Lê trần bình xây dựng phương pháp định lượng bilastin trong huyết tương bằng lc ms khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ TRẦN BÌNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BILASTIN TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG LC-MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ TRẦN BÌNH Mã sinh viên: 1801073 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BILASTIN TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG LC-MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Ngô Quang Trung PSG TS Lê Đình Chi Nơi thực Viện Cơng nghệ Dược phẩm Quốc Gia HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin phép gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS TS Lê Đình Chi ThS Ngơ Quang Trung, người tận tình hướng dẫn, bảo giải đáp thắc mắc giúp tơi suốt q trình thực hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới anh chị nghiên cứu viên Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia tạo điều kiện tốt cho tôi, động viên, hỗ trợ em trình học tập, nghiên cứu Viện suốt thời gian qua để hồn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô quan tâm, giúp đỡ bạn Ngô Quang Minh, Trần Ngọc Phan, người bạn khác đồng hành suốt năm tháng học tập trường Cuối cùng, xin dành biết ơn sâu sắc tới bố mẹ anh, người thân yêu gia đình ln ln ủng hộ, cổ vũ tơi chuẩn bị hành trang tốt để giúp tơi hồn thành khóa luận Một lần nữa, tơi xin cảm ơn kính chúc thầy cơ, anh chị nghiên cứu viên, bạn bè gia đình ln có sức khỏe dồi dào, ln thành cơng công việc hạnh phúc sống Hà Nội ngày 31 tháng 05 năm 2023 Sinh viên Lê Trần Bình MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bilastin 1.1.1 Cơng thức cấu tạo tính chất hóa lý 1.1.2 Các đặc tính dược lý, dược động học bilastin 1.1.3 Các phương pháp định lượng bilastin 1.2 Phân tích thuốc dịch sinh học 1.2.1 Thành phần đặc điểm huyết tương người 1.2.2 Kỹ thuật xử lý huyết tương 1.2.3 Tổng quan LC-MS/MS 1.3 Thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học 11 1.3.1 Độ chọn lọc 11 1.3.2 Đánh giá khả nhiễm chéo 11 1.3.3 Đường chuẩn khoảng tuyến tính .12 1.3.4 Giới hạn định lượng (LLOQ) 12 1.3.5 Độ đúng, độ xác 12 1.3.6 Tỷ lệ thu hồi (hiệu suất chiết) 12 1.3.7 Độ ổn định 12 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .13 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 13 2.1.1 Hóa chất - chất chuẩn 13 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ phân tích 13 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 14 2.2.1 Xây dựng phương pháp phân tích .14 2.2.2 Chuẩn bị mẫu 14 2.2.3 Thẩm định phương pháp phân tích 16 2.2.4 Phương pháp xử lý kết 21 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Kết xây dựng phương pháp phân tích 22 3.1.1 Khảo sát, xác định điều kiện sắc kí lựa chọn chuẩn nội 22 3.1.2 Kết xây dựng