Nghiên Cứu Nhân Giống Cây Quýt Bắc Kạn Bằng Kỹ Thuật Nuôi Cấy Mô Tế Bào Thực Vật

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHÍ HỮU VIỆT NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY QUÝT BẮC KẠN BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHÍ HỮU VIỆT NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY QUÝT BẮC KẠN BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN THỊ TÂM THÁI NGUYÊN - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan trực tiếp làm nghiên cứu luận văn Mọi kết thu trung thực, không chỉnh sửa, không chép từ kết nghiên cứu khác Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn chưa cơng bố Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! Tác giả luận văn Phí Hữu Việt i LỜI CẢM ƠN Trong trình thực luận văn, nhận quan tâm giúp đỡ tận tình nhiều cá nhân, quan đơn vị Nay luận văn hồn thành, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới: PGS TS Nguyễn Thị Tâm, người tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện, giúp đỡ nghiên cứu thực đề tài Các thầy giáo, cô giáo thuộc khoa Sinh học, phận Sau đại học Phòng Đào tạo, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giảng dạy tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Cán kỹ thuật viên phịng Cơng nghệ tế bào thực vật – Khoa Sinh họcTrường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện cho tiến hành luận văn Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện, giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập Thái Nguyên, tháng năm 2017 Tác giả luận văn Phí Hữu Việt ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm phân loại, sinh học thành phần dinh dưỡng quýt 1.1.1 Đặc điểm phân loại đặc điểm sinh học 1.1.2 Thành phần dinh dưỡng quýt 1.2 Tình hình sản xuất quýt giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất quýt giới 1.2.2 Tình hình sản xuất quýt Việt Nam 1.3 Kỹ thuật nhân giống in vitro công nghệ tế bào thực vật 1.3.1 Ưu phương thức nhân giống in vitro 1.3.2 Quy trình nhân giống in vitro 1.4 Chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm auxin cytokinin sử dụng ni cấy mơ thực vật 11 1.4.1 Auxin 12 1.4.2 Cytokinin 13 1.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến nhân giống trồng ống nghiệm 14 1.6 Một số thành tựu nhân giống ăn có múi kỹ thuật ni cấy in vitro 15 iii Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Vật liệu, hoá chất, thiết bị địa điểm nghiên cứu 19 2.1.1 Vật liệu thực vật 19 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 19 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Nhóm phương pháp ni cấy in vitro 20 2.2.2 Phương pháp đưa vườn ươm 22 2.2.3 Phương pháp xử lí số liệu 23 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt quýt Bắc Kạn 24 3.2 Ảnh hưởng riêng rẽ BAP kinetin đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 27 3.2.1 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 27 3.2.2 Ảnh hưởng kinetin tới phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 30 3.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP kinetin với IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 33 3.3.1 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 33 3.3.2 Ảnh hưởng tổ hợp kinetin IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 35 3.4 Ảnh hưởng α-NAA đến hình thành rễ quýt Bắc Kạn 38 3.5 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn tự nhiên 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 Kết luận 43 Đề nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 47 iv DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : 2,4 - dichlorophenoxy acetic acid BAP : Benzylamino purine cs : Cộng CT : Công thức DNA : Deoxyribo nucleic acid ĐC : Đối chứng IAA : indol acetic acid IAA : indole acetic acid IBA : Indol butyric acid Kinetin : 6-furfurylamino purine MS : Murashige and Skoog (1962) α-NAA : α- naphthalene acetic acid iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần môi trường MS 19 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt quýt Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 25 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 28 Bảng 3.3 Ảnh hưởng kinetin đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 31 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 34 Bảng 3.5 Ảnh hưởng tổ hợp kinetin IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 36 Bảng 3.6 Ảnh hưởng α-NAA đến phát sinh rễ quýt Bắc Kạn 39 Bảng 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn tự nhiên (sau tuần) 41 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt quýt Bắc Kạn (sau tuần) 26 Hình 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn 30 Hình 3.3 Ảnh kinetin đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn (sau tuần) 32 Hình 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 35 Hình 3.5 Ảnh hường tổ hợp kinetin IBA đến phát sinh chồi quýt Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 37 Hình 3.6 Ảnh hưởng NAA đến hình thành phát triển rễ quýt Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 40 Hình 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn tự nhiên (sau tuần) 42 vi MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây quýt (Citrus recutilata Blanco) ăn nhiều người biết đến với vị mát, thơm đặc trưng, có chứa nhiều vitamin, chất khống chất dinh dưỡng cần thiết khác cho người Các chuyên gia dinh dưỡng khuyên ta nên tích cực ăn quýt hàng ngày Cây quýt không nguồn cung cấp chất dinh dưỡng mà cịn đóng vai trị tích cực việc phát triển kinh tế nhiều địa phương Do chất lượng tốt nên nhu cầu tiêu thụ quýt thị trường ngày tăng với số lượng lớn Giá thành ổn định mang lại hiệu kinh tế cao cho người trồng quýt, nhiều hộ gia đình nghèo vươn lên làm giàu từ qt Trồng qt cịn có vai trị phủ xanh đất trống đồi trọc, giúp tạo cảnh quan bảo vệ môi trường sinh thái Với chiều cao từ 2,0-3,5m, xanh che phủ quanh năm, thích nghi với điều kiện sống khô hạn, nên quýt phù hợp với vùng trung du miền núi Do đó, trồng quýt đồi dốc vừa đem lại hiệu kinh tế vừa phủ xanh đồi trọc chống xói mịn, bảo vệ mơi trường sinh thái Khơng thế, qt trồng vườn nhà, cao vừa phải, thường xanh, hoa màu sắc đẹp, có tinh dầu tỏa mùi thơm mát, cịn trồng để làm cảnh Cây quýt Bắc Kạn trồng chủ yếu huyện Chợ Đồn, có vị nọt mát, hương thơm đặc trưng, loại quý cần bảo tồn Đồng thời, quýt Ủy ban Nhân dân tỉnh Bắc Kạn xác định trồng mạnh đóng vai trò chiến lược phát triển kinh tế, có nhiều sách chế độ phát triển quýt Tính đến năm 2015, diện tích quýt toàn tỉnh Bắc Kạn lên tới 2200 ha, tăng gấp lần so với năm 2005, tổng sản lượng khoảng 10000 tấn/năm mang lại giá trị sản xuất 100 tỷ đồng cho nông dân Tuy nhiên, giá trị chưa xứng tầm với tiềm sẵn có địa phương Một Như vậy, mơi trường tối ưu cho hình thành phát triển rễ quýt Bắc Kạn môi trường MS bổ sung agar 9g/l + sucrose 30g/l + nước dừa 50ml/l + α-NAA 0,5mg/l, với tỉ lệ chồi hình thành rễ 90%, số rễ/chồi 2,89 rễ, chiều dài trung bình rễ 2,10cm Đối chứng α-NAA 0,5mg/l Hình 3.6 Ảnh hưởng NAA đến hình thành phát triển rễ quýt Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 3.5 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn ngồi tự nhiên Đưa ngồi mơi trường tự nhiên khâu cuối quy trình nhân giống in vitro có vai trị quan trọng định đến thành cơng quy trình nuôi cấy Giá thể phù hợp phải cho tỉ lệ sống cao, sinh trưởng phát triển tốt Đất phù sa hình thành chủ yếu phù sa bồi tụ sông tạo nên vùng đồng rộng Đất phù sa trẻ, đê (đất phù sa bồi đắp) có màu nâu, độ phì nhiêu cao, tơi xốp, nhiều mùn, nhiều khoáng sét, giàu ion trao đổi, giữ nước tốt Đất phù sa cổ đất phù sa đê, bị đào xới nhiều hoạt động trồng trọt màu nhạt, độ phì nhiêu giảm [300] Qua tìm hiểu giá thể ươm tham khảo cơng trình