nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro giống lan hoàng thảo trầm trắng (dendrobium nestor var alba)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ TÌNH NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO GIỐNG LAN HOÀNG THẢO TRẦM TRẮNG (DENDROBIUM NESTOR VAR ALBA) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS-TS HÀ THỊ THÚY TS NGUYỄN THANH HẢI HÀ NỘI - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Bài luận văn thạc sỹ công trình nghiên cứu thực cá nhân, thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết, kiến thức chuyên ngành, nghiên cứu khảo sát tình hình thực tiễn hướng dẫn khoa học PGS.TS Hà Thị Thúy TS Nguyễn Thanh Hải Các số liệu, bảng biểu kết luận văn trung thực, nhận xét, phương hướng đưa xuất phát từ thực tiễn kinh nghiệm có Một lần xin khẳng định trung thực lời cam đoan Người thực Nguyễn Thị Tình Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành báo cáo tốt nghiệp này, nỗ lực cố gắng thân nhận giúp đỡ nhiệt tình mặt thầy cô giáo, tập thể cá nhân Với lòng biết ơn sâu sắc xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: PGS TS Hà Thị Thúy – phòng Thí nghiệm trọng điểm công nghệ tế bào thực vật – Viện Di truyền Nông nghiệp TS Nguyễn Thanh Hải – giảng viên khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam dành nhiều thời gian, tâm huyết bảo, giúp đỡ suốt trình thực tập Tôi xin gửi lời cảm ơn tới tập thể cán làm việc phòng nghiên cứu trọng điểm quốc gia công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật - Viện Di truyền Nông nghiệp tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy giáo, cô giáo Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình dạy bảo suốt năm học qua Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn tới người thân, bạn bè bên, chăm sóc, giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2015 Học viên Nguyễn Thị Tình Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích, yêu cầu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc, phân bố, phân loại giá trị phong lan 1.2 Đặc điểm thực vật học chi lan Hoàng thảo 1.2.1 Rễ 1.2.2 Thân 1.2.3 Lá 1.2.4 Hoa 1.2.5 Quả 1.3 Đặc điểm sinh thái học chi lan Hoàng thảo 1.3.1 Nhiệt độ 1.3.2 Ẩm độ 1.3.3 Ánh sáng 1.3.4 Giá thể 1.3.5 Mùa nghỉ 10 1.4 Đặc điểm thực vật học sinh thái học lan Hoàng thảo Trầm trắng (Dendrobium Nesto var alba) 10 1.5 Tình hình sản xuất hoa lan Việt Nam giới 11 1.5.1 Tình hình sản xuất hoa lan giới 11 1.5.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất phát triển phong lan Việt Nam 13 1.6 Các phương pháp nhân giống lan Hoàng Thảo Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 16 Page iii 1.6.1 Phương pháp truyền thống 16 1.6.2 Phương pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào thực vật 18 1.7 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào hoa lan 19 1.7.1 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô hoa lan giới 19 1.7.2 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào hoa lan nước 23 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu thời gian nghiên cứu 25 2.2 Nội dung nghiên cứu 25 2.2.1 Thiết lập hệ nuôi cấy vô trùng 25 2.2.2 Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh thông qua protocorm điều kiện nuôi cấy khác 28 2.2.3 Nghiên cứu xác định môi trường tái sinh tạo hoàn chỉnh 29 2.2.4 Nghiên cứu phương pháp huấn luyện đưa in vitro vườn ươm 32 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Giai đoạn chọn xử lý mẫu 34 2.3.2 Các hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 34 2.3.3 Phương pháp pha chế môi trường nuôi cấy in vitro 35 2.4 Các tiêu theo dõi 35 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Thiết lập hệ nuôi cấy vô trùng 37 3.1.1 Ảnh hưởng khác chất khử trùng đến mẫu nuôi cấy 37 3.1.2 Ảnh hưởng nguồn mẫu đến tỷ lệ sống sinh trưởng mẫu đưa vào nuôi cấy 41 3.1.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng mẫu nuôi cấy 43 3.1.