Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân nhanh invitro giống lan dendrobium fimbriatum hook

PHN 1: M U 1.1 t Thiờn nhiờn ó u ỏi ban tng cho ngi v p ca tri v t c kt tinh hoa vi s a dng vụ cựng v chng loi v mu sc Mi loi hoa n cha mt sc quyn r riờng m ngi cú th gi gm tõm hn mỡnh Hoa c s dng trang trớ, tụ im lm p cho cuc sng ca ngi ng thi hoa l nhp cu trao gi tỡnh cm cho Vi sc sỏng to dng nh vụ tn ca ngi v s tin b khụng ngng ca khoa hc cụng ngh, ngi khụng ch dng li nhiu iu m thiờn nhiờn to dng, m t nhng iu cú sn ó to nhng th phự hp hn vi cuc sng ngy cng hin i V ú hoa l th khụng th thiu Ngy nay, hoa cú mt th trng tiờu th ht sc rng ln c bit trung nhng trung tõm cụng nghip phỏt trin cao nh: Anh, c, Phỏp, H Lan, Thy in, í, M, Nht Ngy Vit Nam, gi õy hoa ó khụng ch gn lin vi dp l tt, hi hố m hoa cũn thng xuyờn cú mt i sng hng ngy ca mi ngi dõn, c bit l cỏc thnh ph ln c nc Dng nh hoa ó tr thnh mt phn tt yu ca cuc sng Vi th trng hoa ht sc phong phỳ, hoa lan khụng ch ni bt vi v p i cỏc, sang trng m ỏp, gn gi m nú cũn cht cha mỡnh nhng giỏ tr tim n, luụn mi l, luụn hp dn v mi gi lũng say mờ, khỏm phỏ ca nhng trút nng lũng vi loi hoa vng gi ny Bt kp vi th yu th trng, ngy ó xut hin nhiu c s kinh doanh hoa Lan vi nhiu chng loi, giỏ c khỏc Do ú, vic nhõn ging bng k thut nuụi cy mụ invitro to hng lot cõy n nh v mt di truyn v phong phỳ v mu sc v chng loi Hoa Lan rt khú nhõn ging, thng cho h s nhõn thp iu kin m cú c s lng ln cõy ging, ng u ỏp ng nhu cu th trng tht nan gii Trong nhng nm gn õy, cụng ngh lai ging Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp kt hp gieo ht ng nghim cho t l ny mm cao, to nờn s a dng v mu sc, cu trỳc, kớch thc hoa sau mi th h Tuy nhiờn, nhõn ging bng phng phỏp gieo ht mang tớnh ngu nhiờn khụng thu c cõy cú tớnh trng mong mun v gn nh khụng th cú c cõy cho hoa p nh cõy m Do ú, vic nõng cao cht lng ging v nhõn ging, ch ng khõu ging ỏp dng cỏc bin phỏp k thut tiờn tin vo sn xut ang l quan trng cho sn xut hoa Lan nc ta Chớnh vỡ vy, chỳng tụi ó thc hin ti : Nghiờn cu xõy dng qui trỡnh nhõn nhanh invitro ging Lan Dendrobium 1.2 Mc tiờu, ý ngha v yờu cu ca ti 1.2.1 Mc tiờu ca ti - Tỡm qui trỡnh nhõn nhanh In vitro ca ging Lan Hong Tho -Tỡm thi gian v nng thớch hp ca cỏc cht kh trựng Hg v n ngng hoa Lan Hong Tho - Xỏc nh nng ca cỏc cht kớch thớch sinh trng n quỏ trỡnh nhõn nhanh ging hoa Lan Hong Tho: NAA, BAP, 1.2.2 Yờu cu ca ti - Theo dừi v xỏc nh s nh hng ca cỏc cht kớch thớch n quỏ trỡnh nhõn nhanh ging Lan Hong Tho 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti - í ngha khoa hc Xỏc nh c nh hng ca cỏc yu t mụi trng dinh dng, cht iu tit sinh trng i vi quỏ trỡnh phỏt sinh hỡnh thỏi ca cõy cú th nhõn nhanh v to ngun cõy ging cú cht lng n nh - í ngha thc tin Gúp phn vo vic nhõn nhanh, phỏt trin ging lan Hong Tho phc v sn xut, nõng cao hiu qu kinh t sn xut nụng nghip Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp PHN 2: TNG QUAN 2.1 Giỏ tr kinh t ca hoa Lan 2.1.1 Trờn th gii Hoa Lan l mt loi hoa rt a dng v kớch thc, hỡnh dỏng, mu sc, cu trỳc, s lng v hng thm Do vy m ngnh trng hoa núi chung v hoa Lan núi riờng ang ngy cng phỏt trin mnh m Ngay t nm 1957, James Shoemaker ó cho rng s nuụi trng lan s khụng ch l mt s thớch m cũn hng ti thnh mt ngnh cụng nghip Tht vy, t thi xa cho n nay, hoa Lan luụn c ngi ngng m v c xem nh l n hong ca cỏc loi hoa, loi hoa ca vng gi hay vua ca nhng loi c cõy cú hoa Do cú v p rc r, quý phỏi, ngo ngt hng thm, nhó cao sang v trc õy hoa Lan c xem l loi quý him, nờn thi gian trc thỳ chi hoa Lan thng ch dnh cho gii vua chỳa, thng lu Ngy nay, thỳ chi hoa Lan ó c nõng lờn thnh ngh thut, ngh trng Lan ó c phỏt trin thnh ngnh cụng nghip cú li nhun cao nh mt s nc Thỏi Lan, i Loan,Hn na, nh quỏ trỡnh su tm cỏc loi hoa Lan p, l mt v cỏc k thut lai to cỏc hoa Lan mi tuyt p, nờn s loi hoa Lan hin trờn th gii cú th ó lờn n 100 ngn loi Vỡ th thi gian gn õy, trờn th gii cng nh Vit Nam ta, thỳ chi hoa Lan ó tr thnh thụng dng v cú iu kin hn, khụng phõn bit a v, tui tỏc, hon cnh kinh t na, s ngi chi v a chung hoa Lan ngy cng tng nhanh, hay núi cỏch khỏc nhu cu s dng cỏc chng loi hoa Lan ó v ang tng Hoa Lan hin ang c trng v kinh doanh vi kiu dỏng ph bin trờn th trng: hoa ct cnh, cõy ó thnh thc chu treo hay bỏm trờn giỏ th v cõy Lan t 10-15cm [29] Khu vc ụng Nam ngy hoa king cng phỏt trin rt mnh; Singapore nm 1991 xut khu t 13 triu USD, ó t trờn 20 triu Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp USD; Thỏi Lan nm 1991 t 80 triu USD thỡ ó a doanh s xut khu lờn 200 triu USD/nm Theo ỏnh giỏ ca cỏc nh nghiờn cu v Lan, Thỏi Lan cú hn 1.000 ging hoa Lan, vi cỏc mu ch yu t mu trng, mu vng sỏng ca Oncidium, mu gch Hin Vit Nam phi nhp mt lng ln cõy ging v lan ct cnh t Thỏi Lan v phc v nhu cu nc Ti Malaysia, Chớnh ph ó quy hoch 300 bang Zohor v giao cho Hip hi hoa Lan t chc õy thnh khu Trung tõm sn xut Hoa king xut khu Ngnh trng hoa ca i Loan cng ang tng nhanh tc 15 20% Hin nay, i Loan ó cú din tớch trng hoa l 10.172ha, t doanh thu hng nm 293 triu USD [28] 2.1.2 Vit Nam Theo cỏc chuyờn gia v hoa ca trng i hc Nụng nghip 1, vi khong 755 loi hoa Lan hin cú, khớ hu thớch hp v nhiu nguyờn liu lm giỏ th tt cho cõy sinh trng, Vit Nam cú th tr thnh mt nc sn xut hoa Lan ln khu vc Hin nay, mi ch cú mt s cụng ty ln, ú cú nhng cụng ty nc ngoi trng hoa Lan ti Lt, TP H Chớ Minh, ng Nai vi din tớch khong 50-60 ha/mt doanh nghip Mt vi a phng khỏc hoa Lan ch mi trng quy mụ gia ỡnh, trờn din tớch t vi m n vi nghỡn m2, cỏ bit mi cú vi h trng trờn 1-2 Vin Di truyn Nụng nghip Vit Nam bc u cng ó cú nhng thnh cụng vic nuụi cy mụ to ging phong lan theo cụng ngh c chuyn giao t Thỏi Lan Mt s a phng khỏc nh