nghiên cứu giá thể đưa qt ngồi mơi trường tự nhiên tác Phan Hữu 40 Tơn (2014) [14], chăm sóc in vitro bầu Lê Văn Hồng (2007) [4] tìm hiểu đặc điểm đất phù sa, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng, phát triển cấy quýt Bắc Kạn qua loại giá thể: đất phù sa, trấu hun, đất phù sa + trấu hun (tỉ lệ 1:1) Đất phù sa dùng làm giá thể loại đất phù sa trẻ, lấy bãi ven sơng Cây thí nghiệm chăm sóc Kết thu bảng 3.7 Bảng 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn ngồi tự nhiên (sau tuần) Giá thể thí nghiệm Tỉ lệ sống(%) Chất lượng Đất phù sa 46,67 + Trấu hun 56,67 ++ Đất phù sa+ trấu hun (tỉ lệ 1:1) 83,33 +++ Ghi chú: (+): Lá chuyển màu xanh nhạt, có nhiều bị rụng, khơng phát triển thêm mới; (++): Lá màu xanh đậm, chưa xuất mới; (+++): Lá màu xanh đậm, phát sinh thêm Qua bảng 3.7 cho thấy, loại giá thể khác tỉ lệ sống, chiều cao khác Chứng tỏ giá thể ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển quýt Bắc Kạn Giá thể tốt in vitro ngồi mơi trường tự nhiên đất phù sa + trấu hun (tỉ lệ 1:1), tỉ lệ sống sau tuần 83,33 %, đó, giá thể đất phù sa tỉ lệ sống 46,67% trấu hun tỉ lệ sống 56,67% Những trồng giá thể đất phù sa cịn sống khơng hình thành mới, cũ rụng nhiều, khơng cịn màu xanh đậm lúc Cây trồng giá thể trấu hun, không rụng, không chuyển màu, nhiên không phát sinh Cây trồng giá thể đất phù sa + trấu hun (tỉ lệ 1:1) tỉ lệ sống cao (83,33%), bắt đầu hình thành mới, cũ phát triển, phiến rộng màu xanh đậm Cây chuyển từ môi trường nuôi cấy nhân tạo, khả hấp thụ nước chất dinh dưỡng 41 chưa tốt, giá thể đất phù sa + trấu hun có đủ độ tơi xốp, thống khí, nhiều chất khống, khả giữ nước tốt, thuận lợi cho rễ hấp thụ nước, tỉ lệ sống cao, sinh trưởng tốt Trấu hun Đất phù sa + trấu hun Đất phù sa (1:1) Hình 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến việc đưa in vitro giống quýt Bắc Kạn tự nhiên (sau tuần) 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Thời gian khử trùng dung dịch Javen 60% tốt lắc 20 phút Với lượng thời gian tỉ lệ nhiễm thấp, tỉ lệ nảy mầm cao, mầm to khỏe 1.2 Nồng độ BAP tốt cho tái sinh chồi trực tiếp từ gốc mang nách mầm quýt Bắc Kạn 3,0mg/l môi trường MS bổ sung agar 9g/l + sucrose 30g/l + nước dừa 50ml/l 1.3 Nồng độ phối hợp BAP IBA tốt cho tái sinh chồi từ gốc mang nách mầm quýt Bắc Kạn BAP 3,0mg/l + IBA 1,5mg/l mơi trường MS có bổ sung agar 9g/l + sucrose 30g/l + nước dừa 50ml/l, tỉ lệ phát sinh chồi 93,33% số chồi trung bình/mẫu 4,68 Các chồi to, khỏe, to phát triển cân đối 1.4 Môi trường tối ưu cho hình thành rễ quýt Bắc Kạn MS có bổ sung agar 9g/l + sucrose 30g/l + nước dừa 50ml/l + α-NAA 0,5mg/l Các rễ hình thành dài mập, khỏe có nhiều lơng hút 1.5 Giá thể tốt cho việc chuyển in vitro đất phù sa + trấu hun tỉ lệ 1:1, với tỉ lệ sống 83,33%, sinh trưởng tốt, phát sinh cành mới, to, xanh Đề nghị 2.1 Tiếp tục nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng chất phụ gia khác đến phát sinh chồi, sinh trưởng phát triển chồi nuôi cấy in vitro quýt Bắc Kạn 2.2 Ứng dụng quy trình nhân giống chuyển gen vào giống quýt Bắc Kạn, nhằm nâng cao chất lượng quýt Bắc Kạn 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ tế bào thực vật cải tiến giống trồng, NXB Nông nghiệp Hà nội Nguyễn Minh Chơn (2004), Giáo trình chất điều hịa sinh trưởng thực vật, khoa Nông nghiệp - Đại học Cần Thơ Nguyễn Hữu Đống (2003), Cây ăn có múi (cam chanh, quýt, bưởi), NXB Nghệ An Lê Văn Hồng (2007), Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật, NXB Khoa học Kỹ thuật Lê Văn Trường Huân, Hoàng Ý Nhi (2007) , “Nghiên cứu tạo chồi in vitro chanh dây (Passiflora edulis Sims.