Xây dựng phướng pháp định lượng ciprofloxacin trong huyết tương người và đánh giá tương đương sinh học chế phẩm ciprofloxacin

i H c Qu c Gia Tp H Chí Minh TR NG I H C BÁCH KHOA BÙI TH ÁNH TH XÂY D NG PH NG PHÁP NH L NG CIPROFLOXACIN TRONG HUY T T NG NG I VÀ ÁNH GIÁ T NG NG SINH H C C A CH PH M CIPROFLOXACIN Chuyên ngành: Công ngh sinh h c LU N V N TH C S TP H CHÍ MINH, tháng n m 2009 CƠNG TRÌNH C HOÀN THÀNH T I TR NG I H C BÁCH KHOA I H C QU C GIA TP H CHÍ MINH Cán b h ng d n khoa h c: PGS TS Nguy n c L ng (Ghi rõ h , tên, h c hàm, h c v ch ký) Cán b ch m nh n xét 1: (Ghi rõ h , tên, h c hàm, h c v ch ký) Cán b ch m nh n xét 2: (Ghi rõ h , tên, h c hàm, h c v ch ký) Lu n v n th c s cb ov t iH I NG CH M B O V LU!N V"N TH C S# TR NG I H C BÁCH KHOA, ngày 19 tháng n m 2009 TR C NG HÒA XÃ H I CH NGH A VI T NAM C L!P – T$ DO – H NH PHÚC NG I H C BÁCH KHOA PHÒNG ÀO T O S H Tp HCM, ngày tháng n m 2009 NHI M V LU N V N TH C S H tên h c viên: BÙI TH ÁNH TH Phái: N Ngày, tháng, n m sinh: 16/08/1982 N%i sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Công Ngh Sinh H c MSHV: 03107124 I- TÊN TÀI: Xây d&ng ph %ng pháp nh l ng ciprofloxacin huy't t %ng ng (i ánh giá t %ng %ng sinh h c c)a ch' ph*m ciprofloxacin II- NHI M V VÀ N I DUNG: - Xây d&ng ph %ng pháp nh l ng ciprofloxacin huy't t %ng ng (i b+ng k, thu t s-c ký l.ng hi u n ng cao (HPLC) ánh giá t %ng %ng sinh h c ch' ph*m Pycip 500 (ciprofloxacin 500 mg) công ty c/ ph0n d c ph*m Phú Yên (Pymepharco) s n xu t viên nén bao phim Ciprobay 500 (ciprofloxacin 500 mg) công ty Bayer ( c) s n xu t III- NGÀY GIAO NHI M V : 01/2009 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHI M V : 30/06/2009 V- CÁN B H NG D N: PGS TS Nguy n c L ng CÁN B H NG D N CN B MÔN QL CHUYÊN NGÀNH (H c hàm, h c v , h tên ch ký) N i dung c %ng lu n v n th c s TR NG PHÒNG T – S H ã cH i ng chuyên ngành thông qua Ngày tháng n m TR NG KHOA QL NGÀNH Trang i L IC M N Sau m t th(i gian h c t p nghiên c u, cu i tơi c2ng ã hồn thành lu n nghiên c u c)a ây th(i i3m t t nh t tơi có d p c)a 'n nh ng ng (i thân ã giúp c bày t lịng bi't %n ng viên tơi su t q trình tơi th&c hi n lu n Tr c tiên xin chân thành g5i l(i c m %n sâu s-c 'n th0y tôi, ng (i h d n khoa h c, nh h này, PGS TS Nguy n ng ng nghiên c u cho su t th(i gian th&c hi n lu n v n cL ng Th0y ã d y cho không ch6 nh ng ki'n th c khoa h c mà c nh ng h c v1 cu c s ng, v1 tình ng (i Tơi xin chân thành c m %n ThS Tr0n Th Qu7nh Chi, ThS Ch %ng Ng c Nãi b n ng nghi p t i Trung tâm ánh giá t %ng nghi m thu c TP HCM ã t n tình giúp 4, theo dõi, %ng sinh h c - Vi n Ki3m ng viên t o i1u ki n t t nh t cho tơi su t q trình th&c hi n lu n v n Con xin c m %n B , M8, anh ch Hai anh D2ng ã h't s c thông c m chia s9 v i nh ng khó kh n lúc làm lu n v n Xin c m %n nh ng ng (i b n thân yêu, nh ng ng (i ã yêu m'n, chia s9 v i lúc th&c hi n lu n v n Lu n v n quà mà dành t:ng cho t t c m i ng (i thân yêu c)a tôi, v i t t c t m lịng mình! Thành ph H Chí Minh, ngày 27 tháng n m 2009 Bùi Th Ánh Th Trang ii TÓM T T LU N V N TH C S Thu c generic m t b n c)a thu c phát minh, ch6 có th3 c s n xu t sau thu c phát minh h't h n b n quy1n Thu c