Xây dựng quy trình nhân nhanh năm giống cây hoa cúc (trắng tuyết, mai vàng, lan tím, chi đỏ và đỏ cờ) bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN  NGUYỄN THỊ CHUNG ANH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH NĂM GIỐNG CÚC (TRẮNG TUYẾT, MAI VÀNG, LAN TÍM, CHI ĐỎ VÀ ĐỎ CỜ) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI, 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN  NGUYỄN THỊ CHUNG ANH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH NĂM GIỐNG CÚC (TRẮNG TUYẾT, MAI VÀNG, LAN TÍM, CHI ĐỎ VÀ ĐỎ CỜ) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa học TS La Việt Hồng HÀ NỘI, 2016 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: TS La Việt Hồng, Khoa Sinh – KTNN, trường Đại học Sư phạm Hà Nội người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình thực đề tài hoàn thành khoá luận Ban Giám hiệu trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực đề tài Ngoài ra, để hoàn thành đề tài nhận bảo kiến thức chuyên ngành phương pháp tiến hành thí nghiệm từ tập thể cán Phòng thí nghiệm sinh lí thực vật, khoa sinhKTNN, trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tôi xin cảm ơn giúp đỡ quý báu Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè động viên giúp vượt qua khó khăn để hoàn thành đề tài Hà nội, ngày… tháng năm 2016 Sinh viên thực Nguyễn Thị Chung Anh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu đề tài: tài “Xây dựng quy trình nhân nhanh năm giống hoa cúc (Trắng tuyết, Mai vàng, Lan tím, Chi đỏ Đỏ cờ) kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật” kết nghiên cứu riêng TS La Việt Hồng hướng dẫn không trùng lặp với kết tác giả khác Hà nội, ngày… tháng năm 2016 Sinh viên thực Nguyễn Thị Chung Anh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Agar Thạch BAP - Benzyl amino purin IAA Beta - Indole - acetic acid IBA Indode - - Butyric acid MS Murashige and Skoog, 1962 NAA Naphthalene acetic acid DANH MUC BẢNG Bảng 3.1.1 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh giống cúc Trắng tuyết 15 Bảng 3.1.2 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cúc Mai vàng 18 Bảng 3.1.3 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh giống cúc Lan tím 21 Bảng 3.1.4 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cúc Chi đỏ 24 Bảng 3.1.5 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh giống cúc Đỏ cờ 27 Bảng 3.2 Ảnh hưởng NAA 0,3 mg/l đến rễ giống cúc Lan tím, Trắng tuyết, Đỏ cờ, Mai vàng, Chi đỏ 31 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh chồi in vitro Trắng tuyết 14 Hình 3.2 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh Mai vàng 17 Hình 3.3 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh Lan tím 20 Hình 3.4 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh Chi đỏ 23 Hình 3.5 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh Đỏ cờ 26 Hình 3.6 Chiều dài rễ Trắng tuyết sau ngày nuôi cấy 32 Hình 3.7 Rèn luyện cúc in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 33 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu 3.1 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro 3.2 Ra rễ tạo in vitro hoàn chỉnh 3.3 Rèn luyện in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Ý nghĩa đề tài NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Giới