Sa Pa, Phỳ Yờn bc u ó kho sỏt v nghiờn cu phng phỏp nhõn ging, hon thin quy trỡnh sn xut hoa Lan Theo tớnh toỏn ca B Nụng nghip v Phỏt trin Nụng thụn, nu trng hoa Lan ct cnh l loi Dendrobium v Mokara, mi t trng cú th cho thu nhp 500 triu - t ng/nm, cao hn nhiu ln so vi trng lỳa v mt s hoa mu khỏc Hin nay, mi nm Vit Nam phi chi hng t ng nhp hoa Lan t cỏc nc lỏng ging cho nhu cu ni a Ch tớnh riờng ti Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp thnh ph H Chớ Minh, nm 2003 doanh s kinh doanh hoa Lan v cõy cnh mi t 200 - 300 t ng, nhng ch quý I nm 2006, doanh s ny ó t 400 t ng; cỏc c s kinh doanh hoa Lan, cõy cnh tng nhanh t 264 c s nm 2003 lờn trờn 1.000 c s Riờng hoa Lan mi nm thnh ph ny cng ó tiờu th trờn hng triu cõy [26] 2.1.2 Tm quan trng i vi vic trỡ v bo v ngun ging Khớ hu Vit Nam núng m rt phự hp vi s sinh trng v phỏt trin ca cỏc loi lan Theo giỏo s Phm Hong H, hoa Lan Vit Nam rt a dng v phong phỳ vi s lng lờn ti 755 loi [19] Theo ngun ti liu nghiờn cu mi nht v hoa Lan Vit Nam (2003), ó bit c 897 loi thuc 152 chi ca h Lan [6] Hoa Lan l mt loi cõy cnh rt c a chung trờn th trng Tuy nhiờn, cỏc mc ớch kinh t, ngi ó khụng quan tõm ti s bo tn thiờn nhiờn núi chung cng nh bo v cỏc ngun ging quý núi riờng Lan c khai thỏc t rng v chuyn ti cỏc thnh ph ln nc v nc ngoi c bit nhng ging c hu v quý him Ngun ti nguyờn ny ang ngy cng cn kit [29] Hin nay, nc ta nuụi cy mụ t bo ó c ng dng rng rói vic nhõn nhanh nhiu ging cõy cnh, cõy lõm nghip, cõy lng thc thc phm v ó c nhng thnh cụng nht nh Khụng ch vy, nuụi cy mụ t bo cng c ỏp dng vic bo tn ngun gen ca cỏc ging cõy quý Tuy nhiờn, kt qu nghiờn cu v ng dng so vi yờu cu thc tin cũn mt khong cỏch khỏ ln v ũi hi s n lc v quyt tõm ca cỏc nh khoa hc cng nh cỏc chuyờn gia kinh t lnh vc ny 2.2 Gii thiu v ging lan Lan Hong Tho Dendrobium 2.2.1 Gii thiu chung v h Lan V phõn loi hc, h Lan Orchidaceae l h ln nht gii thc vt mt lỏ mm, vi khong 800 chi v 25000-35000 loi (Arrditti, 1979; Garay, Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp 1960) c tớnh khỏc thng v kh nng th phn v lai xa t nhiờn ca h thc vt ny ó khin chỳng tr nờn phong phỳ v loi v phõn b rng rói Bờn cnh ú, ngi ta tin hnh lai to v t c nhiu thnh cụng Hin cú hn 9000 ging Lan lai mi ó c ng ký bn quyn ti Royal Horticulture Society, Anh [19] Cõy Lan thng sng nhng ni hoang dó, ti cỏc a hỡnh rt khỏc vi cỏc iu kin mụi trng a dng Chớnh cu trỳc c bit ca Lan ó to cho chỳng kh nng thớch nghi phong phỳ cỏc mụi trng hon ton trỏi ngc 2.2.2 Gii thiu v ging lan Hong Tho Dendrobium 2.2.2.1 Tờn v ngun gc Gii Thc vt Ngnh Magnoliophyta Lp Liliopsida B Asparagales H Orchidendrodeae Chi Dendrobium sp Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hỡnh nh 1: Lan Dendrobium Chi ny c Olofswartz t tờn vo nm 1799 Ch Dendrobium cú ngun gc ca ch Hy Lp Dendro cú ngha l cõy g, cõy ln ; bios