Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống cây củ mài (dioscorea persimilis) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN -***** - PHẠM THỊ QUY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY CỦ MÀI ( Dioscorea persimilis) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật HÀ NỘI, 2017 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN -***** - PHẠM THỊ QUY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY CỦ MÀI ( Dioscorea persimilis) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI, 2017 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS La Việt Hồng – Khoa Sinh KTNN Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn tới Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN, trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện để hoàn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài nhận giúp đỡ tận tình cô Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý học thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để hoàn thành đề tài khóa luận, nhân xin gửi lời cảm ơn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng thí nghiệm Sinh lí học thực vật trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, phương tiện để hoàn thành khóa luận Cảm ơn gia đình bạn bè động viên, góp ý cho qua trình học tập hoàn thành đề tài Hà Nội, 18 tháng 04 năm 2017 Sinh viên PHẠM THỊ QUY LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố Hà Nội, 18 tháng 04 năm 2017 Sinh viên PHẠM THỊ QUY MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Nội dung nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm phân loại Củ mài 1.1.1 Phân loại thực vật Củ mài 1.1.2 Đặc điểm thực vật học Củ mài 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến 1.1.4 Đặc điểm dƣợc liệu hạt tinh bột Củ mài sau chế biến 1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.6 Công dụng 1.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1.1 Tính toàn tế bào thực vật 1.2.1.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 1.2.1.3 Cơ chế di truyền thông qua hệ tế bào 1.2.2 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2.1 Khử trùng mẫu cấy khởi động 1.2.2.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 1.2.2.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi 1.2.2.4 Tạo hoàn chỉnh 10 1.2.2.5 Giai đoạn đƣa đất 10 1.2.3 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 1.2.3.1 Các muối khoáng đa lƣợng vi lƣợng 11 1.2.3.2 Nguồn cacbon 12 1.2.3.3 Các vitamin acid amin 12 1.2.3.4 Các chất điều hòa sinh trƣởng 13 1.2.3.5 Các chất bổ sung, làm thay đổi trạng thái môi trƣờng 14 1.2.3.6 pH môi trƣờng 15 1.2.4 Ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 15 1.2.4.1 Điều kiện vô trùng 15 1.2.4.2.Môi trƣờng vật lý 15 1.3 Tình hình nghiên cứu sử dụng Củ mài Việt Nam giới 16 1.3.1 Tình hình nghiên cứu sử dụng Củ mái Việt Nam 16 CHƢƠNG VẬT LIỆU, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Vật liệu nghiên cứu 18 2.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 18 2.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 18 2.3.1 Thiết bị 18 2.3.2 Dụng cụ 18 2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 18 2.5 Điều kiện nuôi cấy 18 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.6.1 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 19 2.6.