thiệu hoa cúc 1.1 Nguồn gốc hoa cúc 1.2 Vị trí phân loại 1.3 Đặc điểm thực vật học hoa cúc 1.4 Đặc điểm sinh thái học hoa cúc: 1.5 Giá trị kinh tế hoa cúc Tình hình sản xuất hoa cúc giới Việt Nam 2.1 Tình hình sản xuất hoa cúc giới 2.2 Tình hình sản xuất hoa cúc Việt Nam Tình hình nghiên cứu hoa cúc giới Việt Nam lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào 3.1.Tình hình nghiên cứu hoa cúc giới 3.2 Tình hình nghiên cứu hoa cúc Việt Nam CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Vật liệu thiết bị nghiên cứu 11 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 11 2.1.3 Trang thiết bị dụng cụ 11 2.1.4 Môi trường nuôi cấy chất điều hòa sinh trưởng thực vật 11 2.2 Phương pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 12 2.2.2 Phương pháp phân tích thống kê liệu thực nghiệm 13 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 14 3.1 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro năm giống cúc 14 3.2 Ra rễ tạo in vitro hoàn chỉnh 31 3.3 Rèn luyện in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ở Việt Nam nay, cấu trồng nông nghiệp chuyển đổi nhanh chóng cấu thị trường theo hướng phát triển trồng xuất hoa cảnh, hướng mang lại hiệu kinh tế lớn Trong loài hoa cắt cành hoa cúc loài hoa ưa chuộng trồng phổ biến nước ta đứng sau hoa hồng (Linh Xuan Nguyen, 1998) [25] Hoa cúc có nhiều loại với nhiều màu khác nhau, cúc trắng, cúc đỏ, cúc tím, cúc nâu…Là loại trồng đa dạng loài, màu sắc, dễ trồng, dễ sản xuất, vận chuyển tiêu thụ nên nhiều nhà vườn lựa chọn đưa vào sản xuất Ngoài tác dụng làm cảnh, trang trí hoa cúc có lợi cho sức khỏe Nó coi loại thảo dược có tác dụng tốt việc chữa bệnh Theo Đông y, hoa cúc có vị ngọt, đắng, tính mát, có tác dụng nhiệt, giải độc, giải cảm, giáng hỏa, mát gan, làm sáng mắt… Thực tế việc trồng hoa cúc nước ta thực quy mô lớn làng hoa đặc biệt vùng Đà Lạt, Mê Linh… với diện tích lên tới hàng nghìn Ví dụ như: Diện tích trồng hoa Hà Nội năm 1995 500 ha, tăng 12,8 lần so với năm 1990 [3], đến năm 2001, đạt tới 867 [15] không cung cấp nhu cầu hoa nước mà xuất sang nước khác Giải công ăn việc làm cho nhiều nhân công, góp phần tích cực vào việc xóa đói giảm nghèo Trong tương lai nhu cầu hoa cúc tiếp tục tăng đồng nghĩa với việc quy mô sản xuất hoa cúc ngày mở rộng Kéo theo nhu cầu giống có chất lượng với số lượng lớn Tuy nhiên việc tạo giống tự nhiên phương pháp thủ công gieo hạt (chỉ áp dụng với giống cúc trồng hạt), tách từ rễ, giâm cành mang lại hiệu thấp, phụ thuộc nhiều vào điều kiện tự Sau tiến hành thí nghiệm kết thu sau: a Ảnh hưởng BAP Chi đỏ công thức bổ sung 0,3 mg/l BAP cho chồi (1,16 - 3,48 chồi/mẫu, chồi cao từ - 2,02 cm), không xanh, có tượng lụi gốc Mô sẹo xuất từ tuần thứ (đường kính 0,8 cm) Ở công thức bổ sung 0,5 mg/l BAP cho kết tốt (từ - chồi/mẫu, chồi cao từ 1,13 - 2,41cm) đồng (Bảng 3.1.4) Kết luận môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Chi đỏ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l BAP (H.3.4) b Ảnh hưởng BAP kết hợp nước dừa Chi đỏ công thức BAP kết hợp nước dừa cho nhiều chồi, chồi xanh - mập đồng Mô sẹo nhỏ xuất từ tuần thứ nuôi cấy, hầu hết chồi phát sinh từ thân Công thức 0,5 mg/l BAP + 10% nước dừa cho nhiều chồi (3,59 - 7,75 chồi/mẫu, chiều cao