phương pháp định lượng huyết tương LC-MS/MS xây dựng sau 25 3.2 Kết thẩm định phương pháp phân tích 26 3.2.1 Độ phù hợp hệ thống phân tích 26 3.2.2 Độ đặc hiệu 27 3.2.3 Độ nhiễm chéo .28 3.2.4 Đường chuẩn - khoảng tuyến tính .29 3.2.5 Xác định giới hạn định lượng (LLOQ) .30 3.2.6 Độ đúng, độ xác phương pháp 31 3.2.7 Xác định tỉ lệ thu hồi 36 3.2.8 Độ ổn định 38 3.3 Bàn luận 40 3.3.1 Phương pháp định lượng bilastin 40 3.3.2 Kỹ thuật xử lý mẫu 41 3.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên ACN Acetonitril BIL Bilastin CC Đường chuẩn Cmax Nồng độ đỉnh (Maximum concentration) CT Chiết tách CV Hệ số biến thiên (Coefficient of variation) EMA ESI HQC Cơ quan quản lý thuốc Châu Âu (European medicines agency) Kỹ thuật ion hóa phun điện tử (Electrospray ionization) Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High quality control samples) HT Huyết tương IS Chuẩn nội (Internal standard) LC-MS LC-MS/MS LLE Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography - mass spectrometry) Sắc ký lỏng khối phổ hai lần (Liquid chromatography with tandem mass spectrometry) Kỹ thuật chiết lỏng - lỏng (Liquid-liquid extraction) LLOQ Giới hạn định lượng (Lower limit of quantification) LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low quality control samples) m/z Khối lượng/điện tích MeOH Methanol MQC Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Medium quality control samples) MS Khối phổ (Mass spectrometry) NMR Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear magnetic resonance) PPT Kỹ thuật tủa protein (Protein precipitation) PTHQ Phương trình hồi quy QC Mẫu kiểm tra RE Sai số dư (Residual error) RP Pha đảo (Reverse phase) Rt Thời gian lưu (Retention time) SKD Sinh khả dụng SPE Kỹ thuật chiết pha rắn (Solid-phase extraction) SQC Mẫu kiểm tra bổ sung (Supplement quality control samples) SST Mẫu kiểm tra độ thích hợp hệ thống (System Suitability Testing) STT Số thứ tự TB Trung bình TĐSH TEA TLTK tmax ULOQ US-FDA Tương đương sinh học Triethanolamin Tài liệu tham khảo Thời gian đạt nồng độ cực đại Giới hạn định lượng (Upper limit of quantification) Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (The United States Food and Drug Administration) tt Thể tích w Khối lượng (Weighting) ∑RE% Tổng phần dư độ (relative error) DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo bilastin .2 Hình 1.2 Kỹ thuật tủa protein Hình 1.3 Cấu tạo hệ thống sắc ký lỏng khối phổ Hình 1.4 Sơ đồ mơ tả ngun lý ion hóa kỹ thuật ESI 10 Hình 3.1 Phổ Scan 22 Hình 3.2 Sắc ký đồ bilastin hệ pha động 23 Hình 3.3 Sắc ký đồ bilastin IS tỷ lệ pha động 24 Hình 3.4 Sơ đồ quy trình xử lý mẫu .26 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bảng thông số dược động bilastin số nghiên cứu Bảng 1.2 Tóm tắt số phương pháp định lượng bilastin đối tượng mẫu huyết tương Bảng 1.3 Tóm tắt số phương pháp định lượng bilastin huyết tương .5 Bảng 2.1 Cách chuẩn bị đường chuẩn huyết tương .15 Bảng 2.2 Cách chuẩn bị mẫu kiểm tra huyết tương 15 Bảng 2.3 Cách chuẩn bị mẫu SST 16 Bảng 3.1 Bảng tóm tắt điều kiện ion hóa .26 Bảng 3.2 Kết đánh giá độ thích hợp hệ thống LC-MS/MS 27 Bảng 3.3 Ảnh hưởng mẫu trắng (blank) thời điểm trùng Rt bilastin IS 27 Bảng 3.4 Kết đánh giá độ nhiễm chéo 28 Bảng 3.5 Kết test F 29 Bảng 3.6 Kết xác định hệ số weighting 29 Bảng 3.7 Kết khảo sát đường chuẩn theo mơ hình weighting 1/X2 30 Bảng 3.8 Đáp ứng pic mẫu LLOQ mẫu trắng (blank) Rt bilastin 30 Bảng 3.9 Độ đúng, độ xác mẫu LLOQ 31 Bảng 3.10 Kết phân tích độ - độ xác ngày mẫu LLOQ 31 Bảng 3.11 Kết phân tích độ - độ xác ngày mẫu LQC .32 Bảng 3.12 Kết phân tích độ - độ xác ngày mẫu SQC .32 Bảng 3.13 Kết phân tích độ - độ xác ngày mẫu MQC 32 Bảng 3.14 Kết phân tích độ - độ xác ngày mẫu HQC .33 Bảng 3.15 Kết phân tích độ - độ xác khác ngày 34 Bảng 3.16 Độ đúng, độ xác pha lỗng mẫu 35 Bảng 3.17 Kết độ thu hồi nồng độ LQC 36 Bảng 3.18 Kết độ thu hồi nồng độ SQC 36 Bảng 3.19 Kết độ thu hồi nồng độ MQC 37 Bảng 3.20 Kết độ thu hồi nồng độ HQC 37 Bảng 3.21 Kết độ ổn định mẫu HT ban đầu sau thời gian ngắn nhiệt độ phòng .38 Bảng 3.22 Độ ổn định mẫu dịch sinh học lúc bắt đầu sau chu kỳ đông - rã đông39 Bảng 3.23 Kết độ ổn định mẫu ban đầu sau xử lý auto-sampler 24 .39 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, thực trạng bệnh dị ứng gia tăng khắp giới Một số nghiên cứu chứng minh gia tăng tỷ lệ mắc bệnh hen suyễn, viêm mũi dị ứng viêm da dị ứng bốn thập kỷ qua, đặc biệt trẻ em Sự gia tăng quan sát thấy nước phát triển nước phát triển, đặt gánh nặng đáng kể cho bệnh nhân, gia đình họ xã hội Những rối loạn ảnh hưởng tiêu cực tới hoạt động hàng ngày hoạt động thể chất, công việc tới tâm lý bệnh nhân [28] Histamin thụ thể đóng vai trò quan trọng phát triển bệnh dị ứng khác Từ vai trò histamin đặc biệt thụ thể H1 receptor bệnh dị ứng, thuốc kháng histamin H1 xuất [32] Thuốc kháng Histamin H1 hệ có tác dụng kháng cholinergic rõ rệt, tác dụng an thần tương tác với rượu nhiều loại thuốc Ngược lại, thuốc kháng histamin H1 hệ thứ hai gây tác dụng an thần tối thiểu không gây tác dụng kháng cholinergic khuyến cáo lựa chọn điều trị cho bệnh nhân viêm mũi dị ứng hay mề đay Bilastin thuốc kháng histamin hệ thứ hai chọn lọc Nó lần đầu phê duyệt Liên minh Châu Âu vào năm 2010 để điều trị triệu chứng viêm mũi dị ứng mề đay bệnh nhân từ 12 tuổi trở lên có mặt khoảng 100 quốc gia Gần đây, phê duyệt Châu Âu để sử dụng cho trẻ em từ đến < 12 tuổi [14] Đối với nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học, nội dung quan trọng phải xây dựng phương pháp định lượng đủ độ nhạy đủ độ tin cậy Với bilastin, trình phân tích thuốc dịch sinh học thường gặp nhiều khó khăn nồng độ thuốc mẫu thấp Nồng độ bilastin tối đa bệnh nhân dao động từ 99,1 ± 24,1 ng/ml đến 1277,9 ± 404,9 ng/ml tương ứng với liều 10 100 mg/ngày [21], mẫu dịch sinh học tương đối phức tạp, thiết bị thông thường máy quang phổ, sắc ký lỏng khơng đủ độ nhạy, thời gian phân tích kéo dài quy trình xử lý mẫu phức tạp Hiện nay, việc phối hợp kỹ thuật sắc ký lỏng phân tích khối phổ giải vấn đề độ chọn lọc, độ đặc hiệu độ nhạy phương pháp phân tích định lượng bilastin dịch sinh học nghiên cứu tương đương sinh học Vì vậy, khóa luận tiến hành đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng bilastin huyết tương LC-MS” với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng bilastin huyết tương LC-MS Thẩm định phương pháp định lượng bilastin huyết tương xây dựng Mơ hình 1/Nồng độ1/2 CC1 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 263295 1129709 0,233 0,580 1,7 0,402 0,135 0,0315 18,9 81,1 5,93 424696 1040357 0,408 0,411 2,4 0,994 0,168 14 0,0684 64,2 35,8 11,87 851922 1010227 0,843 0,290 3,4 2,905 0,245 41 0,2064 99,9 0,1 29,67 2000790 986065 2,029 0,184 5,4 11,052 0,373 162 0,7558 114,0 14,0 59,34 4123875 1080644 3,816 0,130 7,7 29,397 0,495 457 1,8905 112,8 12,8 178,03 12161174 1174497 10,354 0,075 13,3 138,156 0,776 2375 8,0353 105,6 5,6 356,05 23468118 1189011 19,738 0,053 18,9 372,433 1,046 6718 20,6457 101,6 1,6 593,42 37982764 1204060 31,546 0,041 24,4 768,457 1,295 14456 40,8504 97,8 2,2 Sum 1,764 77,3 1323,8 4,53 24229 72,4840 Slope 0,053990 r 0,9992 Intercept 0,202833 153,3 CC2 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 2,97 267807 1168296 0,229 0,580 1,7 0,395 0,133 0,0305 21,2 78,8 5,93 443730 1105891 0,401 0,411 2,4 0,977 0,165 14 0,0661 67,1 32,9 11,87 827629 1089154 0,760 0,290 3,4 2,618 0,221 41 0,1676 92,4 7,6 29,67 2016712 1064583 1,894 0,184 5,4 10,319 0,348 162 0,6588 111,4 11,4 59,34 4207446 1171127 3,593 0,130 7,7 27,675 0,466 457 1,6755 111,4 11,4 178,03 11780934 1184729 9,944 0,075 13,3 132,681 0,745 2375 7,4110 106,6 6,6 356,05 23001650 1182094 19,458 0,053 18,9 367,166 1,031 6718 20,0659 105,3 5,3 593,42 38096036 1293055 29,462 0,041 24,4 717,702 1,209 14456 35,6324 96,0 4,0 Sum 1,764 77,3 1259,5 4,32 24229 65,7078 Intercept 0,196884 r 0,9984 Slope 0,051356 PL – Accu.(%) RE(%) 158,1 CC3 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 258512 1071368 0,241 0,580 1,7 0,416 0,140 0,0338 40,8 59,2 5,93 427978 1096023 0,390 0,411 2,4 0,951 0,160 14 0,0626 68,4 31,6 11,87 833672 1091984 0,763 0,290 3,4 2,630 0,222 41 0,1692 94,1 5,9 29,67 2009250 1080894 1,859 0,184 5,4 10,125 0,341 162 0,6344 108,0 8,0 59,34 4140819 1150774 3,598 0,130 7,7 27,719 0,467 457 1,6808 109,9 9,9 178,03 12201455 1176671 10,369 0,075 13,3 138,358 0,777 2375 8,0587 109,2 9,2 356,05 23173318 1225863 18,904 0,053 