Xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro cây bạch cập (bletilla striata (thunb ) reichb f )

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒNG THỊ NHƯ NỤ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO CÂY BẠCH CẬP (BLETILLA STRIATA (THUNB.) REICHB.F.) Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 8420201 Người hướng dẫn khoa học: TS Đinh Trường Sơn NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Hoàng Thị Như Nụ i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viện bạn bè, đồng nghiệp gia đình Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Đinh Trường Sơn - Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn dành nhiều thời gian, công sức, giúp đỡ động viên suốt q trình thực đề tài hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy, Cô giáo Khoa Công nghệ sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực đề tài học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến Ban lãnh đạo Viện Dược liệu, TS Nghiêm Tiến Chung - Bộ môn Giống - Trung tâm Nghiên cứu trồng chế biến thuốc Hà Nội, TS Nguyễn Văn Khiêm - Phụ trách Trung tâm Nghiên cứu nguồn gen giống dược liệu - Viện Dược liệu, toàn thể cán bộ, đồng nghiệp Trung tâm giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi học tập hồn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ, tất người thân, bạn bè, người bên cạnh động viên giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Hoàng Thị Như Nụ ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract ix Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.3 Ý nghĩa khoa học, thực tiễn để tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học .2 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn .2 Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu chung bạch cập .3 2.1.1 Nguồn gốc .3 2.1.2 Vị trí phân loại 2.1.3 Đặc điểm thực vật học .6 2.1.4 Bộ phận dùng cách sơ chế 2.1.5 Thành phần hóa học 2.1.6 Tác dụng dược lý công dụng .7 2.2 Các phương pháp nhân giống bạch cập 2.2.1 Bằng hạt: gieo trực tiếp 2.2.2 Bằng củ (thân rễ) .9 2.3 Các nghiên cứu nước nhân giống In Vitro bạch cập .9 2.3.1 Ngoài nước 2.3.2 Trong nước 11 2.4 Kỹ thuật nhân giống In Vitro 11 2.4.1 Cơ sở lý luận nuôi cấy mơ, tế bào thực vật (tính tồn tế bào) 11 2.4.2 Các bước trình nhân giống In Vitro 12 iii 2.4.3 Ảnh hưởng số nhân tố đến nhân giống In Vitro 13 Phần Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu 15 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 15 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 15 3.3 Nội dung nghiên cứu 15 3.4 Phương pháp nghiên cứu .16 3.4.1 Phương pháp nuôi cấy In Vitro 16 3.4.2 Phương pháp khử trùng mẫu cấy 16 3.4.3 Phương pháp xác định khối lượng đường kính củ In Vitro 16 3.4.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm .17 3.5 Các tiêu theo dõi 20 3.6 Xử lý số liệu 20 Phần Kết thảo luận 21 4.1 Tạo vật liệu khởi đầu .21 4.2 Nghiên cứu tái sinh chồi In Vitro bạch cập 22 4.3 Nghiên cứu nhân nhanh chồi In Vitro bạch cập 25 4.3.1 Ảnh hưởng ba α-naa đến khả nhân nhanh chồi In Vitro .25 4.3.2 Ảnh hưởng ba kinetin đến khả nhân nhanh chồi In Vitro 28 4.4 Nghiên cứu tạo củ In Vitro bạch cập 29 4.4.1 Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả tạo củ In Vitro .30 4.4.2 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ In Vitro bạch cập 31 4.5 Nghiên cứu đưa vườn ươm 34 4.5.1 Ảnh hưởng kích thước củ In Vitro đến khả sinh trưởng giai đoạn vườn ươm 34 4.5.2 Ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng bạch cập giai đoạn vườn ươm 35 4.5.3 Ảnh hưởng thời điểm đến khả thích nghi ngồi vườn ươm .36 Phần Kết luận kiến nghị 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Kiến nghị .41 Tài liệu tham khảo .42 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AC Than hoạt tính BA - Benzyl adenine cs Cộng CT Công thức CV% Độ biến động thí nghiệm ĐC Đối chứng IBA Indol butyric acid Kin Kinetin LSD 0.05 Mức sai khác nhỏ có ý nghĩa 5% MS Murashige and Skoog α-NAA α-naphtalene acetic acid TB Trung bình TDZ N-phenyl-N-1,2,3-thidiazol-5-yl urea TN Thí nghiệm 2,4 - D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Đặc