chồi 2,55 - 3,19 cm) (Bảng 3.1.4) Kết luận môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Chi đỏ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 10% nước dừa (H.3.4) c Ảnh hưởng BAP kết hợp NAA Đối với Chi đỏ, công thức bổ sung 0,02 mg/l NAA + 0,7 mg/l BAP cho kết thấp (3,09 - 5,25 chồi/mẫu, chồi cao 1,82 - 2,02 cm tỷ lệ phần trăm mẫu phản ứng 98%) Trong công thức bổ sung 0,04 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP cho kết tốt (3,09 - 5,25 chồi/mẫu, chiều cao chồi trung bình cm tỷ lệ phần trăm mức phản ứng đạt 100% (Bảng 3.1.4) Kết luận môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Chi đỏ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 0,04 mg/l NAA (H.3.4) 25 3.1.5 Giống Đỏ cờ a b d c Hình 3.5 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến khả tái sinh nhân nhanh Đỏ cờ a BAP 0,5 mg/l b NAA 0,02 mg/l + BAP 1,0 mg/l c BAP 0,5 mg/l + 10% nước dừa d BAP 1,0 mg/l 26 Bảng 3.1.5 Ảnh hưởng BAP, nước dừa NAA đến tái sinh nhân nhanh giống cúc Đỏ cờ Nguồn gốc chồi phát sinh Công thức Số chồi/mẫu Chiều cao chôi (cm) Thân Mô sẹo Độ đồng Đặc điểm chồi chồi Màu sắc mô Hoại tử Thủy tinh sẹo/đường kính hóa Hiệu BAP Đối chứng 2,00±0 BAP0,3 4,67±1,15ab 2,87±0,23a BAP0,5 6,00±1,00 b a BAP0,7 5,67±2,52b 2,03±0,06a BAP1,0 b a 6,67±1,53 2,33±0,29 2,50±0,53 2,17±0,4 a Đều Xanh-mập Đen/0 cm - - X Không Xanh-mập Đen/1 cm - - X Không Xanh-mập Đen/1,3 cm - - X Không Xanh-mập Đen/1,2 cm - - X Không Xanh-mập Đen/1,3 cm - - X a Hiệu BAP+10% nước dừa BAP0,3+10% ND 5,67±0,58a 2,33±0,57a X Đều Xanh-mập Đen/1,3cm - - BAP0,5+10% ND 6,00±2,65 a a X Đều Xanh-mập Đen/1,2 cm - - BAP0,7+10% ND 5,67±2,08a 2,10±0,10a X Đều Xanh-mập Đen/1,1 cm - - 2,53±0,42 Hiệu NAA+BAP NAA0,02+BAP0,5 3,33±0,58a 1,27±0,64a X Không Không xanh Đen/1,0 cm - X NAA0,02+BAP0,7 3,33±1,15 a a X Không Không xanh-gầy Đen/1,2 cm - X NAA0,02+BAP1,0 3,67±1.53a 1,17±0,29a X Không Không xanh-gầy Đen/1 cm - X NAA0,04+BAP0,5 2,67±0,58a 1,13±0,32a X X Không Không xanh-gầy Đen/1 cm - - NAA0,04+BAP0,7 2,67±2,08 a a X X Không Không xanh-gầy Đen/1,3 cm - - NAA0,04+BAP1,0 3,33±0,58a X Không Không xanh-gầy Đen/1,3 cm - - 1,30±0,17 1,27±0,21 1,17±0,35a Với thí nghiệm, cột, ký tự theo sau khác a, b, c… thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α=0,05 27 Sau tiến hành thí nghiệm kết thu sau a Ảnh hưởng BAP Đối với Đỏ cờ, công thức bổ sung 0,3 mg/l BAP cho chồi (từ 4,52 4,82 chồi/mẫu), chồi cao không (2 - 2,61 cm) Công thức bổ sung 1,0 mg/l BAP cho kết tốt ( 5,14 - 6,2 chồi, chồi cao 1,77 - 2,57 cm) Đặc biệt công thức cho mô sẹo nhỏ hẳn so với công thức khác (đường kính 0,9 - 1,2 cm) (Bảng 3.1.5) Kết luận môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Đỏ cờ môi trường MS bổ sung 1,0 mg/l BAP (H.3.5) b Ảnh hưởng BAP kết hợp nước dừa Công thức bổ sung 0,7 mg/l BAP +10% nước dừa cho chồi (từ 3,59 - 7,75 chồi/mẫu, chồi thấp từ - 2,2 cm, tỷ lệ phần trăm mẫu phản ứng đạt 100%) Ở công thức bổ sung 0,5 mg/l BAP +10% nước dừa cho nhiều chồi (3,68 - 7,78 chồi/mẫu) nhiên số chồi/mẫu không đồng đều, chiều cao chồi từ 2,11 - 2,95 cm (Bảng 3.1.5) Kết luận môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Đỏ cờ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l BAP kết hợp 10% nước dừa (H.3.5) c Ảnh hưởng BAP