18,9 356,699 1,002 6718 18,9381 100,3 0,3 593,42 38572000 1256894 30,688 0,041 24,4 747,575 1,260 14456 38,6604 98,0 2,0 Sum 1,764 77,3 1284,5 4,37 24229 68,2380 Slope 0,052447 Intercept 0,177809 r 0,9992 126,1 CC4 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 252839 1157798 0,218 0,580 1,7 0,376 0,127 0,0277 41,5 58,5 5,93 482908 1110700 0,435 0,411 2,4 1,059 0,179 14 0,0776 89,9 10,1 11,87 851351 1132806 0,752 0,290 3,4 2,589 0,218 41 0,1639 95,5 4,5 29,67 1991314 1075869 1,851 0,184 5,4 10,082 0,340 162 0,6289 108,4 8,4 59,34 4231839 1211120 3,494 0,130 7,7 26,916 0,454 457 1,5849 106,7 6,7 178,03 12010331 1230148 9,763 0,075 13,3 130,270 0,732 2375 7,1441 102,3 2,3 356,05 23837414 1211596 19,674 0,053 18,9 371,242 1,043 6718 20,5138 103,9 3,9 593,42 38220456 1244403 30,714 0,041 24,4 748,197 1,261 14456 38,7247 97,6 2,4 Sum 1,764 77,3 1290,7 4,35 24229 68,8658 Slope 0,052783 Intercept 0,153378 r 0,9994 PL – 96,8 CC5 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 275004 1219144 0,226 0,580 1,7 0,389 0,131 0,0295 51,6 48,4 5,93 491515 1061274 0,463 0,411 2,4 1,128 0,190 14 0,0881 91,9 8,1 11,87 834143 1039209 0,803 0,290 3,4 2,765 0,233 41 0,1870 93,1 6,9 29,67 2002799 1010699 1,982 0,184 5,4 10,794 0,364 162 0,7209 102,8 2,8 59,34 4282585 1097127 3,903 0,130 7,7 30,069 0,507 457 1,9780 104,8 4,8 178,03 11996637 1039257 11,543 0,075 13,3 154,022 0,865 2375 9,9868 105,7 5,7 356,05 23391254 1044132 22,403 0,053 18,9 422,721 1,187 6718 26,5975 103,2 3,2 593,42 39062952 1110299 35,182 0,041 24,4 857,050 1,444 14456 50,8123 97,4 2,6 Sum 1,764 77,3 1478,9 4,92 24229 90,4001 Slope 0,060617 Intercept 0,132650 r 82,4 0,9994 Mơ hình 1/Nồng độ CC1 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 2,97 263295 1129709 0,233 0,337 1,0 0,233 0,078 0,0183 69,2 30,8 5,93 424696 1040357 0,408 0,169 1,0 0,408 0,069 0,0281 88,4 11,6 11,87 851922 1010227 0,843 0,084 1,0 0,843 0,071 12 0,0599 110,8 10,8 29,67 2000790 986065 2,029 0,034 1,0 2,029 0,068 30 0,1388 117,1 17,1 59,34 4123875 1080644 3,816 0,017 1,0 3,816 0,064 59 0,2454 113,3 13,3 178,03 12161174 1174497 10,354 0,006 1,0 10,354 0,058 178 0,6022 104,6 4,6 356,05 23468118 1189011 19,738 0,003 1,0 19,738 0,055 356 1,0941 100,2 0,2 593,42 37982764 1204060 31,546 0,002 1,0 31,546 0,053 593 1,6769 96,3 3,7 Sum 0,650 8,0 69,0 0,52 1237 3,8638 Slope 0,054964 Intercept 0,120098 r 0,9984 PL – 10 Accu.(%) RE(%) 92,1 CC2 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 267807 1168296 0,229 0,337 1,0 0,229 0,077 0,0177 73,9 26,1 5,93 443730 1105891 0,401 0,169 1,0 0,401 0,068 0,0271 92,4 7,6 11,87 827629 1089154 0,760 0,084 1,0 0,760 0,064 12 0,0486 103,8 3,8 29,67 2016712 1064583 1,894 0,034 1,0 1,894 0,064 30 0,1210 114,5 14,5 59,34 4207446 1171127 3,593 0,017 1,0 3,593 0,061 59 0,2175 111,9 11,9 178,03 11780934 1184729 9,944 0,006 1,0 9,944 0,056 178 0,5554 105,4 5,4 356,05 23001650 1182094 19,458 0,003 1,0 19,458 0,055 356 1,0634 103,7 3,7 593,42 38096036 1293055 29,462 0,002 1,0 29,462 0,050 593 1,4627 94,4 5,6 Sum 0,650 8,0 65,7 0,49 1237 3,5135 Slope 0,052396 Intercept 0,114172 r 0,9980 78,6 CC3 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 Accu.