Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 75 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
75
Dung lượng
4,38 MB
Nội dung
KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “Bước đầunghiêncứuxâydựngquytrìnhnhânnhanhinvitrocâytrầubà–Philodendron Xanadu” “Khóa luận đệ trình Khoa CNSH, Trường ĐH Nông Nghiệp Hà Nội là một phần yêu cầu của trình độ đại học ngành Công nghệ sinh học". HÀ NỘI - 2011 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo chồi của mẫu cấy 33 Bảng 2: Ảnh hưởng của Kinetin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy 36 Bảng 3: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy 39 Bảng 4: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy 42 Bảng 5: Ảnh hưởng của α-NAA đến giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh 48 Bảng 6: Ảnh hưởng của than hoạt tính tới giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh 52 Bảng 7: Ảnh hưởng của giá thể tới tỷ lệ sống và sự sinh trưởng của câyinVitro 56 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo chồi của mẫu cấy 35 Hình 2: Ảnh hưởng của Kinetin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy 38 Hình 3: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy 41 Hình 4: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA khả năng tạo chồi của mẫu cấy 44 Hình 5: Ảnh hưởng của α-NAA đến giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh 51 Hình 6: Ảnh hưởng của than hoạt tính tới giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh 53 Hình 7: Ảnh hưởng của giá thể tới tỷ lệ sống và sự sinh trưởng của câyinvitro 59 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1.1: Ảnh hưởng của BA đến hệ số nhân chồi của mẫu cấy 34 Biểu đồ 1.2: Ảnh hưởng của BA đến chiều cao TB/chồi của mẫu cấy 34 Biểu đồ 1.3: Ảnh hưởng của BA đến số lá TB/chồi của mẫu cấy 35 Biểu đồ 2.1: Ảnh hưởng của Kinetin tới hệ số nhân chồi của mẫu cấy 37 Biểu đồ 2.2: Ảnh hưởng của Kinetin tới chiều cao TB/chồi của mẫu cấy 37 Biểu đồ 2.3: Ảnh hưởng của Kinetin tới số lá TB/ chồi của mẫu cấy 38 Biểu đồ 3.1: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới hệ số nhân chồi của mẫu cấy 40 Biểu đồ 3.2: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới chiều cao TB/chồi của mẫu cấy 40 Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới số lá TB/chồi của mẫu cấy 41 Biểu đồ 4.1: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA tới hệ số nhân chồi của mẫu cấy 43 Biểu đồ 4.2: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA tới chiều cao TB/chồi của mẫu cấy 43 Biểu đồ 4.3: Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA tới số lá TB/chồi của mẫu cấy 44 Biểu đồ 5.1: Ảnh hưởng của α-NAA đến số rễ TB/chồi 48 Biểu đồ 5.2: Ảnh hưởng của α-NAA đến chiều dài TB của rễ 49 Biểu đồ 6.1: Ảnh hưởng của THT đến số rễ TB/chồi 52 Biểu đồ 6.2: Ảnh hưởng của THT đến chiều dài TB của rễ 53 Biểu đồ 7.1: Ảnh hưởng của giá thể tới chiều cao TB/cây 56 Biểu đồ 7.2: Ảnh hưởng của giá thể tới số lá TB/cây 57 DANH MỤC CÁC CỤM TỪ - KÝ HIỆU VIẾT TẮT STT Viết tắt Viết đầy đủ 1 CT Công thức 2 Đ/C Đối chứng 3 Agar Thạch 4 NXB Nhà xuất bản 5 TB Trung bình 6 MS Môi trường Murashige and Skoog - 1962 7 α -NAA α- Napthalene acetic acid 8 BA N6-benzyladenin 9 THT Than hoạt tính 10 IAA Indolyl acetic acid 11 IBA Indolyl butyric acid PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1. Đặt vấn đề Ngày nay, cùng với sự phát triển của kinh tế – xã hội, nhu cầu sử dụngcây cảnh của con người ngày tăng nhanh. Có nhiều loài cây được con người sử dụng với nhiều mục đích trang trí khác nhau. Trầubà cánh phượng (Philodendron Xanadu) là một trong những loài cây cảnh đang được sử dụng ngày càng rộng rãi. Trầubà có tán lá xanh tươi, hình dáng lá đẹp và tao nhã phù hợp làm cây trang trí nội thất, cây trồng chậu hoặc sử dụng cành cắt để cắm hoa… Do đó, trầubà rất được ưa chuộng trên thị trường cây cảnh. Qua đó, cho thấy tiềm năng kinh tế to lớn của câytrầu bà. Vì vậy, trong những năm gần đây, câytrầubà đã dần chiếm được chỗ đứng trên thị trường cây cảnh. Ở nước ta, nguồn giống