kết hợp NAA Nhìn chung tất môi trường có bổ sung BAP kết hợp với NAA cho chồi, chồi không đều, phát triển chậm, lụi gốc, chồi phát sinh từ mô sẹo có màu xanh (Bảng 3.1.5) Kết luận môi trường MS bổ sung BAP kết hợp NAA không phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Đỏ cờ (H.3.5) 28 BAP hay 6-benzyl-aminopurine có hiệu rõ phân chia tế bào, hoạt hóa mạnh mẽ tổng hợp acid nucleic protein, kiểm tra trình tổng hợp protein giai đoạn dịch mã Ngoài BAP có vai trò rõ hình thành quan thực vật, chúng kích thích mạnh mẽ hình thành chồi non, trái lại chúng chất ngăn cản hình thành rễ, hoạt động kích thích chuyển hóa Sau tiến hành nghiên cứu khả tái sinh nhân nhanh giống cúc môi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP nồng độ khác kết thu cho thấy bổ sung BAP vào môi trường nuôi cấy phát sinh nhiều chồi so với môi trường MS lại làm phát sinh mô sẹo Trong giống cúc nghiên cứu giống: Trắng tuyết, Lan tím, Đỏ cờ giống có mô sẹo lớn phát sinh sau nuôi cấy Mô sẹo có màu đen xuất hầu hết tuần thứ Mai vàng có mô sẹo nhỏ không đáng kể, xuất đầu tuần Theo Chakrabarty et al 1999 [16] sử dụng BAP nồng độ từ 0,5 - mg/l kết hợp NAA 0,2 - mg/l để tái sinh chồi giống Royal Purple từ thân Kết hệ số nhân nhanh thu - 5,2 chồi/mẫu Từ kết thấy hệ số tái sinh chồi giống sử dụng nghiên cứu cao so với thí nghiệm Chakrabarty et al 1999 Nồng độ BAP sử dụng nghiên cứu Chakrabarty et al cao hẳn so với nồng độ BAP sử dụng thí nghiệm Trong giống, Mai vàng giống cho kết tốt nuôi cấy môi trường MS có bổ sung BAP nồng độ khác Trong môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh Mai vàng BAP 0,7 mg/l Nước dừa thành phần bổ sung vào môi trường nuôi cấy nhằm làm tăng sinh trưởng phát triển mô Các loại khoáng, acid amin, myo - inositol, chất béo chất điều hòa sinh trưởng cytokinin chứng minh có 29 nước dừa [14] Các thành phần có hàm lượng thay đổi khác non, già, chí khác độ tuổi Sau tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp nước dừa đến tái sinh nhân nhanh chồi in vitro năm giống cúc kết thu hầu hết giống nuôi cấy môi trường BAP kết hợp nước dừa cho nhiều chồi, kích thước chồi đồng Trong giống, Mai vàng giống cho nhiều chồi có mô sẹo phát sinh nhỏ Mô sẹo màu xanh phát sinh từ cuối tuần Trắng tuyết cho nhiều chồi phần lớn chồi phát sinh từ mô sẹo, mô sẹo lớn kích thước chồi không đồng Tiếp đến Lan tím, Chi đỏ Đỏ cờ nuôi cấy môi trường bổ sung BAP kết hợp với nước dừa cho nhiều chồi nhiên mô sẹo lớn xuất tuần thứ Khi nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với NAA đến khả tái sinh nhân nhanh chồi in vitro năm giống cúc kết thu cho thấy: phần trăm mức phản ứng giống mức cao, từ 80-100% ngang với kết thu thí nghiệm Kim et al.(1999) Năm 1995, Yepes et al tiến hành nghiên cứu giống cúc Irodon, Polaris, thí nghiệm tái sinh chồi từ thân môi trường NAA 1,0 mg/l kết hợp BAP 1,0 mg/l kết thu số chồi tái sinh giao động từ - 10 chồi/mẫu [30] Năm 2009, Kashif Waseem [27] tiến hành nghiên cứu giống cúc Leaf Dics Ông bổ sung 0,05 mg/l NAA vào môi trường MS kết tốt thu sau: 70% mẫu phản ứng, chiều cao chồi từ 2,0 – 2,6 cm, chồi cao lên đến 5,3 cm Với nồng độ NAA từ 0,02; 0,04 kết hợp với BAP nồng độ thấp 0,5; 0.7; mg/l hệ số nhân nhanh giống không giống bình quân tương đương với kết thu từ nghiên cứu Yepes et al (1995) cao kết nghiên cứu Kashif Waseem (2009) Phần trăm mẫu phản 30 ứng thí nghiệm cao so với thí ghiệm Kashif Waseem (2009) chiều cao chồi giống Đỏ cờ lại thấp nhiều Trong giống Chi đỏ, Đỏ cờ, Trắng tuyết xuất mô sẹo màu đen với kích thước lớn từ tuần thứ Chồi phát sinh hầu hết từ mô sẹo, có tượng lụi thủy tinh hóa Mai vàng tất công thứ cho nhiều chồi có hệ số nhân nhanh tương đối cao dao động từ 5,6 - 10, mô sẹo nhỏ tượng lụi hay thủy tinh hóa 3.2 Ra rễ tạo in vitro hoàn chỉnh Đối với chồi in vitro hoa cúc, trình tạo rễ dễ dàng, môi trường rễ hình thành sau 7-10 ngày nuôi cấy (H.3.6), nhiên rễ thường dài vài mảnh Dựa nghiên cứu trước dây tác giả La Việt Hồng cs (2014) Chúng lựa chọn môi trường MS có bổ sung NAA 0,3 mg/l để rễ tạo hoàn chỉnh Kết thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Ảnh hưởng NAA 0,3 mg/l đến rễ giống cúc Lan tím, Trắng tuyết, Đỏ cờ, Mai vàng, Chi đỏ Công Chỉ tiêu Lan tím thức/giống ĐC Trắng Đỏ cờ tuyết Mai Chi đỏ vàng Số rễ 3±0,58 2±0,21 3±0,15 3±0,2 3±0,31 Chiều dài 2,5±0,1 3,0±0,2 3,5±0,1 3,0±0,3 3,5±0,1 rễ (cm) NAA 0,3 Số rễ 8±0,58 7±0,26 8±1,73 7±0,26 6±0,15 mg/l Chiều dài 3,0±0,2 2,5±0,2 3,0±0,1 3,0±0,1 2,5±0,1 rễ (cm) 31 a Hình 3.6 Chiều dài rễ Trắng tuyết sau ngày nuôi cấy Ở công thức NAA 0,3 mg/l, rễ xuất sau ngày nuôi cấy, rễ mập, khỏe, đạt chiều dài 2,0 - 3,0 (cm) sau ngày (H.3.6), thời điểm thích hợp để rèn luyện thích nghi với điều kiện tự nhiên Kết nghiên cứu tương tự kết Kashif waseem, (2011) [27] ông tiến hành rễ tạo hoàn chỉnh môi trường ½ MS bổ sung với NAA IAA nồng độ khác Trong môi trường ½ MS bổ sung 0,2 mg/l NAA cho kết sau: có 100% mẫu phản ứng, trung bình 15 rễ/mẫu rễ dài 10,6 cm (sau tuần nuôi cấy) Trong thí nghiệm sử dụng môi trường MS + 0,3 mg/l NAA cho kết sau: 100% mẫu phản ứng, trung bình rễ/mẫu rễ dài 2,5 cm (sau tuần nuôi cấy) Như thấy kết thí nghiệm thu tốt ngang với kết Kashif waseem (2011) 32 3.3 Rèn luyện in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Trong nghiên cứu lựa chọn tiến hành rèn luyện 5000 cúc Mai vàng in vitro trực tiếp đồng ruộng thôn Đại Bái - xã Đại Thịnh - Mê Linh - Hà Nội Kết cho thấy tỉ lệ sống sót đạt 92,5% Cây cúc In vitro thích nghi tốt với điều kiện khí hậu Hình 3.7 Rèn luyện cúc in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Tỉ lệ sống sót cúc in vitro tự nhiên cao, thích nghi tốt với điều kiện khí hậu, trình rèn luyện tiến hành dễ dàng quy mô rộng lớn chi phí thấp nhiên khó kiểm soát yếu tố sinh thái tới rèn luyện 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1.1 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro Từ kết thu từ đề tài này, đưa số kết luận sau: Môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh chồi Trắng tuyết 0,3 mg/l BAP (6 - chồi/mẫu, chiều cao chồi 2,0-3,8 cm) Môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh chồi Mai vàng 0,3 mg/l BAP + 10% nước dừa (6,52 - 8,8 chồi/mẫu ,chiều cao chồi 2,22 - 4,38 cm tỷ lệ phần trăm mức phản ứng đạt 100%) Môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh chồi Lan tím 0,5 mg/l BAP + 10% nước dừa (4,75 - 5,91 chồi/mẫu, chiều cao chồi 2,46 - 3,34 cm) Môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh chồi Chi đỏ 0,5 mg/l BAP + 10% nước dừa (3,59 - 7,75 chồi/mẫu, chiều