điểm hình thái lồi Bletilla Trung Quốc Bảng 4.1 Ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng củ bạch cập (sau tuần nuôi cấy) 21 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi In Vitro bạch cập (sau tuần nuôi cấy) 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng kinetin đến khả tái sinh chồi In Vitro bạch cập (sau tuần nuôi cấy) 24 Bảng 4.4 Ảnh hưởng BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi 26 Bảng 4.5 Ảnh hưởng tổ hợp BA kinetin đến khả nhân nhanh chồi In Vitro bạch cập (sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng 4.6 Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả tạo củ In Vitro (sau tuần nuôi cấy) 30 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ in vitro bạch cập (sau tuần nuôi cấy) 31 Bảng 4.8 Ảnh hưởng kích thước củ In Vitro đến khả sinh trưởng bạch cập giai đoạn vườn ươm (sau 30 ngày) 34 Bảng 4.9 Ảnh hưởng giá thể đến khả thích nghi 36 Bảng 4.10 Ảnh hưởng thời điểm đến khả thích nghi vườn ươm (sau 30 ngày) 37 Bảng 11 Bước đầu đánh giá khả sinh trưởng nuôi cấy mô so với tách mầm (sau tháng) 38 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây bạch cập (Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f.) Hình 2.2 Củ dạng thân rễ (rhizome) bạch cập Hình 2.3 Dược liệu (củ dạng thân rễ) bạch cập khô Hình 3.1 Củ bạch cập vào mẫu 15 Hình 3.2 Cân kỹ thuật 16 Hình 3.3 Thước cặp 16 Hình 4.1 Mẫu củ bạch cập sau tuần khử trùng 22 Hình 4.2 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi in vitro bạch cập 23 Hình 4.3 Ảnh hưởng kinetin đến khả tái sinh chồi in vitro 25 Hình 4.4 Ảnh hưởng BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi 27 Hình 4.5 Ảnh hưởng kinetin (phối hợp với BA 1,5 mg/L) đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch cập 29 Hình 4.6 Củ bạch cập mơi trường MS lỏng 30 Hình 4.7 a Củ in vitro mơi trường MS lỏng nồng độ đường 32 Hình 4.7 b Độ đồng củ nồng độ đường 33 Hình 4.8 Ảnh hưởng kích thước củ in vitro đến khả sinh trưởng giai đoạn vườn ươm 35 Hình 4.9 a Cây bạch cập trồng cát non 36 Hình 4.9 b Chồi rễ 36 Hình 4.10 Cây bạch cập vườn ươm vào thời điểm tháng - 10 37 Hình 4.11 Cây bạch cập ni cấy mơ ngồi đồng ruộng 39 vii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hoàng Thị Như Nụ Tên Luận văn: “Xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro bạch cập (Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f.)” Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 8420201 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro bạch cập (Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f.) với hệ số nhân giống cao, chất lượng giống tốt, nhằm cung cấp giống cho thị trường Việt Nam Phương pháp nghiên cứu: Sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật thông dụng môi trường MS, có bổ sung chất điều tiết sinh trưởng, pH môi trường 5,8 - 6,0 hấp khử trùng 1210C 20 phút, áp suất atm Các thí nghiệm tiến hành điều kiện nhân tạo: Nhiệt độ phịng ni: 25 ± 2oC, cường độ ánh sáng: 2.000 – 3.000 Lux, chế độ chiếu sáng: 14h sáng/10h tối, độ ẩm phịng ni: 70% Củ bạch cập khử trùng dung dịch thủy ngân clorua (HgCl2 0,1%) khoảng thời gian khác Các số liệu xử lý thống kê phần mềm IRRISTART 4.0 Microsoft Excel Kết kết luận: Đối với củ bạch cập, cách khử trùng thích hợp dùng HgCl2 0,1% với thời gian khử trùng 12 phút, cho tỷ lệ nhiễm thấp, tỷ lệ sống cao, khả tái sinh chồi tốt Môi trường thích hợp để củ bạch cập tái sinh chồi môi trường MS + 1,5 mg/L BA + 30g/L đường + 6,2 g/L agar Mơi trường thích hợp để nhân nhanh chồi bạch cập môi trường MS có bổ sung 1,5 mg/L BA + 0,5 mg/L kinetin + 30 g/L đường + 6,2 g/L agar Trên môi trường này, số chồi/mẫu đạt 6,45; chiều cao trung bình 10,23 cm số trung bình sau tuần nuôi cấy Môi trường tốt cho bạch cập in vitro tạo củ môi trường MS lỏng + 40 g/L đường với số củ/mẫu đạt 4,6; khối lượng củ tươi đạt 0,44 g, đường kính củ đạt 11,13 mm sau tuần, củ to đồng Kích thước củ in vitro lớn tỷ lệ sống ex vitro vườn ươm cao Cây có đường kính củ - 11 mm đảm bảo đủ tiêu chuẩn đưa vườn ươm Cát giá thể tốt để bạch cập với tỷ lệ sống đạt 93,6%, thời điểm vào khoảng tháng - tháng 10 