câytrầubà được sản xuất chủ yếu ở miền Nam hoặc được nhập từ Trung Quốc. Do đó, việc vận chuyển cây giống từ nguồn cung ứng đến nơi tiêu thụ còn phải trải qua nhiều giai đoạn phức tạp. Vì thế nên việc cung ứng cây giống cho thị trường còn thiếu chủ động, chưa đáp ứng được nhu cầu ngày cành tăng nhanh của thị trường. Từ trước tới nay, trầubà được nhân giống chủ yếu bằng phương pháp giâm cành. Tuy nhiên, với phương thức nhân giống này, hệ số nhân thấp, tốn thời gian và công sức, đồng thời cây giống dễ bị nhiễm bệnh. Vì vậy, phương thức nhân giống truyền thống đã không đáp ứng được nhu cầu về cây giống cho thị trường. Do đó, việc tìm ra phương thức nhân giống mới nhằm sản xuất được lượng cây giống lớn trong thời gian ngắn là rất cần thiết. Việc sử dụng phương pháp nuôi cấy mô invitro là một trong những phương pháp hữu hiệu nhất hiện nay có thể giải quyết được những khó khăn trên một cách đơn giản. Phương pháp này cho phép nhân nhanh, tạo ra một số lượng cây giống lớn, đồng nhất về mặt di truyền, sạch bệnh. Từ một cây mẹ ban đầu ta có thể nhân ra hàng ngàn cây con có kích thước và chất lượng đồng đều như nhau, giúp việc nhân giống được nhanh hơn. Mặt khác, cây con ổn định về mặt di truyền, đồng thời giảm tác hại cho cây giống và đem lại hiệu quả thiết thực trong việc nâng cao chất lượng cây giống và giảm giá thành. Đây là một phương pháp tiên tiến đã được ứng dụng thành công trên thế giới và Việt Nam đem lại hiệu quả kinh tế cao cho hàng loạt cây trồng khác nhau. Chính vì vậy nên chúng tôi chọn đề tài “Bước đầunghiêncứuxâydựngquytrìnhnhânnhanhinvitrocâytrầubà–Philodendron xanadu”. 1.2. Mục đích, yêu cầu 1.2.1. Mục đích Nghiêncứuxâydựngquytrìnhnhânnhanhinvitrocâytrầubà (Philodendron Xanadu) làm cơ sở để nhânnhanh giống câytrầubà chất lượng cao cung cấp cho thị trường cây cảnh. 1.2.2.Yêu cầu Xác định được môi trường tái sinh và nhânnhanh tối ưu câyin vitro. Xác định môi trường tạo cây hoàn chỉnh. Xác định ảnh hưởng của các loại giá thể đến khả năng sinh trưởng của câyinvitro ngoài vườn ươm. [...]... Việt Nam chưa có công bố chính thức về nghiêncứuinvitrocâytrầubà cánh phượng PhilodendronXanadu PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU 3.1 Đối tượng và vật liệu nghiêncứu 3.1.1 Đối tượng nghiêncứu Giống trầubà cánh phượng PhilodendronXanadu 3.1.2 Vật liệu nghiêncứu Đỉnh sinh trưởng của cây 3.2 Nội dungnghiêncứu 3.2.1 Tạo nguyên liệu khởi đầu Đỉnh sinh trưởng được khử trùng rồi cho vào... 2.3.3.1 Trên thế giới Trước những nghiêncứu về nuôi cấy mô câytrầubà đã có rất nhiều nghiêncứu nuôi cấy mô về các loài trong chi Philodendron Đây là một trong những nền tảng quan trọng để làm tiền đề cho các nghiêncứu về PhilodendronXanadu sau này Một số nghiêncứuinvitro về Philodendron: Năm 1990, Jámbor-Benczúr và cộng sự đã đưa ra quy trìnhnhân giống invitro Philodendron tuxtlanum Chồi được... (Meira Ziv và Ariel Tamar, 1991) Những nghiêncứu in vitrocây trầu bà: Trên thế giới đã có nhiều thành công trong việc nhânnhanh in vitrocây trầu bà Năm 2001, Sierra và cộng sự đã nghiêncứuquytrình khử trùng chồi ngọn Philodendronxanadu đã chỉ ra rằng khử trùng chồi ngọn bằng Ca(OCl) 2 cho tỷ lệ nhiễm thấp Năm 2004, Gaurab Gangopadhyay và cộng sự qua nghiêncứu về các loại giá thể (agar, xơ dừa,... cấy) Nhânnhanhinvitro Tạo cây invitro hoàn chỉnh Ra cây ngoài vườn ươm Trong phương pháp nhân giống bằng nuôi cấy mô, chồi thường được nuôi cấy trong môi trường nhânnhanh khoảng 3 – 5 tuần, sau đó chuyển sang môi trường ra rễ trong khoảng thời gian 4 – 6 tuần Như vậy, nuôi cấy mô là phương pháp phù hợp nhất để nhân giống Philodendrons 2.3.4 Những nghiêncứu về nuôi cấy in vitrocây trầu bà 2.3.3.1... Xytokinin: + Auxin/ Xytokinin lớn: Mẫu cấy sẽ phát triển theo hướng tạo rễ bất định + Auxin/ Xytokinin trung bình: Mẫu cấy sẽ phát triển theo hướng tạo mô sẹo + Auxin/ Xytokinin nhỏ: Mẫu cấy sẽ phát triển theo hướng tạo chồi bất định Như vậy, trong giai đoạn nhânnhanh có thể sử dụng đơn chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm Xytokinin hay tổ hợp chất Auxin + Xytokinin