cao chồi 2,55 - 3,19 cm tỷ lệ phần trăm mức phản ứng đạt 100%) Môi trường phù hợp cho tái sinh nhân nhanh chồi Đỏ cờ 1,0 mg/l BAP (5,14 - 6,2 chồi/mẫu, chồi cao từ 1,77 - 2,57 cm) 1.2 Ra rễ tạo invitro hoàn chỉnh Nồng độ NAA 0,3 mg/l phù hợp với rễ tạo in vitro hoàn chỉnh năm giống cúc Lan tím, Trắng tuyết, Đỏ cờ, Mai vàng Chi đỏ 1.3 Rèn luyện thích nghi với điều kiện tự nhiên Tỉ lệ sống sót cúc In vitro tự nhiên cao, thích nghi tốt với điều kiện khí hậu, trình rèn luyện tiến hành dễ dàng quy mô rộng 34 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu cải tiến, hoàn thiện môi trường nhân giống invitro năm giống hoa cúc để đạt hiệu cao Tiếp túc nghiên cứu để đưa sản xuất đại trà giống cúc với số lượng lớn, chất lượng cao, đáp ưng nhu cầu tiêu dùng Thực hợp tác với sở Khoa học Công nghệ, trung tâm giống trồng để chuyển giao công nghệ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Việt Nam [1] Trần Tuấn Anh, Phạm Thanh Hương ( 2006), Tìm hiểu giới thực vật, Nxb Giáo dục [2] Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến (1978), Phân loại thực vật (Thực vật bậc cao), Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp [3] Lê Hữu Cẩn, Nguyễn Xuân Linh Giáo trình hoa, cảnh NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2003, trang 81 -95 [4] Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc (2003), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao – Cây hoa Cúc, Nxb lao động – Xã hội [5] Nguyễn Thị Diệu Hương, Dương Tấn Nhựt (2004), “Hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa cúc (Chrysanthemum indicum L.) bệnh kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng”, Tạp chí sinh học, 26 (4), tr 45- 48 [6] Trần Thị thu Hiền, Phạm Thị Như Quỳnh, Mai văn Chung, Nguyễn Đình San (2007), “Nhân nhanh giống cúc CN97 kỹ thuật nuôi cấy in vitro”, Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, 1(7), tr 30 - 33 [7] Nguyễn Thị kim Lý, Nguyễn Xuân Linh (1999), “ Kết thực nghiệm trồng số giống Cúc vụ xuân – hè Hà nội”, Tạp chí Khoa học – Công nghiệp Quản lý kinh tế NNCNTP [8] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, 12: 179-216 [9] Dương Tấn Nhựt cs (2005), “Để nâng cao chất lượng giống hoa cúc nuôi cấy in vitro thông qua nuôi cấy thoáng khí” Tạp chí sinh học, 27(3), tr 92 -95 [10] Đặng Thị Tố Nga (2015), Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật phát triển hia cúc thành phố Thái Nguyên [11] Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 36 [12] Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Xuân Trường (1998), “Thử nghiệm số dung dịch dinh dưỡng cho việc trồng số rau kỹ thuật trồng dung dịch”, Tạp chí nông nghiệp công nghiệp thực phẩm [13] Nguyễn Quang Thạch, Đặng Văn Đông (2002), Cây hoa Cúc kỹ thuật trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội [14] Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Giáo dục [15] Đỗ Năng Vịnh Công nghệ sinh học trồng NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2002 Tài liệu nước [16] Chakrabarty D, Mandal AKA, Datta SK Management of chimera through direct shoot regeneration from florets of chrysanthemum (Dendranthema grandiflora Ramat) J Hortic Sci Biotechnol (1999);74:293-6 [17] Fukai, S.; Goi, M and Tanaka, M (1991), Cryopreservation of shoot tips of