thích hợp viii 14 He X, Wang X, Fang J, Zhao Z, Huang L, Guo H, Zheng X (2017) Bletilla striata: Medicinal uses, phytochemistry and pharmacological activities J Ethnopharmacol 195: 20-38 15 Hoque ME (2010) In vitro tuberization in potato (Solanum tuberosum L.) Plant Omics Journal 3: - 11 16 Huang Y (2013) Preliminary study on artificial domestication and cultivation techniques of wild Bletilla striata in Yuanjiang county For Invent Plan 38: 124 - 126 17 Kumar S., Kashyap M., Sharma D.R (2005) In vitro regeneration and bulblet growth from lily bulbscale explants as affected by retardants, sucrose and irradiance Biologia planarum 49: 629 - 632 18 Li B, Kato T, Inoue K, Yamaki M, Takagi S (1993) Stilbenoids from Bletilla striata Phytochemistry 33: 1481 - 1483 19 Li WP, Tian SS, Lu GY, Lv D, Wang YN, Jiang FS, Ding ZS (2012) Rapid propagation of Bletilla striata by synthetic seeds technology Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 37: 3386-3390 20 Lin FL, Yang CY, Yang WW, Huang MR, Pang SQ (2013) The modern research overview on Bletilla striata Chinese Journal of Hospital Pharmacy 33: 571–573 21 Liu MZ, Tang JZ, Zhang JS CQ, Huang YY (2008) Angiogenesis inhibition in vascular endothelial cells by terpenoid com - pounds from Bletilla striata is via apoptosis pathway J Mol Cell Biol 41: 383–392 22 Liu MZ, Tang JZ, Zhang JS, Chou Q, Huang YY (2008) Angiogenesis inhibition in vascular endothelial cells by terpenoid compounds from Bletilla striata is via apoptosis pathway Fen Zi Xi Bao Sheng Wu Xue Bao 41: 383-392 23 Lu Guangyao, Yang Xian, Jiang Ruibin (2015) Rapid Propagation of Bletilla Striata Zhejiang Chinese Medical University 05 24 Luo Y, Diao H, Xia S, Dong L, Chen J, Zhang J (2010) A physiologically active polysaccharide hydrogel promotes wound healing J Biomed Mater Res A 94: 193-204 25 Mei-Lan L, Chakrabarty D, Paek K.Y (2003) Growth of Lilium Oriental hybrid "Casablanca" bulblet using bioreator culture Scientia Horticulturae 97: 41 - 48 26 Morita H, Koyama K, Sugimoto Y, Kobayashi J (2005) Antimitotic activity and reversal of breast cancer resistance protein-mediated drug resistance by stilbenoids from Bletilla striata Bioorg Med Chem Lett 15: 1051-1054 42 27 Murashige T, F Skoog (1962) A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures Physiologia Plantarum 15: 473-497 28 Niu J, Wang Z (2016) The new direct seeding and breeding method of Bletilla striata Shaanxi Norm Univ 44: 83 - 86 29 Peng Q, Li M, Xue F, Liu H (2014) Structure and immunobiological activity of a new polysaccharide from Bletilla striata Carbohydr Polym 107: 119-123 30 Ren FM, Yan L, Ying LI, Yang TJ, Feng H, Song JY (2016) Resource distribution and breeding of medicinal plants in genus Bletilla Reichb f Chin Tradit Herb Drugs 47: 4478 - 4487 31 Sakakibara H (2006) Cytokinins: Activity, Biosynthesis, and Translocation Annu Rev Plant Biol 57: 431-449 32 Shi YunPing, Li Feng, Ling ZhengZhu (2009) Tissue culture and rapid propagation technique for Bletilla striata Guangxi Agricultural Sciences 33 Staikidou I, Watson S, Harvey B.M.R and Selby C (2005) Narcissus bulblet formation in vitro: effects of carbohydrate and osmolarity of the culture medium Plant Cell Tissue and Organ Culture 80: 313-320 34 Sun LL, Yang YH, Liu JK, Chen WF, Zhou M (2010) Textual research on Bletilla striata Chinese Medicinal Materials 33: 1965 - 1968 35 Wang Y, Liu D, Chen S, Jiang H, Yin H (2014) A new glucomannan from Bletilla striata: structural and anti-fibrosis effects Fitoterapia 92: 72-78 36 Wiart C (2012) Medicinal plants of China, Korea, and Japan: Bioresources for Tomorrow’s Drugs and Cosmetics CRC Press, Boca Raton, America pp.93 37 Yamaki M, Kato T, Bai L, Inoue K, Takagi S (1991) Methylated stilbenoids from Bletilla striata Phytochemistry 30: 2759–2760 38 Yang P, Zhang J, Luo M, Song Z (2016) Effects of different storage time on the germination and growth of Bletilla striata seed Agric Technol Serv 33: 24 - 107 39 Ye J, Zheng XJ, Guan CD, Niu Y, Ma HY (2010) Seed germination and tissue culture of Bletilla striata Yunnan University 32: 422 - 425 40 Yuan