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.6.2.1 Tạo vật liệu khởi đầu 19 2.6.2.2 Tái sinh chồi: Nghiên cứu ảnh hƣởng số chất điều tiết sinh trƣởng đến khả tái sinh chồi Củ mài 20 2.6.2.3 Ra rễ tạo Củ mài in vitro hoàn chỉnh 21 2.6.2.4 Huấn luyện Củ màiin vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 22 2.7 Phƣơng pháp thống kê 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 24 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro củ mài 25 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP đến khả nhân chồi 27 3.2.2 Ảnh hƣởng BAP kết hợp NAA lên khả nhân chồi 28 3.3 Ảnh hƣởng NAA đến hình thành rễ chồi Củ mài in vitro 29 3.4 Huấn luyện Củ mài in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC 39 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Công thức thí nghiệm tạo vật liệu in vitro Củ mài 28 Bảng 2.2: Công thức ảnh hưởng BAP đến nhân nhanh chồi Củ mài in tro 29 Bảng 2.3: Công thức ảnh hưởng BAP kết hượp NAA đến khả nhân chồi Củ mài in tro 29 Bảng 2.4: Công thức ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Củ mài in vitro 30 Bảng 2.5: Công thức ảnh hưởng giá thể tới thích nghi Củ mài 30 Bảng 3.1: Kết tạo vật liệu khởi đầu đốt thân Củ mài 33 Bảng3.2: Ảnh hưởng BAP lên khả nhân chồi Củ mài sau tuần nuôi cấy 36 Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP kết hợp NAA lên khả nhân chồi Củ mài nuôi cấy 38 Bảng 3.4: Ảnh hưởng NAA lên khả nhân chồi củ mài sau tuần nuôi cấy 39 Bảng 3.5: Ảnh hưởng giá thể đến hoá Củ mài in vitro 40 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cây Củ mài 11 Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu 27 Hình 3.1: Vật liệu khởi đầu 34 Hình 3.2: Tái sinh nhân nhanh chồi Củ mài in vitro 35 Hình 3.3: Rễ Củ mài in vitro 39 Hình 3.4: Rèn luyện tự nhiên 41 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT NAA: α- Napthlacetic acid KI: Kinetin IBA: Indol 3- butyric acid IAA: - Indole - acetic acid BAP: 6- Benzyl amino purin MS: Murashige Skoog Nxb: Nhà xuất khử trùng với mẫu in vitro Tuy nhiên có khác hiệu quả, CT4 (xử lí sơ bộ+javen 7%(v/v)/10 phút) cho hiệu khử trùng tốt đạt 83,33% Supriya Das cs (2013) nghiên cứu đối tượng Dioscorea alata L sử dụng HgCl2 0,1% (w/v) thời gian phút cho hiệu khử trùng tốt [32] Hình 3.1: Tạo vật liệu khởi đầu A: Thân non Củ mài B:Mẫu Củ mài bệnh 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro củ mài Sự hình thành nhân nhanh chồi in vitro có vai trò quan trọng việc tạo lượng lớn in vitro, định hiệu quy trình nhân giống Quá trình tái sinh nhân nhanh thường phụ thuộc vào chất điều hòa sinh trưởng bổ sung vào môi trường nuôi cấy chủ yếu chất thuộc nhóm cytokinin số trường hợp chất thuộc nhóm auxin gibberellin nồng độ thấp kết hợp chất thuộc nhóm cytokinin với chất thuộc nhóm auxin Các cytokinin sử dụng phổ biến BAP Các auxin sử dụng phổ biến NAA 25 Hình 3.2: Tái sinh nhân nhanh chồi Củ mài in vitro A: Mẫu nuôi cấy môi trường B0,1; B: Mẫu nuôi cấy môi trường B0,3; C: Mẫu nuôi cấy môi trường B0,5; D: Mẫu nuôi cấy môi trường B0,5+N0.5; E: Mẫu nuôi cấy môi trường B1,5+ N0,5; F: Mẫu nuôi cấy môi trường B2,0+ N0,5 26 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP đến khả nhân chồi BAP chất điều hòa sinh trưởng sử dụng phổ biến nhân nhanh chồi Việc bổ sung BAP vào môi trường nuôi cấy làm tăng kích thước tế bào mà kích thích trình trao đổi chất [ 8] Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP (0,1-1,5 mg/l) lên khả nhân chồi Củ mài trình bày bảng 3.2 Bảng3.2: Ảnh hưởng BAP lên khả