với tỷ lệ Auxin/ Xytokinin thấp... 5.0 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Thí nghiệm invitro 4.1.1 Xác định môi trường tái sinh và nhânnhanh thích hợp cho mẫu cấyNghiêncứu tìm được môi trường thích hợp nhânnhanh chồi là công việc có ý nghĩa rất quan trọng đối với quá trìnhnhânnhanh giống câytrầubàinvitro Tùy từng loại cây và từng loại mô nuôi cấy mà các công thức môi trường nhânnhanh có thể khác nhau, tuy nhiên chúng cần đáp... thể chịu được nhiệt độ ở 0 0C Philodendron Xanadu, nhỏ gọn hơn P selloum Lá xẻ thùy sâu Dáng cây đẹp, kích thước nhỏ gọn phù hợp hơn để sử dụng trong nhà 2.1.2 Trầubà - PhilodendronXanadu Tên Việt Nam: Trầubà cánh phượng (trầu bà lá xẻ) Tên tiếng Anh: XanaduPhilodendron Tên khoa học : PhilodendronXanadu Chi : Philodendron Họ : Araceae (họ Ráy) Philodendronxanadu được phát hiện ở Tây Úc vào... nghiệm 3: Nghiêncứu ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA khả năng tạo chồi của mẫu cấy của các công thức: + CT1: MS + Xytokinin (Đ/C) + CT2: MS + Xytokinin + 0,05mg/l IAA + CT3: MS + Xytokinin + 0,10mg/l IAA + CT4: MS + Xytokinin + 0,15mg/l IAA + CT5: MS + Xytokinin + 0,20mg/l IAA Chú ý: Xytokinin là nồng độ Xytokinin tối ưu nhất cho khả năng tạo chồi mẫu cấy ở thí nghiệm 1 và 2) * Thí nghiệm 4: Nghiêncứu ảnh... công thức: + CT1: MS + Xytokinin (Đ/C) + CT2: MS + Xytokinin + 0,05mg/l IBA + CT3: MS + Xytokinin + 0,10mg/l IBA + CT4: MS + Xytokinin + 0,15mg/l IBA + CT5: MS + Xytokinin + 0,20mg/l IBA Chú ý: Xytokinin là nồng độ Xytokinin tối ưu nhất cho khả năng tạo chồi mẫu cấy ở thí nghiệm 1 và 2) 3.2.3 Giai đoạn ra rễ * Thí nghiệm 5: Nghiêncứu ảnh hưởng của α-NAA đến giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh với các công... cứu ảnh hưởng của Kinetin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy của các công thức: + CT1: MS (Đ/C) + CT2: MS + 0,5 mg/l Kinetin + CT3: MS + 1,0 mg/l Kinetin + CT4: MS + 1,5 mg/l Kinetin + CT5: MS + 2,0 mg/l Kinetin - Nghiêncứu ảnh hưởng của tổ hợp Xytokinin + Auxin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy Sử dụng nồng độ Xytokinin tối ưu nhất ở 2 thí nghiệm trên kết hợp với thang nồng độ Auxin để bố trí các công . Bước đầu nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro cây trầu bà – Philodendron xanadu . 1.2. Mục đích, yêu cầu 1.2.1. Mục đích Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro cây trầu. CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: Bước đầu nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro cây trầu bà – Philodendron Xanadu “Khóa luận đệ trình Khoa CNSH,. trầu bà (Philodendron Xanadu) làm cơ sở để nhân nhanh giống cây trầu bà chất lượng cao cung cấp cho thị trường cây cảnh. 1.2.2.Yêu cầu Xác định được môi trường tái sinh và nhân nhanh tối ưu cây
Bảng 1
Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo chồi của mẫu cấy ( Sau 4 tuần nuôi cấy) (Trang 33)
Hình 1
Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo chồi của mẫu cấy (Trang 35)
Bảng 2
Ảnh hưởng của Kinetin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy (sau 4 tuần) (Trang 36)
Hình 2
Ảnh hưởng của Kinetin tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy (sau 4 tuần) (Trang 38)
Bảng 3
Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy (sau 4 tuần nuôi cấy) (Trang 39)
Hình 3
Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IAA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy (Trang 41)
Bảng 4
Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA tới khả năng tạo chồi của mẫu cấy (sau 4 tuần nuôi cấy) (Trang 42)
Hình 4
Ảnh hưởng của tổ hợp BA+IBA khả năng tạo chồi của mẫu cấy (Trang 44)
Bảng 5
Ảnh hưởng của α-NAA đến giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh (sau 4 tuần) (Trang 48)
Hình 5
Ảnh hưởng của α-NAA đến giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh (Trang 51)
Bảng 6
Ảnh hưởng của than hoạt tính tới giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh (Trang 52)
Hình 6
Ảnh hưởng của than hoạt tính tới giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh (Trang 53)