N, He JR, He R, Li P, Ye LX, Wang HE (2009) Study on tissue culture and rapid breeding technology of Bletilla striata Southwest China Journal of Agricultural Sciences 22: 781–785 41 Yuan Ning, He JunRong, He Rui, Li Ping, Ye LanXiang, Wang HaiE, Zhuo BiPing (2009) Tissue culture and rapid propagation of Bletilla striata Southwest China Journal of Agricultural Sciences 22: 781-785 ref.785 43 42 Yunnan Academy of Agricultural Sciences Institute of Flowers (2015) Standardized cultivation techniques of Bletilla striata Appl Technol Rural Areas: 33 - 34 43 Zhan X, Jia L, Niu Y, Qi H, Chen X, Zhang Q, Zhang J, Wang Y, Dong L, Wang C (2014) Targeted depletion of tumour-associated macrophages by an alendronateglucomannan conjugate for cancer immunotherapy Biomaterials 35: 10046-10057 44 Zhang Doudou, Peng Xiaoying, Zhu Yongzhou, Yang Yabo, Ao Dongyang (2016) Culture in vitro of Bletilla striata Hunan Forestry Science & Technology 05 45 Zhang Y, Li B, Li SF (2009) Seed germination and seedling morphogenesis of Bletilla striata under the different culture medium Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica 29: 1584–1589 46 Zhao YX, Deng YR, Zhang XJ, Chen F (2013) Advances in chemical constituents and pharmacology of genus Bletilla Nat Prod Res Dev 25: 1137 - 1145 44 PHỤ LỤC I THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Lượng lấy Thành phần Đa lượng 1L dung dịch mẹ (g) NH4NO3 33, 00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 9,20 KH2PO4 3,40 CaCl2.2H2O 8,80 Vi lượng (mg) H3BO3 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.7H2O 860,00 KI 83,00 Na2MoO4.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 Sắt 1L môi trường sử dụng 50 ml/l 10 ml/l (g) FeSO4.7H2O 5,57 Na2EDTA 7,45 Vitamin (mg) Glycine 300 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridoxin (B6) 100 Thyamin HCl (B1) 20 45 ml/l ml/l II KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ BẰNG CHƯƠNG TRÌNH IRRISTAT 4.0 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi in vitro bạch cập BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE TN2 17/ 4/** 16: PAGE VARIATE V003 SC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.41084 1.10271 73.03 0.000 * RESIDUAL 10 151000 151000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.56184 325846 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE TN2 17/ 4/** 16: PAGE VARIATE V004 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.90404 1.22601 312.75 0.000 * RESIDUAL 10 392006E-01 392006E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.94324 353089 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 17/ 4/** 16: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 ct4 ct5 NOS 3 3 SC 1.86000 2.48000 2.76000 3.43000 3.13000 CC 2.26000 2.86000 3.53000 3.93000 3.23000 SE(N= 3) 0.709460E-01 0.361481E-01 5%LSD 10DF 0.223553 0.113904 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 17/ 4/** 16: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SC 15 2.7320 0.57083 0.12288 4.5 0.0000 CC 15 3.1620 0.59421 0.62610E-01 2.0 0.0000 | Thí nghiệm Ảnh hưởng kinetin đến khả tái sinh chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC/M FILE TN21 17/ 4/** 16:57 PAGE VARIATE V003 SC/M LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN 46 F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.91184 1.22796 116.06 0.000 * RESIDUAL 10 105800 105800E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.01764 358403 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE TN21 17/ 4/** 16:57 PAGE VARIATE V004 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.09636 1.52409 200.01 0.000 * RESIDUAL 10 762007E-01 762007E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.17256 440897 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN21 17/ 4/** 16:57 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 ct4 ct5 NOS 3 3 SC/M 1.45000 2.13000 2.56000 2.89000 3.03000 CC 2.45000 2.90000 3.55000 3.63000 4.30000 SE(N= 3) 0.593857E-01 0.503986E-01 5%LSD 10DF 0.187127 0.158808 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN21 17/ 4/** 16:57 