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng tới trình phát sinh hình thái mẫu nuôi cấy 44 3.2 Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh thông qua protocorm điều kiện nuôi cấy khác 3.2.1 Ảnh hưởng 6-BA lên khả nhân protocorm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 46 46 Page iv 3.2.2 Ảnh hưởngcủa 6-BA kết hợp với kinetin lên khả nhân protocorm 47 3.3 Nghiên cứu xác định môi trường tái sinh tạo hoàn chỉnh 49 3.3.1 Ảnh hưởng môi trường tái sinh lan Trầm trắng từ protocorm.49 3.3.2 Ảnh hưởng môi trường khác đến sinh trưởng phát triển lan Trầm trắng in vitro 3.4 Nghiên cứu phương pháp huấn luyện đưa in vitro vườn ươm 54 59 3.4.1 Ảnh hưởng số biện pháp huấn luyện in vitro 59 3.4.2 Ảnh hưởng loại giá thể lên sinh trưởng, phát triển vườn ươm 60 3.5 Tóm tắt quy trình công nghệ nhân nhanh giống lan hoàng thảo trầm trắng nghiên cứu hoàn thiện 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 Kết luận 63 Kiến nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 PHỤ LỤC 67 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC VIẾT TẮT AC Than hoạt tính 6-BA - Benzyl Amino Purine CCC Chiều cao chồi CDL Chiều dài CDR Chiều dài rễ CT Công thức CX Chuối xanh ĐHST Điều hòa sinh trưởng GA3 Giberrilin acid HSN Hệ số nhân IAA Indol Acetic Acid Ki Kinetin KT Khoai tây α - NAA α - Naphthalene Acetic Acid ND Nước dừa NTU Nền tối ưu NL Nhắc lại PSHT Phát sinh hình thái SC Số chồi SR Số rễ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG STT 3.1a Tên bảng Ảnh hưởng chất khử trùng đến khả tạo mẫu vô trùng Trang mẫu non 3.1b 38 Ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng đến khả tạo mẫu vô trùng mẫu chồi gốc 3.1c 39 Ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng đến khả tạo mẫu vô trùng mẫu đoạn thân 3.2 41 Ảnh hưởng nguồn mẫu đến tỷ lệ sống sinh trưởng mẫu nuôi cấy 3.3 42 Ảnh hưởng loại môi trường lên khả tạo protocorm sau tuần nuôi cấy 3.4 43 Ảnh hưởng nồng độ 6-BA đến khả tạo protocorm chồi lan hoàng thảo trầm trắng 45 3.5 Ảnh hưởng 6-BA lên khả nhân protocorm sau tuần nuôi cấy 46 3.6 Ảnh hưởng 6-BA kết hợp với kinetin lên khả nhân protocorm 48 3.7 Ảnh hưởng nồng độ 6-BA đến khả tái sinh nhân chồi từ protocorm (sau tuần) 3.8 49 Ảnh hưởngcủa 6-BA kết hợp với kinetin đến khả tái sinh nhân chồi từ protocorm (sau tuần) 51 3.9 Ảnh hưởng kết hợp GA3 đến trình kéo dài chồi 52 3.10 Ảnh hưởng α-NAA đến hình thành rễ 53 3.11 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng Trầm trắng in vitro (sau tháng nuôi cấy) 3.12 55 Ảnh hưởng nồng độ nước dừa đến trình sinh trưởng in vitro (sau tháng nuôi cấy) 56 3.13 Ảnh hưởng dịch củ đến trình sinh trưởng in vitro 58 3.14 Ảnh hưởng số biện pháp huấn luyện in vitro trước (số liệu sau tháng tuổi) 3.15 59 Ảnh hưởng loại giá thể lên sinh trưởng, phát triển giai đoạn vườn ươm (2 tháng tuổi) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 61 Page vii DANH MỤC HÌNH STT 3.1 Tên hình Trang Ảnh hưởng chất khử trùng đến sinh trưởng tái sinh mẫu chồi gốc sau 20 ngày 3.2 40 Ảnh hưởng chất khử trùng đến sinh trưởng tái sinh đoạn thân sau 20 ngày 3.3 40 Ảnh hưởng loại môi trường lên khả nhân protocorm sau tuần nuôi cấy 3.4 44 Ảnh hưởng nồng độ 6-BA đến khả tạo protocorm chồi lan hoàng thảo trầm trắng nồng độ 6-BA = 2mg/l 45 3.5 Ảnh hưởng 6-BA lên khả nhân protocorm sau tuần nuôi cấy 47 3.6 Ảnh hưởng 6-BA kết hợp với kinetin lên khả nhân protocorm nồng độ khác 3.7 48 Ảnh hưởng 6-BA lên khả tạo chồi từ protocorm sau tuần nuôi cấy 3.8 50 Ảnh hưởng 6-BA kết hợp với kinetin lên khả tạo chồi từ protocorm sau tuần nuôi cấy 51 3.9 Nồng độ α-NAA = 0.6mg/l 53 3.10 Ảnh hưởng α - NAA lên khả tạo rễ sau tuần nuôi cấy 54 3.11 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới sinh trưởng in vitro 55 3.12 Ảnh hưởng nồng độ nước dừa tới sinh trưởng in vitro 57 3.13 Ảnh hưởng dịch củ đến sinh trưởng in vitro 58 3.14 Ảnh hưởng số biện pháp huấn luyện in vitro trước ( công thức 4) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 60 Page viii MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cùng với phát triển văn minh nhân loại, đời sống người ngày nâng cao, mặt vật chất tinh thần Nhu cầu thưởng thức đẹp, đặc biệt đẹp đến từ thiên nhiên, cỏ hoa dần vào đời sống người dân Từ xa xưa, chơi hoa, trồng hoa thưởng thức hoa coi thú vui nghệ thuật độc đáo thú vị Ngày nay, nghề trồng hoa kinh doanh hoa ngày tâm phát triển không bó hẹp giá trị thưởng thức mà mang lại giá trị kinh tế cao Phong lan loài hoa có chất lượng cao, giá trị kinh tế lớn, nhiều người yêu thích có hoa đẹp, cấu trúc hoa kiêu kỳ, phức tạp Hơn nữa, màu sắc hoa vô phong phú, hương thơm quyến rũ, thời gian chơi dài,…có lẽ mà phong lan mệnh danh nữ hoàng loài hoa! Nhờ trình sưu tầm loài lan đẹp, lạ mắt kỹ thuật lai tạo thứ lan mới, số loài hoa lan giới lên đến 100 ngàn loài Vì thế, thời gian gần đây, giới Việt Nam, thú chơi lan trở thành thông dụng có điều kiện hơn, không phân biệt địa vị, tuổi tác, hoàn cảnh kinh tế Số người chơi yêu chuộng hoa lan ngày tăng, hay nói cách khác, nhu cầu sử dụng chủng loại lan tăng Hoa lan trồng kinh doanh với kiểu dáng: hoa cắt cành, thành thục chậu treo hay bám giá thể lan từ 10 - 15 cm Trầm trắng (Dendrobium nestor var alba) loài lan địa vô quý giá Việt Nam Chúng không quý vẻ đẹp, hương sắc hay độ bền hoa mà quý khan nguồn tự nhiên Sự săn lùng khai thác bừa bãi làm chúng dần suy kiệt tự nhiên thị trường ỏi giá thành cao dẫn đến tình trạng phá rừng bừa bãi, ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường tự nhiên nhiều loài Để khắc phục vấn đề trên, tiến hành đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro giống lan hoàng thảo Trầm trắng (Dendrobium nestor var alba)” Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page PHỤ LỤC Bảng thành phần môi trường nuôi cấy Thành phần MT 1/2MS(mg/l) WV (mg/l) WV1(mg/l) WV2 (mg/l) KNO3 950.0 525.0 1050.0 1050.0 NH4NO3 802.5 500.0 1000.0 1000.0 (NH4)2SO4 KH2PO4 85.0 250.0 250.0 250.0 MgSO4.7H2O 185.0 250.0 250.0 250.0 CaCL2.2H2O 220.0 200.0 200.0 200.0 37.26 37.26 37.26 7.5 7.5 7.5 28.0 28.0 28.0 Ca3(PO4)2 Na2EDTA 18.65 FeSO4 7H2O 13.9 CoCL2 6H2O 0.0125 CuSO4.5H2O 0.0125 H3BO3 3.1 KI 0.415 MnSO4.4H2O 11.15 Na2MoO2.2H2O 0.125 ZnSO4.7H2O 4.3 Ferric tartrate Thiamin 0.05 0.05 Nicotinic axit 0.25 0.25 Pyridoxin 0.25 0.25 Myo Inositol 50.0 50.0 Glicin 1.0 1.0 Đường sacroza 30.0 30.0 30.0 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 30.0 Page 67 Kết xử lý số liệu BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B44 13/ 5/15 20:46 :PAGE Bang 3.5 anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang nhan protocorm VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= CT$ 5.60250 1.86750 ****** 0.000 * RESIDUAL 240077E-02 300097E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 5.60490 509536 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B44 13/ 5/15 20:46 :PAGE Bang 3.5 anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang nhan protocorm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 2.90000 1.20000 1.40000 1.40000 SE(N= 3) 0.100016E-01 5%LSD 8DF 0.326142E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B44 13/ 5/15 20:46 :PAGE Bang 3.5 anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang nhan protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 12 1.7250 0.71382 0.17323E-01 1.0 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 68 ALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B47 13/ 5/15 21: :PAGE bang 3.7 anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= CT$ 6.53460 1.30692 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 120108E-02 100090E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.53580 384459 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B47 13/ 5/15 21: :PAGE bang 3.7 anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.15000 2.82000 3.01000 