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, NXB khoa học kĩ thuật (2007), tr 308-310 Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình chất điều hịa sinh trưởng thực vật, NXB Giáo dục Việt Nam Nguyễn Bá Lộc (1997), Giáo trình sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục Mai Xn Lương (2005), Giáo trình Cơng nghệ Sinh học thực vật, NXB Đại học Đà Lạt Chu Hồng Mậu (2008), Phương pháp phân tích di truyền đại chọn giống trồng, NXB Đại học Thái Nguyên 10 Dương Tuấn Nhựt (2011), Công nghệ tế bào thực vật, NXB Nơng nghiệp 11 Hồng Thị Sản (1977), Phân loại thực vật, NXB Giáo Dục 12 Nguyễn Đức Thành (2002), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp 13 Phan Hữu Tôn cs (2014), “Nuôi cấy in vitro trụ mầm giống cam (Citrus sinensis), quýt (Citrus reticulata)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 12, số 5; tr 641-649 44 14 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng , NXB Nông nghiệp Hà Nội 15 Đỗ Năng Vịnh, Ngô Xuân Bình (2008), Giáo trình cơng nghệ sinh học đại cương, NXB Nông nghiệp Hà Nội 16 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2010), Công nghệ sinh học Tập II, NXB Giáo Dục Việt Nam 17 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hồng Minh Tâm (1999), Sinh lí học thực vật NXB Giáo Dục II Tài liệu tiếng Anh 18 Adhikarimayum H., Kshetrimayum G., Huidrom S., Maibam (2011), “In vitro propagation of Citrus D megaloxycarpa”, Environmental and Experimental Biology, (9), pp.129-132 19 Saini H.K., Gill M.S and Gill M.I.S., (2010), “Direct shoot organogenesis and plant regeneration in rough lemon (Citrus jambhiri Lush.)”, Indian Journal of Biotechnology, 9, pp 419-423 20 Sarker I cs (2015), “Establishment of a standard protocol for in vitro meristem culture and plant regeneration of Citrus aurantifollia”, Journal of Pharmacy and Biological Sciences, 10(2), pp 61-69 21 Ibrahim M A (2012), “In vitro plant regeneration of local pummelo (Citrusn Grandis (L.) Osbeck.) via direct and indirect organogenesis”, Genetics and Plant Physiology, (3-4), pp 187-191 22 Mohammad H R., cs (2013), “In vitro regeneration of sour orange (Citrus aurantium L.) via direct organogenesis”, Plant Knowledge Journal, Southern Cross Publishing Group, 2(4), pp 150 - 156 23 S Hawkat A., Ushra M.B., (2006), “Micropropagation of rough lemon (Citrus jambhiri Lush.): Effect of explant type and hormone concentration”, ActaBot.Croat, 65(2), pp 137-146 45 24 Savita cs (2010), “Effect of Explant Type and Different Plant Growth Regulators on Callus Induction and Plantlet Regeneration in Citrus jambhiri Lush”, Environ We Int J Sci Tech, 5, pp 97-106 25 Suneel S., Atam P., Ajinath T., (2009), “In vitro Propagation of Citrus Rootstocks”, Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca, Not Bot Hort Agrobot Cluj, 37 (1), pp 84-88 III Tài liệu mạng 26 http://www.caythuocquy.info.vn/old/modules.php?name=News&opcase= detailsnews&mid=975&mcid=245&pid=&menuid=) 27 http://botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=773( trung tâm liệu thực vật Việt Nam) 28 http://www.baobackan.org.vn/channel/1121/201512/quyt-bac-kan-trenduong-hoi-nhap-2419819/ 29 http://www.faostat.fao.org 30 http://www.tailieu.tv/tai-lieu/tinh-hinh-khoang-set-trong-nhom-dat-phusa-11208/ 31 Ngọc Lan (2015), Quýt Bắc Kạn - sản phẩm nông nghiệp “sạch” (https://www.backan.gov.vn/Pages/tin-tuc-su-kien-215/tin-trong-tinh289/xuc-tien-dau-tu-187/quyt-bac-kan-san-pham-nong-nghiep1888788d48aad96f.aspx) 46 PHỤ LỤC Kêt xử lí số liệu thực nghiệm Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi (số chồi/mẫu) quýt Bắc Kạn (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 16 23 1.4375 0.2625 CT1 52 112 2.153846 0.485671 CT2 57 139 2.438596 0.500627 CT3 79 273 3.455696 0.712756 CT4 59 157 2.661017 0.538282 CT5 50 119 2.38 0.566939 SS df MS F ANOVA Source of Variation P-value F crit 2.61EBetween Groups 93.67249 18.7345 Within Groups 171.3371 307 0.558101 Total 265.0096 312 33.56828 27 2.243399 Ảnh hưởng kinetin đến phát sinh chồi (số chồi/mẫu) quýt Bắc Kạn (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 