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SC/M 15 2.4120 0.59867 0.10286 4.3 0.0000 CC 15 3.3660 0.66400 0.87293E-01 2.6 0.0000 | Thí nghiệm Ảnh hưởng BA NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE TN3 17/ 4/** 16:19 PAGE VARIATE V003 SC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.78405 956810 51.08 0.000 * RESIDUAL 12 224800 187334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 5.00885 294638 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE TN3 17/ 4/** 16:19 PAGE VARIATE V004 CC 47 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 12.8201 2.56401 184.24 0.000 * RESIDUAL 12 167000 139167E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 12.9871 763944 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN3 17/ 4/** 16:19 PAGE VARIATE V005 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 520000 104000 4.16 0.020 * RESIDUAL 12 300000 250000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 820000 482353E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 17/ 4/** 16:19 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 ct4 ct5 ct6 NOS 3 3 3 SC 4.54000 3.13000 3.36000 3.23000 3.15000 3.04000 CC 7.85000 6.58000 5.86000 5.66000 5.53000 5.45000 SL 3.80000 3.80000 3.50000 3.40000 3.80000 3.50000 SE(N= 3) 0.790219E-01 0.681094E-01 0.912871E-01 5%LSD 12DF 0.243493 0.209868 0.281287 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 17/ 4/** 16:19 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SC 18 3.4083 0.54281 0.13687 4.0 0.0000 CC 18 6.1550 0.87404 0.11797 1.9 0.0000 SL 18 3.6333 0.21963 0.15811 4.4 0.0202 | Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng tổ hợp BA kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE TN4 7/ 5/** 23:20 PAGE VARIATE V003 SC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9.19464 2.29866 326.51 0.000 * RESIDUAL 10 704006E-01 704006E-02 48 * TOTAL (CORRECTED) 14 9.26504 661789 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE TN4 7/ 5/** 23:20 PAGE VARIATE V004 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 26.5168 6.62919 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 620028E-01 620028E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 26.5788 1.89848 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN4 7/ 5/** 23:20 PAGE VARIATE V005 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 264000 660000E-01 3.00 0.072 * RESIDUAL 10 220000 220000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 484000 345714E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 7/ 5/** 23:20 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 ct4 ct5 NOS 3 3 SC 4.25000 5.98000 6.45000 5.33000 4.85000 CC 7.45000 10.5600 10.2300 9.68000 7.56000 SL 4.00000 4.20000 4.00000 3.80000 4.10000 SE(N= 3) 0.484426E-01 0.454616E-01 0.856349E-01 5%LSD 10DF 0.152644 0.143251 0.269839 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 7/ 5/** 23:20 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SC 15 5.3720 0.81350 0.83905E-01 1.6 0.0000 CC 15 9.0960 1.3779 0.78742E-01 0.9 0.0000 SL 15 4.0200 0.18593 0.14832 3.7 0.0722 | Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả tạo củ in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN 49 F RATIO PROB ER ============================================================================= CT$ 777599 777599 80.16 0.002 * RESIDUAL 388001E-01 970003E-02 * TOTAL (CORRECTED) 816399 163280 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.37500 3.37500 27.00 0.008 * RESIDUAL 500000 125000 * TOTAL (CORRECTED) 3.87500 775000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V005 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.86000 4.86000 57.18 0.003 * RESIDUAL 340000 850001E-01 * TOTAL (CORRECTED) 5.20000 1.04000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V006 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.16000 2.16000 43.20 0.004 * RESIDUAL 200000 500001E-01 * TOTAL (CORRECTED) 2.36000 472000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCU FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V007 SCU LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.53500 2.53500 