2.57000 2.38000 2.17000 SE(N= 3) 0.577610E-02 5%LSD 12DF 0.177981E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B47 13/ 5/15 21: :PAGE bang 3.7 anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 18 2.3500 0.62005 0.10004E-01 0.4 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 69 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B49 13/ 5/15 21:14 :PAGE bang 3.9 anh huong cua 6-BA toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= CT$ 8.48769 1.69754 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 266681E-02 222234E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 8.49036 499433 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B49 13/ 5/15 21:14 :PAGE bang 3.9 anh huong cua 6-BA toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.15000 1.87000 2.45333 2.13000 2.82000 3.30000 SE(N= 3) 0.860686E-02 5%LSD 12DF 0.265207E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B49 13/ 5/15 21:14 :PAGE bang 3.9 anh huong cua 6-BA toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 70 (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 18 2.2872 0.70671 0.14908E-01 0.7 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B410 13/ 5/15 20:40 :PAGE Bang 3.10 anh huong cua 6-BA kinetin toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= CT$ 7.81529 1.56306 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 933703E-03 778086E-04 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.81623 459778 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B410 13/ 5/15 20:40 :PAGE Bang 3.10 anh huong cua 6-BA kinetin toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 1.15000 2.82333 3.20000 2.72000 2.43000 2.05333 SE(N= 3) 0.509276E-02 5%LSD 12DF 0.156925E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B410 13/ 5/15 20:40 :PAGE Bang 3.10 anh huong cua 6-BA kinetin toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 71 (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSN 18 2.3961 0.67807 0.88209E-02 0.4 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE B413 13/ 5/15 23:31 :PAGE Bang 3.12 anh huong cua NAA den ty le re VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= CT$ 3743.11 748.622 328.66 0.000 * RESIDUAL 12 27.3333 2.27778 * TOTAL (CORRECTED) 17 3770.44 221.791 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B413 13/ 5/15 23:31 :PAGE Bang 3.12 anh huong cua NAA den ty le re MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLRR 67.3333 74.6667 93.6667 100.000 91.6667 61.3333 SE(N= 3) 0.871354 5%LSD 12DF 2.68494 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B413 13/ 5/15 23:31 :PAGE Bang 3.12 anh huong cua NAA den ty le re F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 72 (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLRR 18 81.444 14.893 1.5092 1.9 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDL FILE MT 27/ 5/15 14:50 :PAGE Bang 3.13 anh huong cua moi truong nuoi cay den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V003 CDL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 666666E-02 333333E-02 0.18 0.835 * RESIDUAL 162500 180556E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 169167 153788E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CRL FILE MT 27/ 5/15 14:50 :PAGE Bang 3.13 anh huong cua moi truong nuoi cay den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V004 CRL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 166667E-02 833334E-03 0.09 0.916 * RESIDUAL 850000E-01 944444E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 866667E-01 787879E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE MT 27/ 5/15 14:50 :PAGE Bang 3.13 anh huong cua moi truong nuoi cay den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V005 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 NL 166667E-02 833333E-03 0.00 0.996 * RESIDUAL 1.58750 176389 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.58917 