chrysanthemum morifolium, Euphytica, 54: 201- 204 [18] Haberlandt, G.; (1902), Culturversuche mit isolierten Pflanzenzellen, StizBer Mat Nat Kl Kais Akad Wiss Wien, 111: 62 – 69 [19] Jaime A (2014), Novel Factors Affecting Shoot Culture of Chrysanthemum (Dendranthema × Grandiflora) [20] Kahsif Waseem (2009), Efect of different auxins on the regeneration Chrysanthemum Leaf Discs [21] Ksenija karlovie, Ines Vrsek, Zoran Sindrak, Vesna Zidovec (2004), “Influence of Growth Regulatons on the Height and Number of Inflorescence Shoots in the Chrysanthemum Cultivar “Revert””, Agriculturae Conspectus Scientificus, (69), pp 63-66 [22] Murashige T and Skoog F (1962), “A revised medium for rupid growth and bioassays with tobacco tissue culture”, Physiol Plant 15: 473 – 479 37 [23] M.Z.Karim et al (2003), In vitro Shoot Multiplication of Chrysanthemum morifolium as Affected by Sucrose, Agar and pH [24] Manu Pant, Ankita Lal, Rashi Jain, 2015 A simple cost effective method for mass propagation of Chrysanthemum morifolium and antibacterial activity assessment of in vitro raised plantlets [25] Linh Xuân Nguyễn, (1998) Cut Flower Production in ASIA FAO, Bangkok, Thailand, p.63-67 [26] S.R Dalal, G.D Karale and Kalkame C.H Momin (2009), “Effect of growth regulatons on growth, yield anh quality of Chrysanthemum under net house conditions”, Asian Jouranl of Horticulturae, 4(1) Pp.161-163 [27] Kashif waseem (2011), Effcient in vitro regeneration of chrysanthemum (Chrysanthemum moifolium L.) plantlets from nodal segments [28] Snjezana Keresa, Anita Mihovilovic, Marijana Baric, Vesna Zidovec and Mario Skelin, 2012 The micropropagation of chrysanthemums via axillary shoot proliferation and highly efficient plant regeneration by somatic embryogenesis [29] Yoon Ha Kim, Abdul Latif Khan, Muhammad Hamayun, Jung Tae Kim, Jon Hee Lee, In Cheon Hwang, Cheoul Su Yoon, In-Jung Lee (2010), “Effects of prohexadione Calcium on growth and gibberellins contents of Chrysanthemum morifoliumR Cv Monalisa White”, Scientia Horticulturae, (123), pp 423-427 [30] Yepes LC, Mittak V, Pang S-Z, Gonsalves C, Slightom JL, Gonsalves D Biolistic transformation of chrysanthemum with the nucleocapsid gene of tomato spotted wilt virus Plant Cell Rep 1995;14:694 – [31] Zhen Liu, Shanlin Gao (2007) Micropropagation and induction of autotetraploid plants of Chrysanthemum cinerariifolium (Trev) 38 Khóa luận phần của: Công trình tham dự hội nghị quốc gia: Nghiên cứu giảng dạy sinh học toàn quốc Đà Nẵng Công trình tham dự đạt giải Tài khoa học trẻ HPU2 39 ... NỘI KHOA SINH - KTNN  NGUYỄN THỊ CHUNG ANH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH NĂM GIỐNG CÚC (TRẮNG TUYẾT, MAI VÀNG, LAN TÍM, CHI ĐỎ VÀ ĐỎ CỜ) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT... khoa học cho nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy mô giống cúc Trắng tuyết, Mai vàng, Lan tím, Chi đỏ Đỏ cờ 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Tìm môi trường tối ưu để nhân nhanh số giống cúc (Trắng tuyết, Mai vàng,. .. (Trắng tuyết, Mai vàng, Lan tím, Chi đỏ Đỏ cờ) kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Mục đích nghiên cứu Tiến hành thí nghiệm hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro số giống cúc Mục tiêu nghiên