nhân chồi Củ mài sau tuần nuôi cấy CT Số chồi/mẫu Số lá/ chồi Chiều cao chồi(cm) ĐC 1,50± 0,55a 6,50 ± 1,05b 5,65 ± 0,50c B0,1 3,83± 0,75c 2,17 ± 0,75a 2.10 ± 0,26a B0,3 5,00± 0,89d 2,50 ± 0,55a 3.22 ± 0,21b B0,5 2,50 ± 0,55b 2,17 ± 0,41a 2,23 ± 0,56a B1,0 2,67± 0,82b 2,83 ± 0,75a 2.93 ± 0,22b Đặc điểm chồi tái sinh Thân màu tía, cao, to, màu xanh đậm Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Thân màu tía, B1,5 3,00± 0,63 2,33 ± 0,82 2.35 ± 0,19 thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Các chữ khác cột thể khác biệt với mức bc a a ý nghĩa α = 0,05 Ảnh hưởng BAP đến số chồi mẫu: Kết cho thấy BAP kích thích hình thành chồi Số lượng chồi đạt tỉ lệ cao 5,00 chồi mẫu CT B0,3 mg/l, chồi thu chồi có thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt( Hình 3.2b) Tiếp đến CT B0,1 cho số lượng chồi 3,83 (Hình 3.2a) Ở CT B0.5, B1, B1.5 có số chồi mẫu gần nhau( 2,5, 2,67, 3) 27 (Hình 3.2c) Tại công thức bổ sung BAP chồi thu chồi thân màu tía thấp màu xanh nhạt Tuy nhiên công thức đối chứng đặc điểm chồi tốt hơn, chồi cao, màu xanh đậm Ảnh hưởng BAP đến số chồi chiều cao chồi: Kết thu cho thấy BAP không ảnh hưởng nhiều tới số chồi, chiều cao chồi Giữa công thức số gần tương đương (2.17, 2.5, 2.17, 2.83, 2.33), chiều cao chồi sai khác Như vậy, nghiên cứu ảnh hưởng BAP (0,1-1,5 mg/l) đến khả nhân chồi in vitro củ mài đến kết luận 0,3 mg/l BAP môi trường cho hệ số nhân chồi cao với 5,00 chồi/mẫu Còn không bổ sung BAP(công thức đối chứng) chồi đạt chiều cao tốt 5,65 cm cho số chồi, hình thái chồi tốt Thankappan (2012) nghiên cứu Dioscorea wallichii cho môi trường BAP mg/l thích hợp để tạo chồi với số chồi đạt 2,6 chồi [33].Sở dĩ có khác có lẽ đối tượng nghiên cứu khác 3.2.2 Ảnh hƣởng BAP kết hợp NAA lên khả nhân chồi Các chồi củ mài cấy lên môi trường MS bổ sung tổ hợp BAP (0,5-2,0 mg/l) kết hợp với 0,5 mg/l NAA để thăm dò khả nhân nhanh chồi in vitro Kết sau tuần nuôi cấy trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP kết hợp NAA lên khả nhân chồi Củ mài sau tuần nuôi cấy Chiều cao Đặc điểm chồi(cm) chồi tái sinh 6,50 ± 1,05c 5,48 ± 0,34d +++ 4,50 ± 1,05b 1,67 ±0,82a 1,85 ± 0,39a ++ 0,05 3,67 ± 0,82b 1,83 ± 0,75a 2,62 ± 0,39a ++ 1,50 0,50 6,83 ± 1,47c 1,50 ± 0,54a 3,83 ± 1,38b ++ 2,00 0,50 1,83 ± 0,75a 3,17 ± 0,75b 4,97 ± 0,72c + BAP NAA Số chồi/mẫu Số lá/chồi 0,00 0,00 1,50 ± 0,55a 0,50 0,50 1,00 28 Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 +++: ++: + : Thân màu tía, cao, to, màu xanh đậm Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu xanh nhạt Thân màu tía, thấp, nhỏ, màu tía Kết thu cho thấy, môi trường kết hợp 1,5 mg/l BAP 0,5 mg/l NAA môi trường thích hợp cho hình thành sinh trưởng chồi (đạt 6,83 chồi)(Hình 3.2e) Trong đó, môi trường MS môi trường kết hợp mg/l BAP 0,5 mg/l NAA số lượng hình thành chồi thấp (đạt 1,83 chồi) (hình 3.2f) Theo Behera cs (2008) sử dụng môi trường MS bổ sung BAP 2,0 mg/l +NAA 0,5 mg/l + acid ascorbic 100 mg/l loài Dioscorea hispida với hệ số nhân nhanh lần [24] Các kết cho thấy có sai khác với kết đưa ra, nguyên nhân vật liệu nuôi cấy loài khác 3.3 Ảnh hƣởng NAA đến hình thành rễ chồi Củ mài in vitro Tạo rễ giai đoạn cuối trình nhân nhanh in vitro Với mục đích tạo có sức sống cao, đạt tiêu chuẩn Đối với nuôi cấy mô tế bào thực vật auxin sử dụng để kích thích phân chia tế bào phân hoá rễ Những auxin dùng rộng rãi nuôi cấy mô tế bào thực vật NAA Để tăng khả rễ cho chồi củ mài nghiên cứu tiến hành lấychồi củ mài thu từ thí nghiệm tách riêng lẻ cấy lên môi trường MS bổ sung NAA(0,1;0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mg/l )để khảo sát khả tạo rễ in vitro 29 Bảng 3.4: Ảnh hưởng NAA lên khả nhân chồi củ mài sau tuần nuôi cấy Chiều dài Công thức Số rễ/ chồi N0,1 5,80 ± 0,84a 8,84 ± 0,27a N0,2 8,00 ± 1,58c 15,14 ± 0,29c N0,3 7,40 ± 1,52bc 14,74 ± 0,46c N0,4 6,00 ± 0,70ab 9,54 ± 0,36b N0,5 5,20 ± 0,84a 9,08 ± 0,19a rễ(cm) Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 Hình 3.3: Rễ Củ mài in vitro A: Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung NAA 0,1l; B: Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung NAA 0,2; C: Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung NAA 0,3; D: Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung NAA 0,4; E: Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung NAA 0,5 Kết ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ củ mài trình bày bảng 3.4 cho thấy, môi trường bổ sung 0,2 mg/l NAA môi trường thích hợp cho trình hình thành rễ củ mài với trung bình 8,00 30 rễ/chồi (Hình3.3b); chiều dài rễ đạt giá trị lớn 15,14 cm nồng độ 0,2 mg/l Ở chồi rễ phát triển gần hoàn chỉnh giống với rễ củ mài tự nhiên, rễ có kích thước lớn, màu trắng Khi tăng nồng độ lên 0,5 mg/l NAA nhận thấy trình phát triển rễ bị ức chế dẫn đến hình thành rễ hơn, rễ có kích thước ngắn 3.4 Huấn luyện Củ mài in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Việc hoá vườn ươm khâu quan trọng, đảm bảo có tỉ lệ sống cao, sinh trưởng tốt đưa vào điều kiện sản xuất Kết rèn luyện Củ mài in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên thể bảng 3.5 31 Bảng 3.5: Ảnh hưởng giá thể đến hoá Củ mài in vitro Giá thể Đất thịt Tỷ lệ sống(%) Hình thái Cây cứng, khỏe, tạo 100 nhẹ rễ Đất cát 95 Cây mảnh, tạo rễ 98 Cây cứng, khỏe, tạo pha Đất: cát(1:1) rễ Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 A B Hình 3.4: Rèn luyện tự nhiên A: Cây Củ mài in vitro trồng già thể đất: cát (1:1) sau tuần huấn luyện B: Cây Củ mài in vitro trồng già thể đất thịt nhẹ sau tuần huấn luyện Kết bảng 3.5 cho thấy khác biệt ý nghĩa ảnh hưởng loại giá thể lên tỷ lệ sống Củ mài vườn ươm Tất cho tỷ lệ sống cao Tuy nhiên giá thể đạt tỷ lệ sống 100% đất thịt nhẹ Trong đó, giá thể đất thịt nhẹ cho cứng, khỏe, tạo rễ đánh giá giá thể thích hợp để chuyển Củ mài vườn ươm 32 Quy trình nhân giống in vitrocây Củ mài Ethanol 70%+ Javel 7% 10 phút Mẫu vô Thân non Củ mài tuần trùng MS+BAP 1,5+ NAA 0,5 NAA 0,2 tuần Đất thịt nhẹ 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Dựa vào kết thu từ thí nghiệm trên, rút số kết luận sau: 1.1 Sử dụng javen 7% 10 phút để khử trùng lan tạo vật liệu in vitro cho trình nhân giống Củ mài Phương pháp đạt hiệu khử trùng cao với tỷ lệ mẫu sống vô trùng 83,33% 1.2 Môi trường MS có 30g/l saccarose, 7g agar/l bổ sung BAP (1,5 mg/l) 0,5mg/l NAA thích hợp cho trình nhân nhanh chồi in vitro Số chồi hình thành đạt 6,83 chồi sau tuần nuôi cấy 1.3 Môi trường MS có 30g/l saccarose, 7g agar/l bổ sung NAA (0,2 mg/l) thích hợp cho tạo rễ in vitro, đạt 8,00 rễ/chồi sau tuần nuôi cấy 1.4 Cây trồng giá thể đất thịt nhẹ cho tỷ lệ sống đạt 100% Kiến nghị 2.1 Tiếp tục nghiên cứu phương pháp khử trùng mẫu với hóa chất khác nhiều phận khác 2.2 Nghiên cứu thêm môi trường nhân nhanh chồi 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tài liệu tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam.NXB Khoa hoc kỹ thuật Hà Nội Đỗ Năng Vịnh (2002).Công nghệ sinh học trồng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Đỗ Năng Vịnh (2007), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Đỗ Tất Lợi, (2004), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học Hà Nội Đỗ Thị Lan Hương, Trần Văn Ba, (2008) “Nghiên cứu đặc điểm hình thái cấu tao giải phẫu thích nghi với chức số học củ nâu (Dioscoreacea)”.Tạp chí khoa học ĐH Sư phạm Hà Nội 2,2008, số Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vậttrong cải tiến giống trồng, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Ngô Xuân Bình, Bùi bảo Hoàn, Nguyễn Thúy Hà (2003), Giáo trình công nghệsinh học, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Nguyễn Bảo Toàn, 2004, Nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhà xuất Đại học Cần Thơ Trang 28-32 Nguyễn Hồng Quân, (2006) “Cẩm nang ngành lâm nghiệp-chương Lâm sản gỗ”: Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn-chương trình hỗ trợ ngành lâm nghiệp đối tác, trang 130 10 Nguyễn Như Khanh, Cao Phi Bằng, (2012) Sinh lý học thực vật” NXB Giáo dục 11 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005),Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp,Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 12 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Trường Sơn, Đỗ Năng Vịnh (2003), “Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống nuôi trồng 35 phong lan Phalaenopsis (lan Hồ Điệp)”, Báo cáo khoa học, hội nghị CNSH toàn quốc 2003, trang 850-855 13 Nguyễn Thị Hiền, (2014) “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học hóa học số loài thuộc chi Củ mài (Dioscorea L.) Vĩnh Phúc”: Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện hàn lâm khoa học Việt Nam 14 Nguyễn Thị Tâm, Vũ Thị Lan, Nguyễn Thành Luân (2007), “Ảnh hưởng số yếu tố môi trường giá thể đến sinh trưởng lan Dendrrobium hybrid invitro", Tạp chí Khoa học Công nghệ, Trường đại học Thái Nguyên(3), trang 105-108 15 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, (2013) Phương pháp nghiên cứu Sinh lý học thực vật.NXB Đại học Quốc gia Hà Nội 16 Nguyễn Xuân Linh (2002),Giáo trình kĩ thuật trồng hoa cảnh,Nxb Nôngnghiệp, Hà Nội 17 Phạm Quang Trung, “Nghiên cứu số đặc điểm sinh thái củ mài khả hôm giống hom củ giai đoạn vườn ươm rừng đạc dụng Copia huyện Thuận Châu tỉnh Sơn La”: Trường Đại học Tây Bắc, Luận văn thạc sỹ 18 Võ Văn Chi, 1997 Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học, trang 328-332 19 Võ Văn Chi, 2007, Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam.Nxb Giáo dục 20 Vũ Thanh Sắc, Vũ Văn Vụ, Trần Thị Liên, Tạ Như Thụ Anh, Nguyễn Văn Thuận (2009), “Nghiên cứu nhân giống invitro Ban Âu Hypericum perforatum 1.”, Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc 2009, Trang 237-239 21 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2008), Công nghệ sinh học tập 2, Nhà xuất Giáo dục 36 * Tài liệu tiếng Anh 22 Alizadeh S., Mantell SH, Viana AM (1998), “In vitro culture and microtuber induction in the steroidal yamDioscorea composite Hemsl”, Plant Cell Tissue Organ Cult , 5(3), pp.107-112 23 Ayensu ES (1972), “Anatomy of the monocotyledons VI Dioscoreales”.Oxford Press, Oxford,p.182 24 Behera K.K., Sahoo S, Prusti A (2008), “Efficient in vitro micropropagation of greater yam (Dioscorea alata L.cv Hinjilicatu) through