144470 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 27/ 5/15 14:50 :PAGE Bang 3.13 anh huong cua moi truong nuoi cay den sinh truong cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CDL CRL 0.625000 0.425000 0.675000 0.425000 0.625000 0.450000 CDR 1.15000 1.12500 1.15000 SE(N= 4) 0.671855E-01 0.485913E-01 0.209993 5%LSD 9DF 0.214930 0.155446 0.671781 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 27/ 5/15 14:50 :PAGE Bang 3.13 anh huong cua moi truong nuoi cay den sinh truong cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CDL 12 0.64167 0.12401 0.13437 20.9 0.8352 CRL 12 0.43333 0.88763E-010.97183E-01 22.4 0.9158 CDR 12 1.1417 0.38009 0.41999 36.8 0.9960 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDL FILE B14 27/ 5/15 10:54 :PAGE Bang 3.14 anh huong cua nuoc dua toi sinh truong cua cay in vitro VARIATE V003 CDL LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 NL 166667E-02 833336E-03 0.01 0.991 * RESIDUAL 767500 852778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 769167 699242E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CRL FILE B14 27/ 5/15 10:54 :PAGE Bang 3.14 anh huong cua nuoc dua toi sinh truong cua cay in vitro VARIATE V004 CRL LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 116667E-01 583333E-02 0.27 0.772 * RESIDUAL 195000 216667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 206667 187879E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE B14 27/ 5/15 10:54 :PAGE Bang 3.14 anh huong cua nuoc dua toi sinh truong cua cay in vitro VARIATE V005 CDR LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 616666E-01 308333E-01 0.15 0.860 * RESIDUAL 1.80500 200556 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.86667 169697 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B14 27/ 5/15 10:54 :PAGE Bang 3.14 anh huong cua nuoc dua toi sinh truong cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CDL CRL 1.15000 0.500000 1.15000 0.525000 1.12500 0.575000 CDR 3.02500 2.92500 2.85000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 75 SE(N= 4) 0.146012 0.735980E-01 0.223917 5%LSD 9DF 0.467100 0.235444 0.716324 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B14 27/ 5/15 10:54 :PAGE Bang 3.14 anh huong cua nuoc dua toi sinh truong cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CDL 12 1.1417 0.26443 0.29202 25.6 0.9913 CRL 12 0.53333 0.13707 0.14720 27.6 0.7721 CDR 12 2.9333 0.41194 0.44783 15.3 0.8598 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDL FILE B15 27/ 5/15 11:11 :PAGE Bang 3.15 anh huong cua dich cu den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V003 CDL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 516667E-01 258333E-01 0.16 0.853 * RESIDUAL 1.43750 159722 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.48917 135379 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CRL FILE B15 27/ 5/15 11:11 :PAGE Bang 3.15.anh huong cua dich cu den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V004 CRL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp F RATIO PROB ER Page 76 ================================================================ ============= NL 150000E-01 750000E-02 0.40 0.684 * RESIDUAL 167500 186111E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 182500 165909E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE B15 27/ 5/15 11:11 :PAGE Bang 3.15.anh huong cua dich cu den sinh truong cua cay in vitro VARIATE V005 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES LN MEAN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 216667E-01 108333E-01 0.01 0.995 * RESIDUAL 15.4075 1.71194 * TOTAL (CORRECTED) 11 15.4292 1.40265 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B15 27/ 5/15 11:11 :PAGE Bang 3.15 anh huong cua dich cu den sinh truong cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CDL CRL 1.55000 0.600000 1.52500 0.675000 1.40000 0.600000 CDR 2.85000 2.95000 2.87500 SE(N= 4) 0.199826 0.682113E-01 0.654207 5%LSD 9DF 0.639256 0.218212 2.09284 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B15 27/ 5/15 11:11 :PAGE Bang 3.15.anh huong cua dich cu den sinh truong cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 12) SD/MEAN | | Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 77 OBS CDL CRL CDR NO BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 12 1.4917 0.36794 0.39965 26.8 0.8533 12 0.62500 0.12881 0.13642 21.8 0.6835 12 2.8917 1.1843 1.3084 45.2 0.9945 BALANCED ANOVA FOR VARIATE T? L? S? FILE B16 27/ 5/15 10:36 :PAGE Bang 3.16 anh huong cua mot so bien phap huan luyen cay binh truoc ngoi VARIATE V003 T? L? S? LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 4.88917 2.44458 0.02 0.979 * RESIDUAL 997.401 110.822 * TOTAL (CORRECTED) 11 1002.29 91.1173 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B16 27/ 5/15 10:36 :PAGE Bang 3.16 anh huong cua mot so bien phap huan luyen cay binh truoc ngoi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS T? L? S? 69.2750 70.7050 70.5375 SE(N= 4) 5.26361 5%LSD 9DF 16.8386 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B16 27/ 5/15 10:36 :PAGE Bang 3.16 anh huong cua mot so bien phap huan luyen cay binh truoc ngoi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 78 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | T? L? S? 12 70.173 9.5455 10.527 15.0 0.9791 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDL FILE B17 11/ 6/15 8:52 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay VARIATE V003 CDL LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 160000E-01 800001E-02 0.07 0.932 * RESIDUAL 12 1.36000 113333 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.37600 982857E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CRL FILE B17 11/ 6/15 8:52 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay VARIATE V004 CRL LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 533333E-02 266667E-02 0.36 0.706 * RESIDUAL 12 880000E-01 733333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 933333E-01 666667E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE B17 11/ 6/15 8:52 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 79 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay VARIATE V005 SL LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 1.73333 866667 1.73 0.217 * RESIDUAL 12 6.00000 500000 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.73333 552381 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE B17 11/ 6/15 8:52 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay VARIATE V006 SR LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ================================================================ ============= NL 133333 666667E-01 0.07 0.933 * RESIDUAL 12 11.6000 966667 * TOTAL (CORRECTED) 14 11.7333 838095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B17 11/ 6/15 8:52 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CDL CRL 3.74000 0.620000 3.78000 0.620000 3.70000 0.660000 SE(N= 5) 0.150555 SL 5.00000 5.60000 5.80000 SR 7.00000 6.80000 6.80000 0.382971E-01 0.316228 0.439697 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 80 5%LSD 12DF 0.463910 0.118006 0.974405 1.35486 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B17 11/ 6/15 8:52 :PAGE bang 3.17 anh huong cua cac loai gia the toi sinh truong phat trien cua cay F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CDL 15 3.7400 0.31351 0.33665 9.0 0.9318 CRL 15 0.63333 0.81650E-010.85635E-01 13.5 0.7064 SL 15 5.4667 0.74322 0.70711 12.9 0.2173 SR 15 6.8667 0.91548 0.98319 14.3 0.9333 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | Page 81 [...]