generic có giá thành th p khơng ịi h.i ph i l:p l i chi phí cho nghiên c u ch t ho:c li1u l ng ã ng v t nghiên c u lâm sàng ho t c ch ng minh an toàn hi u qu c)a thu c generic, c0n ánh giá t %ng ánh giá ch t l ng %ng sinh h c gi a thu c generic thu c phát minh Các công ty d c ph*m Vi t Nam hi n ã có kh n ng s n xu t m t s lo i thu c generic, ó có ch' ph*m viên nén bao phim Pycip 500 (ciprofloxacin 500 mg) công ty C/ ph0n D c ph*m Phú Yên (Pymepharco) s n xu t Ciprofloxacin thu c kháng sinh thu c nhóm quinolon có tác d;ng c ch' enzym DNA gyrase, ng n s& chép c)a nhi m s-c th3 khi'n cho vi khu*n khơng sinh s n c nhanh chóng; có ph/ kháng khu*n r ng nên lo i thu c c ch6 nh i1u tr b nh nh viêm x %ng - t)y, viêm tuy'n ti1n li t, viêm ru t vi khu*n n:ng [4] tài t p trung nghiên c u, xây d&ng ph %ng pháp ciprofloxacin huy't t %ng ng (i ánh giá t %ng nh l ng %ng sinh h c c)a ch' ph*m Pycip 500 (thu c th< nghi m) viên nén bao phim Ciprobay 500 (ciprofloxacin 500 mg) (thu c i ch ng) công ty Bayer HealthCare AG, CHLB c s n xu t Trong tài này, s< d;ng k, thu t s-c ký l.ng hi u n ng cao (HPLC) nh l ng ciprofloxacin huy't t %ng tài c th&c hi n theo mơ hình nghiên c u chéo, %n li1u, ng u nhiên, nhóm ng (i tình nguy n (NTN), thu c, giai o n, u ng thu c i1u ki n nh n ói qua êm So sánh thơng s d ng h c AUC, Cmax, Tmax c)a thu c th< nghi m v i thu c i ch ng theo quy c nh Trang iii c)a USP 30 Phân tích ph %ng sai ANOVA thông s Cmax, AUC0-= ánh giá s& khác bi t gi a cá th3, thu c, giai o n, trình t& So sánh thông s Cmax, AUC0-= c)a thu c th< nghi m thu c i ch ng v i kho ng tin c y 90% Hai ch' ph*m t %ng %ng sinh h c kho ng tin c y 90% c)a t6 s : Cmax, AUC0-= c)a hai ch' ph*m chênh l ch không 80 - 125% chuy3n sang d ng logarit So sánh s& khác bi t c)a thông s Tmax theo ph %ng pháp th ng kê phi tham s (Wilcoxon Signed Rank Test) K't qu ánh giá t %ng %ng sinh h c hai ch' ph*m nh sau: - Phân tích ANOVA giá tr Cmax, AUC0-∞ cho th y có s& khác gi a giai o n, trình t&, thu c cá th3 khơng có ý ngh a th ng kê v i giá tr p > 0,05 - > kho ng tin c y 90%, t6 s Cmax c)a thu c th< nghi m/ thu c - 115,19%, t6 s AUC0-∞ c)a thu c th< nghi m/ thu c i ch ng 89,23 i ch ng 93,51 - 119,85% C hai t6 s 1u n+m kho ng 80 - 125% - Giá tr Tmax c)a thu c th< nghi m so v i thu c i ch ng khác khơng có ý ngh a th ng kê theo ph %ng pháp th ng kê phi tham s (p > 0,05) V y, hai ch' ph*m viên nén bao phim Pycip 500 (ciprofloxacin 500 mg) viên nén bao phim Ciprobay 500 t %ng dùng thay th' l n %ng sinh h c in vivo theo USP 30 có th3 c Trang iv M CL C Trang L I CÁM N i TÓM T T LU N V N ii M C L C iv DANH M C CÁC CH VI T T T ix DANH M C CÁC B NG xi DANH M C CÁC HÌNH xiii PH N 1: M U PH N 2: T NG QUAN 2.1 Ciprofloxacin 2.1.1 Tính ch t lý hóa 2.1.2 D c lý c ch tác d ng 2.1.3 D c 2.1.4 Ph kháng khu n 2.1.5 Ch 2.1.6 Ch ng ch 2.1.7 Th n tr ng 2.1.8 Th i k mang thai 2.1.9 Th i k cho bú ng h c nh nh 2.1.10 Tác d ng không mong mu n (ADR) 2.1.11 Li u u ng cách dùng Trang v 2.1.12 T ng tác thu c 10 2.1.13 Các ph ng pháp nh tính nh l ng ciprofloxacin ch ph m 11 2.1.13.1 Theo USP 30 11 2.1.13.2 Theo BP 2007 12 2.1.14 Ph 2.2 T ng pháp ng nh l ng d !c h c 14 2.2.1 Khái ni m v t 2.2.2 Nghiên c u t c 2.2.2.1 Các tr 2.2.2.2 ng ng ng d c h c 14 phóng thích ho t ch t in vitro 15 ng h p ti n hành ánh giá t ánh giá t 2.3 T ng ciprofloxacin d ch sinh h c 13 ng ng ng in vitro 15 ng in vitro 16 ng sinh h c 18 2.3.1 M t s khái ni m 18 2.3.2 C s lý thuy t c a t ng ng sinh h c 18 2.3.2.1 Sinh kh d ng (SKD) 18 2.3.2.2 Ph ng pháp o n ng thu c huy t t ng Khái ni m t ng ng sinh h c 20 2.3.2.3 Khái ni m t 2.3.3 Nghiên c u t 2.3.3.1 o ng ng ng sinh h c 21 ng sinh h c 21 c nghiên c u y sinh h c 21 2.3.3.2 Mơ hình nghiên c u 21 2.3.3.3 ánh giá k t qu nghiên c u 23 2.4 Ph ng pháp chi"t d !c ch#t huy"t t ng 24 2.4.1 Ph ng pháp t o t a protein 24 2.4.2 Ph ng pháp chi t l ng - l ng 24 Trang vi 2.4.3 Ph ng pháp chi t qua pha r n 24 2.5 Th$m %nh ph ng pháp %nh l !ng d !c ch#t d%ch sinh h c 25 2.5.1 Kh o sát tính t 2.5.2 Tính ch n l c 25 2.5.3 ph c h i (hi u su t chi t) 26 2.5.4 ng cong chu n kho ng n tính 26 2.5.5 Gi i h n d ng thích c a h th ng 25 ic a nh l ng (LLOQ) 27 2.5.6 úng 28 2.5.7 xác 28 2.5.8 n nh 28 2.5.8.1 n nh ng n h n 28 2.5.8.2 n nh dài h n 28 2.5.8.3 n nh ông rã ông 29 PH N 3: NGUYÊN V T LI U VÀ PH 3.1 NG PHÁP NGHIÊN C&U 30 'i t !ng nghiên c(u - Thu'c th) nghi m - Trang thi"t b% 30 3.1.1 it ng nghiên c u 30 3.1.2 Ch t chu n làm vi c 30 3.1.3 Trang thi t b 30 3.1.4 Hóa ch t, thu c th nghi m 31 3.2 Ph 3.2.1 Kh o sát t ng pháp nghiên c(u 31 ng ng d c h c c a thu c th nghi m thu c i ch ng 31 3.2.2 Kh o sát t ng ng sinh h c c a thu c th nghi m thu c i ch ng 32 Trang vii 3.2.2.1 Chu n b dung d ch chu n m u huy t t ng ch a ciprofloxacin t t o 32 3.2.2.2 Kh o sát, ch n l a, ph 3.2.2.3 Xây d ng th m t ng b ng ph ng pháp chi t ciprofloxacin huy t t nh ph ng pháp nh l ng 33 ng ciprofloxacin huy t ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao 33 3.2.2.4 Thi t k nghiên c u 38 3.2.2.5 Tuy n ch n ng i tình nguy n 38 3.2.2.6 Cách cho u ng thu c 39 3.2.2.7 Xác nh thông s d 3.2.2.8 Phân tích d c c ng h c 40 ng h c ánh giá t ng ng sinh h c 41 PH N 4: K T QU VÀ BÀN LU N 42 4.1 Kh*o sát t ng ng d !c h c c+a thu'c th) nghi m thu'c 'i ch(ng 42 4.1.1 Tinh ch t 42 4.1.2 nh tính 42 4.1.3 nh l 4.1.4 4.2 ng 42 phóng thích ho t ch t in vitro ( Kh*o sát t ng hòa tan) 43 ng sinh h c c+a thu'c th) nghi m thu'c 'i ch(ng 44 4.2.1 Kh o sát ch n l a ph ng pháp chi t ciprofloxacin huy t t ng 44 4.2.1.1 Ph ng pháp chi t l ng l ng 44 4.2.1.2 Ph ng pháp t a protein 45 4.2.2 Xây d ng th m t nh ph ng pháp nh l ng ciprofloxacin huy t ng b ng k! thu t HPLC 45 ... hi n tài: ? ?Xây d ng ph ng i ánh giá t ng pháp ng nh l ng ciprofloxacin huy t t ng ng sinh h c c a ch ph m ciprofloxacin? ?? M;c tiêu c)a nghiên c u nh+m xây d&ng ph %ng pháp nh l ng ciprofloxacin. .. tháng, n m sinh: 16/08/1982 N%i sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Công Ngh Sinh H c MSHV: 03107124 I- TÊN TÀI: Xây d&ng ph %ng pháp nh l ng ciprofloxacin huy't t %ng ng (i ánh giá t %ng %ng sinh h c c)a... c)a ch' ph*m ciprofloxacin II- NHI M V VÀ N I DUNG: - Xây d&ng ph %ng pháp nh l ng ciprofloxacin huy't t %ng ng (i b+ng k, thu t s-c ký l.ng hi u n ng cao (HPLC) ánh giá t %ng %ng sinh h c ch'