nodal vine explants”, Indian Journal of Plant Physiol, (14), pp.250-256 25 Borges M., Ceiro W., Meneses S., Aguilera N., Vazquez J., Infante Z and Fonseca M (2004), “Regeneration and multiplication of Dioscorea alata germplasm maintained in vitro” Plant Cell Tiss.Org.Cult, 7(6), pp.87-90 26 Fotso, Ngo Ngwe Marie Florence Sandrine1, DjocgouePierre François and Omokolo Ndoumou Denis (2013), “Micropropagation of Dioscorea alata L from microtubers induced in vitro”, African Journal of Biotechnology,12(10), pp.1057-1067 27 Jasik J, Mantell SH (2000), “Effects of jasmonic acid and its methyl esteron in vitro microtuberization of three food yam (Dioscorea) species”, Plant Cell Rep, 19, pp.863-867 28 Jean M and Cappadocia M (1992), “Effects of growth regulators on in vitro tuberization in Dioscorea alata L „Brazo fuerte‟ and D.abyssinica Hoch” Plant cell Rep, (11), pp.34-38 29 Kohmura H., Araki H and Imoto M (1995), “Micropropagation of „yam atoimo‟ Chineseyam (Dioscorea opposita Thunb.) from immature leaves”, Plant Cell Tiss.Org.Cult , (40), pp.271-276 30 Mantell SH, Hugo SA (1989), “Effects of photoperiod, mineral medium strength, inorganic ammonium, sucrose and cytokinin on root, shoot and microtuber development in shoot cultures of Dioscorea alata L and D.bulbifera L Yams”, Plant Cell Tiss.Org.Cult , (16), pp.23-37 37 31 Murashige T and Skoog F (1962), “A revised medium for rupid growth and bioassays with tobacco tissue culture”, Physiol Plant 15: 473 479 32 Supriya Das, Manabendra Dutta Choudhury and Pranab Behari Mazumdar, (2013), “Micropropagation of Dioscorea alata L through nodal segments”, African Journal of Biotechnology, Vol 12(47), pp 6611-6617 33 Thankappan and K Abraham, (2012) “Micropropagation and Microtuber Induction in Dioscorea wallichii Hook.f.”, Journal of Root Crops, 2012, Vol 38 No 2, pp 109-115 34 Tor M., Twyford CT., Funes I., Boccon-Gibod J., Ainsworth CC and Mantell SH (1998), “Isolation and culture of protoplasts from immature leaves and cell suspension of Dioscorea yams: Tools for transient gene expression studies”, Plant Cell Tiss.Org.Cult, 53, pp.113-125 35 Twyford CT., Mantell SH (1996), “Production of somatic embryos and plantlets from root cells of Greater Yam”, Plant Cell Tiss.Org.Cult , 46, pp.17-26 36 Ukaegbu M., Okpuzor J (2010), “A Study Of Changes In Some Biochemical Parameters During Bacterial Fermantation Of Dioscorea EsculentaTubers”, Report and Opinion, 2(6), pp.88-93 * Tài liệu internet 37 Đại học Tây Bắc, 2012 Nhân giống hạt, thuận lợi khó khăn. 38 Hải Lan, 2011, Củ mài hỗ trợ điều trị bệnh nhân đái tháo đường typ 2. 39 Traphaco, 2011 Ngân hàng Thế giới tài trợ cho “Đề án thuộc Dự án GreenPlan” Traphaco thông qua Chương trình Ngày sáng tạo Việt Năm 2011. 40 Viện Dược liệu, 2011, Cây thuốc, 38 PHỤ LỤC Nhân nhanh chồi Củ mài in vitro Thao tác box cấy vô trùng 39 ... Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1.1 Tính toàn tế bào thực vật Cơ sở lý luận phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật dựa học... persimilis) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Mục tiêu đề tài - Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống Củ mài kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn -Ý... PHẠM THỊ QUY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY CỦ MÀI ( Dioscorea persimilis) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật Ngƣời