(%) RE(%) 2,97 258512 1071368 0,241 0,337 1,0 0,241 0,081 0,0196 83,0 17,0 5,93 427978 1096023 0,390 0,169 1,0 0,390 0,066 0,0257 88,8 11,2 11,87 833672 1091984 0,763 0,084 1,0 0,763 0,064 12 0,0491 103,3 3,3 29,67 2009250 1080894 1,859 0,034 1,0 1,859 0,063 30 0,1165 110,6 10,6 59,34 4140819 1150774 3,598 0,017 1,0 3,598 0,061 59 0,2182 110,3 10,3 178,03 12201455 1176671 10,369 0,006 1,0 10,369 0,058 178 0,6040 108,1 8,1 356,05 23173318 1225863 18,904 0,003 1,0 18,904 0,053 356 1,0036 99,1 0,9 593,42 38572000 1256894 30,688 0,002 1,0 30,688 0,052 593 1,5870 96,7 3,3 Sum 0,650 8,0 66,8 0,50 1237 3,6237 Slope 0,053290 Intercept 0,109849 r 0,9987 PL – 11 64,8 CC4 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 2,97 252839 1157798 0,218 0,337 1,0 0,218 0,074 0,0161 73,7 26,3 5,93 482908 1110700 0,435 0,169 1,0 0,435 0,073 0,0319 105,2 5,2 11,87 851351 1132806 0,752 0,084 1,0 0,752 0,063 12 0,0476 102,5 2,5 29,67 1991314 1075869 1,851 0,034 1,0 1,851 0,062 30 0,1155 110,4 10,4 59,34 4231839 1211120 3,494 0,017 1,0 3,494 0,059 59 0,2057 107,0 7,0 178,03 12010331 1230148 9,763 0,006 1,0 9,763 0,055 178 0,5354 101,6 1,6 356,05 23837414 1211596 19,674 0,003 1,0 19,674 0,055 356 1,0872 102,9 2,9 593,42 38220456 1244403 30,714 0,002 1,0 30,714 0,052 593 1,5897 96,6 3,4 Sum 0,650 8,0 66,9 0,49 1237 3,6290 Intercept 0,101438 r 0,9992 Slope 0,053415 Accu.(%) RE(%) 59,4 CC5 C(ng/ml) AN IS AN/IS W Wx Wxy Wy Wx2 Wy2 2,97 275004 1219144 0,226 0,337 1,0 0,226 0,076 0,0171 81,1 18,9 5,93 491515 1061274 0,463 0,169 1,0 0,463 0,078 0,0362 105,9 5,9 11,87 834143 1039209 0,803 0,084 1,0 0,803 0,068 12 0,0543 99,6 0,4 29,67 2002799 1010699 1,982 0,034 1,0 1,982 0,067 30 0,1323 104,6 4,6 59,34 4282585 1097127 3,903 0,017 1,0 3,903 0,066 59 0,2568 105,1 5,1 178,03 11996637 1039257 11,543 0,006 1,0 11,543 0,065 178 0,7485 105,0 5,0 356,05 23391254 1044132 22,403 0,003 1,0 22,403 0,063 356 1,4096 102,2 2,2 593,42 39062952 1110299 35,182 0,002 1,0 35,182 0,059 593 2,0859 96,5 3,5 Sum 0,650 8,0 76,5 0,54 1237 4,7406 Slope 0,061329 Intercept 0,077899 r 0,9992 PL – 12 Accu.(%) RE(%) 45,8 PHỤ LỤC KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG, ĐỘ CHÍNH XÁC KHÁC NGÀY Ngày 1: PL – 13 Ngày 2: PL – 14 Ngày 3: PL – 15 Ngày 4: PL – 16 Ngày 5: PL – 17 PHỤ LỤC MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ ĐẠI DIỆN ĐỘ ĐÚNG, ĐỘ CHÍNH XÁC LLOQ PL – 18 LQC PL – 19 SQC PL – 20 MQC PL – 21 HQC PL – 22