... nước hoặc tư nhân như Viện Di truyền Nông nghiệp, công ty Orchid Life’s Beautiful đã và đang tiến hành nghiên cứu nhân nhanh in vitro lan Trầm trắng, tuy nhiên hiệu quả tạo ra cây con còn thấp nên cũng chưa thể đưa vào sản xuất Khắc phục điều này, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro giống lan hoàng thảo Trầm trắng (Dendrobium nestor var alba) Học... PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu và thời gian nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu là giống lan Hoàng thảo Trầm trắng được thu thập từ vùng miền núi phía Bắc, được trồng tại vườn tập đoàn các giống lan - Viện Di truyền Nông nghiệp - Vật liệu nghiên cứu gồm lá non, chồi và các đoạn thân mang mắt ngủ của cây hoàng thảo Trầm trắng - Thời gian nghiên cứu: từ tháng 1/ 2014 đến tháng 5/2015 2.2 Nội dung nghiên cứu. .. tiến hành nghiên cứu nhân nhanh các giống lan này Tuy nhiên, các nghiên cứu còn rất hạn chế, đặc biệt trầm trắng là giống lan khó trồng và gặp nhiều khó khăn trong khâu nhân giống Hiện nay, trên thế giới, lan Trầm trắng vẫn đang được sản xuất rất hạn chế, không đủ phục vụ nhu cầu của khách hàng Một ít nơi tiêu biểu như Đài Loan, Hawaii có thể coi là những thị trường lớn Tại Việt Nam, lan Trầm trắng gần... Kết quả nghiên cứu của đề tài là cơ sở để xây dựng và hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống lan Trầm trắng trong điều kiện in vitro, góp phần bảo vệ, lưu giữ giống lan quý và giải quy t khó khăn về nguồn cung ứng giống cây cho thị trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc, phân bố, phân loại và giá trị của phong lan Cây... Hồ Chí Minh trong những năm tới Ở miền Bắc, một số cơ quan nghiên cứu như: Viện Di truyền Nông nghiệp, Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, trong những năm vừa qua cũng đã tập trung nghiên cứu các phương pháp nhân giống vô tính in vitro và cho ra đời mỗi năm hàng vạn cây con giống hoa lan có giá trị Viện Nghiên cứu Rau quả đã triển khai dự án “Hoàn thiện quy trình nhân giống và... được tiêu thụ hầu hết là phong lan nhập nội từ nước ngoài như Thái Lan, Đài Loan, Trung Quốc, Mã Lai) Việc nghiên cứu tạo giống lan ở trong nước còn rất yếu Trong khi giống thương mại quốc tế đều là giống lai F1, trong đó nhiều giống bố mẹ là giống lan dại của Việt Nam Vì vậy, việc tạo giống bố mẹ và tiến hành lai tạo, cứu phôi hạt lai, nhân giống nhanh các dòng phong lan lai quý là rất cấp bách Hiện... đầu tư mở rộng cơ sở hạ tầng cho sản xuất loài hoa này 1.6 Các phương pháp nhân giống lan Hoàng Thảo 1.6.1 Phương pháp truyền thống 1.6.1.1 Phương pháp nhân giống hữu tính Phương pháp nhân giống hữu tính là phương pháp nhân giống bằng hạt * Những ưu điểm của phương pháp nhân giống bằng hạt - Kỹ thuật đơn giản, dễ làm - Hệ số nhân giống cao - Tuổi thọ của cây trồng bằng hạt thường cao - Cây trồng bằng...2 Mục đích, yêu cầu + Mục đích - Xây dựng được quy trình nhân nhanh giống lan Hoàng thảo Trầm trắng bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật + Yêu cầu - Tạo được nguồn vật liệu ban đầu - Xác định được phương thức và môi trường nuôi cấy phù hợp trong giai đoạn nhân nhanh protocorm - Xác định môi trường phù hợp trong giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh -... nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào thực vật • Nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào là phương pháp nhân giống vô tính tiên tiến nhất hiện nay Bộ phận để nhân giống có thể là ngọn cây, ngọn cành, nhánh một phần của lá, hoa, rễ cây Nhân giống hoa ở các nước tiên tiến đều sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào đối với cây hoa lan, cúc, cẩm chướng, đồng tiền, loa kèn, layơn… Ưu điểm của phương pháp nhân giống. .. tiêu thụ hoa lan doanh thu lên hàng tỷ đồng như Sài gòn Orchidex, công ty hoa Hoàng Lan, các công ty này chủ yếu buôn bán các giống lan nhập nội Nghiên cứu tài nguyên di truyền và phân loại phong lan mới chỉ là bước đầu (Trần hợp, 1993) Một số nghiên cứu lại do nước ngoài chủ trì (Leonid et al., 2009) Một số địa phương như Sapa, Phú yên đã thực hiện dự án “Sưu tập và xây dựng vườn hoa phong lan đầu dòng”