18.11 0.014 * RESIDUAL 560000 140000 * TOTAL (CORRECTED) 3.09500 619000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLCU FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V008 KLCU LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 735000E-02 735000E-02 36.75 0.005 * RESIDUAL 800001E-03 200000E-03 - 50 * TOTAL (CORRECTED) 815000E-02 163000E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKC FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE VARIATE V009 DKC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 960000 960000 12.00 0.027 * RESIDUAL 320000 800001E-01 * TOTAL (CORRECTED) 1.28000 256000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 NOS CC 10.3500 9.63000 SE(N= 3) 5%LSD 4DF CT$ ct1 ct2 SL 4.50000 3.00000 SR 9.60000 7.80000 0.568625E-01 0.204124 0.222889 0.800123 CDR 4.30000 3.10000 0.168325 0.659798 0.129100 0.506042 NOS SCU KLCU DKC 4.50000 0.300000 7.30000 3.20000 0.230000 6.50000 SE(N= 3) 0.216025 0.816497E-02 0.163299 5%LSD 4DF 0.846770 0.320049E-01 0.640098 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NMT 7/ 5/** 23:17 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 6) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CC 9.9900 0.40408 0.98489E-01 1.0 0.0016 SL 3.7500 0.88034 0.35355 9.4 0.0078 SR 8.7000 1.0198 0.29155 3.4 0.0026 CDR 3.7000 0.68702 0.22361 6.0 0.0039 SCU 3.8500 0.78677 0.37417 9.7 0.0143 KLCU 0.26500 0.40373E-010.14142E-01 5.3 0.0049 DKC 6.9000 0.50596 0.28284 4.1 0.0267 | Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 61.3592 30.6796 ****** 0.000 * RESIDUAL 133598 222664E-01 * TOTAL (CORRECTED) 61.4928 7.68660 51 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 200000E-01 100000E-01 3.00 0.125 * RESIDUAL 200000E-01 333333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 400000E-01 500000E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V005 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 19.3400 9.67000 580.20 0.000 * RESIDUAL 999997E-01 166666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 19.4400 2.43000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V006 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 12.9678 6.48390 445.12 0.000 * RESIDUAL 874004E-01 145667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 13.0552 1.63190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC/M FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V007 SC/M LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.62000 1.81000 77.57 0.000 * RESIDUAL 140000 233334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 3.76000 470000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLC FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V008 KLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 864000E-01 432000E-01 86.40 0.000 * RESIDUAL 300000E-02 500000E-03 * TOTAL (CORRECTED) 894000E-01 111750E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKC FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE VARIATE V009 DKC 52 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 40.5938 20.2969 ****** 0.000 * RESIDUAL 624028E-01 104005E-01 * TOTAL (CORRECTED) 40.6562 5.08202 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 NOS CC 12.9400 15.3800 9.04000 SE(N= 3) 5%LSD 6DF CT$ ct1 ct2 ct3 SL 3.00000 3.00000 2.90000 SR 6.20000 8.90000 5.50000 CDR 4.07000 5.10000 2.20000 0.861518E-01 0.333333E-01 0.745355E-01 0.696820E-01 0.298013 0.115305 0.257830 0.241041 NOS SC/M KLC 4.20000 0.320000 4.60000 0.440000 3.10000 0.200000 DKC 8.66000 11.1300 5.93000 SE(N= 3) 0.881918E-01 0.129099E-01 0.588798E-01 5%LSD 6DF 0.305070 0.446576E-01 0.203674 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NDD 7/ 5/** 23:13 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CC 12.453 2.7725 0.14922 1.2 0.0000 SL 2.9667 0.70711E-010.57735E-01 1.9 0.1245 SR 6.8667 1.5588 0.12910 1.9 0.0000 CDR 3.7900 1.2775 0.12069 3.2 0.0000 SC/M 3.9667 0.68557 0.15275 3.9 0.0001 KLC 0.32000 0.10571 0.22361E-01 7.0 0.0001 DKC 8.5733 2.2543 0.10198 1.2 0.0000 | Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng kích thước củ in vitro đến khả sinh trưởng