15 22 1.466667 0.266667 CT1 42 81 1.928571 0.555749 CT2 45 99 2.2 0.345455 CT3 56 133 2.375 0.420455 CT4 67 196 2.925373 0.615559 CT5 47 106 2.255319 0.455134 SS df MS F ANOVA Source of Variation P-value F crit 2.21EBetween Groups 42.79512 8.559024 Within Groups 126.4071 266 0.475215 Total 169.2022 271 18.01086 15 2.24795 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến phát sinh chồi (số chồi/mẫu) quýt Bắc Kạn (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Đc 16 22 1.38 0.25 CT1 57 153 2.68 0.47 CT2 62 202 3.26 0.62 CT3 84 393 4.68 0.58 CT4 68 239 3.51 0.46 CT5 51 128 2.51 0.45 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 274.2511 54.85021 107.1264 4.41394E-67 2.241179 Within Groups 169.9886 332 0.512014 Total 444.2396 337 ANOVA Ảnh hưởng tổ hợp kinetin IBA đến phát sinh chồi (số chồi/mẫu) quýt Bắc Kạn (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Đc 17 25 1.47 0.26 CT1 56 150 2.68 0.48 CT2 59 146 2.47 0.43 CT3 62 182 2.94 0.65 CT4 71 275 3.87 0.31 CT5 44 100 2.27 0.48 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 131.74 26.34799 58.0657 2.98889E-42 2.243788 Within Groups 137.4898 303 0.453762 Total 269.2298 308 ANOVA Ảnh hưởng NAA đến phát sinh rễ (số rễ/chồi) quýt Bắc Kạn (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 38 0.00 0.00 CT1 48 106 2.21 0.38 CT2 81 234 2.89 0.58 CT3 51 89 1.75 0.19 CT4 30 45 1.50 0.40 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 226.9454 56.73636 162.003 2.46E-67 2.408792 Within Groups 85.10294 243 0.350218 Total 312.0484 247 ANOVA Ảnh hưởng NAA đến chiều dài rễ (cm) (sau tuần) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT1 35 52.7 1.505714 0.079378 CT2 78 163.5 2.096154 0.05544 CT3 30 41.5 1.383333 0.042816 CT4 15 10.4 0.693333 0.030667 ANOVA Source of Variation PSS df MS F Between Groups 31.76971442 10.5899 Within Groups 8.638703297 154 0.056095 Total 40.40841772 157 188.7836 value F crit 2.26E 2.66332 -51 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỉ lệ nảy mầm hạt quýt Bắc Kạn 7.1 Hạt bóc vỏ (tỉ lệ hạt không nhiễm nảy mầm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT1 293.4 97.8 3.88 CT2 291.6 97.2 7.84 CT3 282.5 94.16667 2.083333 CT4 262.5 87.5 6.25 CT5 240.3 80.1 7.03 Variation SS df F Between Groups 675.4307 168.8577 31.17372 1.26958E-05 Within Groups 54.16667 10 5.416667 Total 729.5973 14 ANOVA Source of MS P-value F crit 3.47805 7.2 Hạt bóc vỏ cắt 1/3 mầm (tỉ lệ hạt không nhiễm nảy mầm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT1 294.3 98.1 2.71 CT2 294.4 98.13333 10.45333 CT3 285 95 6.25 CT4 270 90 6.25 CT5 237.8 79.26667 15.61333 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value Between Groups 749.7467 187.4367 22.70492 5.28393E-05 Within Groups 82.55333 10 8.255333 Total 832.3 14 7.3 Hạt khơng bóc vỏ (tỉ lệ hạt không nhiễm nảy mầm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT1 207.3 69.1 3.79 CT2 221 73.66667 7.123333 CT3 236.57 78.85667 5.148633 CT4 200.9 66.96667 5.373333 CT5 189.9 63.3 7.84 Variation SS df MS F Between Groups 438.215 109.5538 18.71095 0.00012307 Within Groups 58.5506 10 5.85506 ANOVA Source of P-value F crit 3.47805 F crit 3.47805 ... biệt, nhân giống in vitro tạo giống bệnh nuôi cấy điều kiện vơ trùng, từ đáp ứng u cầu sản suất rau ngày Từ lí trên, chọn đề tài "Nghiên cứu nhân giống quýt Bắc Kạn kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực. ..ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHÍ HỮU VIỆT NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY QUÝT BẮC KẠN BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.01.21 LUẬN VĂN... vật" Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu môi trường nhân giống quýt Bắc Kạn phù hợp ống nghiệm Xác định giá thể phù hợp cho việc chuyển từ môi trường nuôi cấy vườn ươm Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu