [22] Với mức nồng độ này, phương pháp định lượng chúng tơi nghiên cứu hồn tồn định lượng Tài liệu môi trường học 42 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Qua trình thực đề tài, chúng tơi đạt kết sau:  Đã xây dựng phương pháp xử lí mẫu điều kiện phân tích định lượng cefixim nước thải nhà máy sản xuất dược phẩm  Quy trình xử lí mẫu Acid hóa mẫu thử HCl 1N đến pH khoảng 3, thử giấy thị màu pH Lấy xác ml mẫu thử ml ACN cho vào ống nghiệm, lắc xốy 30s, ly tâm 3000 vịng phút, lấy dịch phía Thêm ml diclorometan lắc phút Lấy lớp nước phía (ly tâm cần), lọc qua màng lọc 0,45 µm  Điều kiện sắc kí - Cột: Cột Luna C18 (250 x 4,6 mm; µm) - Derector DAD: λ = 285 nm - Thể tích tiêm mẫu: 200 µl - Nhiệt độ cột: 32 - Pha động: methanol – dung dịch đệm phosphat pH = 3,2 ( NaH2PO4 40 mM, chỉnh pH H3PO4) - Pha động tốc độ dòng: gradient Thời gian (phút) 10 16 18 MeOH (%) 18 45 55 18 Đệm phosphat (%) 82 55 45 82 Tốc dộ dòng (ml/phút) 1,0 1,0 0,85 0,85  Đã tiến hành thẩm định phương pháp với tiêu:  Độ thích hợp hệ thống: RSD% thời gian lưu 0,43; RSD% diện tích pic 1.1085 Tài liệu môi trường học 43  Phương pháp có độ hiệu định lượng cefixim nước thải định lượng cefixim có mặt đồng thời có cephalosporin khác mẫu: cephadroxil, cefdinir, cefuroxim, ceftazidim, cefotaxim, cefoperazon  Khoảng tuyến tính: 30 – 1200 ng/ml  Độ đúng: Nồng độ (ng/ml) 60 500 800  Độ thu hồi (%) 74,47 80,70 82,70 RSD% 6,48 3,58 3,19 Độ xác: - Độ lặp lại phương pháp RSD% = 4,88% - Độ xác trung gian +RSD% = 7,65 % + Test F:  < FTN = 0,41 < 5,05 Giới hạn phát 9,46 ng/ml, giới hạn định lượng 28,37 ng/ml 4.2 ĐỀ XUẤT - Nghiên cứu độ ổn định cefixim mẫu nước thải - Áp dụng phương pháp định lượng cefixim nước thải, phát triển phương pháp để xác định thêm cefalosporin bao gồm cephadroxil, cefdinir, cefuroxim, ceftazidim, cefotaxim, cefoperazon nước thải hoàn thiện thẩm định Tài liệu môi trường học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trần Tử An (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất y học, tr 84-110 Trần Tử An, Thái Nguyễn Hùng Thu (2006), Hóa phân tích II, Nhà xuất y học, tr 123 Dương Hồng Anh (2006), Phân tích đánh giá có mặt kháng sinh họ floquinilon nước thải bệnh viện, Đề tài nghiên cứu khoa học Trường Đại học Quốc Gia Hà Nội Bộ tài nguyên môi trường (2011), Thông tư quy định quy chuẩn kỹ thuật quốc gia môi trường Bộ y tế (2007), Dược thư quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học Bộ y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Trần Đức Hậu (2007), Hóa dược tập 2, Nhà xuất y học, trang 118-119 Từ Minh Koóng (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm tập 2: Kỹ thuật sản xuất thuốc phương pháp sinh tổng hợp, Nhà xuất y học, trang 113115 Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2007), Dược lí học tập 2, Nhà xuất y học, trang 150-152 10 Phạm Thu Trang (2011), Xây dựng phương pháp định lượng cefixime huyết tương sắc kí lỏng hiệu cao, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, tr 31- 48 Tài liệu tiếng Anh 11 AHFS drugs information 2008 12 Bristish national formulary 61, p342 13 British Pharmacopoeia 2010 14 Fick Jerker , Richard H Lindberg et al (2010),“Predicted critical environmental concentrations for 500 Toxicology and Pharmacology 58 516–523 Tài liệu môi trường học pharmaceuticals”, Regulatory 15 ICH, Validation of analytical procedures (2005): Text and Methodolody Q2(R1) 16 Khan Abbas, Zafar Iqbal et al (2011),“Simultaneous determination of cefdinir and cefixime in human plasma by RP-HPLC/UV detection method:Method development, optimization, validation, and its application to a pharmacokinetic study”, Journal of Chromatography B, 879 p2423–2429 17 Lindberga Richard, Per-Ake Jarnheimer et al (2004),“Determination of antibiotic substances in hospital sewage water using solid phase extraction and liquid chromatography/mass spectrometry and group analogue internal standards”, Chemosphere 57 1479–1488 18 Martidale thirty-six edition, p 224 19 McAteer Joy A., Mark F Hlltke et al (1987), “Liquid-Chromatographic Determination of Five Orally Active Cephatosporins-Cefixime, Cefaclor, Cefadroxil, Cephalexin, and Cephradine-in Human Serum”, CLIN CHEM 33/1 0, 1788-1 790 20 Nemutlua Emirhan, Sedef Kıra et al (2009), “Simultaneous multiresponse optimization of an HPLC method to separate seven cephalosporins in plasma and amniotic fluid: Application to validation and quantification of cefepime, cefixime and cefoperazone”, Talanta 80 p117–126 21 The scientific asociation dedicated to analytical excellence (2012), Standard Format and Guidance for AOAC Standard Method Performance Requirement (SMPR) Documents 22 The United States Pharmacopoeia 32 (2009) 23 Water analysis & research center of K water (2008), Development of multi – residual analytical method for pharmaceuticals, perfluorinated compounds, mitrosamines, hormones, persistent organic pollutants, in water volume 1, Reports on International Collaborative Research, p 151-169 24 Xu Haomin (2010), Photochemical Fate of Pharmaceuticals in Natural Waters, Dissertation submitted in partial satisfaction of the requirements for Tài liệu môi trường học the degree of doctor of philosophy in Engineering with a Concentration in Environmental Engineering, University of California, Irvine, p16 – 17 Trang web 25 Lâm An (2013), “ Ngày tận thế” thuốc kháng sinh, giới Việt Nam, địa truy cập: http://www.tgvn.com.vn/Item/VN/KhoaHoc/2013/3/C2CAAF59F6DA8B88/ 26 Hồng Nhung (2012), Con người trước thảm họa thuốc kháng sinh vô tác dụng, Người đưa tin, địa truy cập: http://www.nguoiduatin.vn/con-nguoi-truoc-tham-hoa-thuoc-khang-sinh-votac-dung-a60726.html Tài liệu môi trường học