bạch cập giai đoạn vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE DKCU 17/ 4/** 15: PAGE VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= DK$ 16.9400 8.47000 16.61 0.004 * RESIDUAL 3.06000 510000 * TOTAL (CORRECTED) 20.0000 2.50000 - 53 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE DKCU 17/ 4/** 15: PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= DK$ 2.48000 1.24000 53.14 0.000 * RESIDUAL 140000 233334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 2.62000 327500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DKCU 17/ 4/** 15: PAGE MEANS FOR EFFECT DK$ DK$ l1 l2 l3 NOS CC SL 8.50000 2.00000 9.60000 3.00000 11.8000 3.20000 SE(N= 3) 0.412311 0.881918E-01 5%LSD 6DF 1.42625 0.305069 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DKCU 17/ 4/** 15: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |DK$ (N= 9) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CC 9.9667 1.5811 0.71414 7.2 0.0041 SL 2.7333 0.57228 0.15275 5.6 0.0003 | Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng giá thể đến khả thích nghi vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE GIA THE 17/ 4/** 15: PAGE VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 41.0600 20.5300 684.33 0.000 * RESIDUAL 180002 300004E-01 * TOTAL (CORRECTED) 41.2400 5.15500 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE GIA THE 17/ 4/** 15: PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.68000 840000 63.00 0.000 * RESIDUAL 800002E-01 133334E-01 - 54 * TOTAL (CORRECTED) 1.76000 220000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCM FILE GIA THE 17/ 4/** 15: PAGE VARIATE V005 SCM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.18000 1.09000 163.50 0.000 * RESIDUAL 400001E-01 666668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 2.22000 277500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GIA THE 17/ 4/** 15: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ ct1 ct2 ct3 NOS CC 13.5000 8.30000 10.4000 SL 4.00000 3.00000 3.20000 SCM 2.20000 1.00000 1.50000 SE(N= 3) 0.100001 0.666668E-01 0.471405E-01 5%LSD 6DF 0.345918 0.230611 0.163067 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GIA THE 17/ 4/** 15: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CC 10.733 2.2705 0.17321 1.6 0.0000 SL 3.4000 0.46904 0.11547 3.4 0.0002 SCM 1.5667 0.52678 0.81650E-01 5.2 0.0000 | Thí nghiệm 10: Ảnh hưởng thời điểm đến khả thích nghi ngồi vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE TD 17/ 4/** 16:11 PAGE VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 43.8360 10.9590 421.49 0.000 * RESIDUAL 10 260005 260005E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 44.0960 3.14971 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TD 17/ 4/** 16:11 PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 55 CT$ 3.86400 966000 161.00 0.000 * RESIDUAL 10 600001E-01 600001E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.92400 280286 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TD 17/ 4/** 16:11 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ v1 v2 v3 v4 v5 NOS 3 3 CC 9.30000 9.20000 7.80000 5.50000 5.40000 SL 3.10000 3.00000 3.00000 2.00000 2.00000 SE(N= 3) 0.930959E-01 0.447214E-01 5%LSD 10DF 0.293348 0.140919 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TD 17/ 4/** 16:11 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | CC 15 7.4400 1.7747 0.16125 2.2 0.0000 SL 15 2.6200 0.52942 0.77460E-01 3.0 0.0000 56 | ... thấy bạch cập nhân giống in vitro tương đối hoàn chỉnh Các kết trình bày tóm tắt sơ đồ mơ tả quy trình nhân nhanh in vitro bạch cập 38 QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO CÂY BẠCH CẬP Củ bạch cập (đường... hưởng cytokinin đến khả tái sinh chồi in vitro bạch cập - Nghiên cứu ảnh hưởng cytokinin auxin đến khả nhân nhanh chồi bạch cập - Nghiên cứu tạo củ in vitro bạch cập - Nghiên cứu đưa in vitro vườn... 1.2.1 Mục đích Xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro bạch cập (Bletilla striata (Thunb. ) Reichb f .) 1.2.2 Yêu cầu Xác định cách khử trùng mẫu để tạo nguồn nguyên liệu cho nuôi cấy in vitro Xác định