l s sng, vỡ tt c cỏc loi ca Dendrobium u l ph sinh sng bỏm trờn cõy g Do ú Dendrobium c hiu l cõy lan sng trờn cõy (epiphytic) hay phong lan Dendrobium rt phong phỳ v chng loi, hin ln th nhỡ ca h Lan vi khong hn 1.600 loi phõn b trờn cỏc vựng thuc Chõu nhit i, trung nhiu nht ụng Nam v c Chõu Vit Nam, lan Dendrobium thng mc rng hoang, ni m t hoc nỳi ỏ vụi Bc v Trung Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp iu kin sinh thỏi ca Dendrobium cng rt a dng Cú nhiu loi ch mc v hoa vựng lnh, cú loi vựng núng, cú loi trung gian, v cng cú loi thớch nghi vi bt c iu kin khớ hu no 2.2.2.2 c im Dendrobium l loi a thõn vi nhiu gi hnh, cỏc gi hnh thng mang mt thõn vi nhiu lỏ mc xen k, trờn thõn cú rt nhiu mt ng Cn c vo cỏch sng cú th chia lm dng chớnh: + Dng thũng hay Nobile õy l dng thõn mm thng vựng hi lnh nh Lt + Dng ng hay Phalaenopsis õy l dng thõn cng thng sng nhng vựng cú khớ hu núng, chu m v rt siờng hoa nờn TP H Chớ Minh trng rt nhiu loi ny Lan Dendrobium cng ging nh cỏc loi cõy khỏc gm cỏc b phn chớnh nh: r, thõn, lỏ, hoa, qu - R: Cỏc i din chi Dendrobium u cú r khớ sinh R thng mnh, hỡnh tr, mu xanh v chuyn thnh mu nõu gi, chỳng thng ụm ly giỏ th hoc buụng thừng xung dy ca r t 0,1 - 0,3cm R thng mc t gc ca thõn, mt vi loi mc mt s mu gia thõn.[6] R cú mt trc chớnh bao quanh bi mụ khụng cht (c gi l mc) Mc c hỡnh thnh s phõn ct cỏc t bo ca cn bỡ cho t bo m vỏch c nụng to nh nhng si tm mc t cng, cỏc t bo ny khụ ch cha khụng khớ, nh vy cú th tớch tr nc ma v sng ng, lm r hỳt m nhanh v gi c m thi gian di - Thõn: Dendrobium l loi trỳc lan, thõn l thõn gi hnh cú chia t Trong quỏ trỡnh sinh trng ca Dendrobium, thõn trờn bin i rt nhiu v hỡnh dỏng v kớch thc Thõn cú chiu di thay i t - 3cm n 120cm hoc ụi hn Kớch thc ph bin l 20 - 50cm Lỏt ct ngang thõn cú th l hỡnh trũn hoc hỡnh bu dc Thõn cú th mnh, ụi dp bờn hoc l dy Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp mp lờn Thõn ca cỏc i din chi Dendrobium u phõn t, hỡnh tr, hỡnh chu, hỡnh trng, [6] - Lỏ: Lỏ mc thnh dóy so le nhau, cú th mc i xng qua gõn chớnh cng cú th khụng, khụng cú cung m ch cú b ụm thõn (ớt khụng cú b), u hi nhn Lỏ phõn b sut dc thõn nhng cú loi trung - chic nh thõn, cng cú phn nh ch cú hoa m khụng cú lỏ Lỏ thng cng, b mt thng nhn, ụi b mt b v lỏ cú ph lụng ngn mu en Phin lỏ thng cú hỡnh mỏc, bu dc, ụi cú hỡnh li kim di, hỡnh thuụn, cú mu xanh búng m nh lỏ nhn hoc tự, rt nhiu trng hp nh lỏ x thnh thu nhn, tự hoc trũn lch Chiu di lỏ thay i t - 19cm v chiu rng lỏ t 0,3 - 3,5cm, cú 9-11 gõn chớnh S lng v hỡnh dng lỏ khỏc tu tng ging lan khỏc nhau.[6] - Hoa: Hoa ca cõy lan Dendrobium l hoa mu ba, kiu hoa c trng ca lp mt lỏ mm, gm ba lỏ i, ba cỏnh hoa (mt cỏnh bin thỏi thnh mụi) v mt tr mang hoa ng kớnh cú th thay i t 0,5cm n - 7cm Hoa cú th mc t thõn thnh tng chựm hay tng hoa cụ c, hoa n vo thỏng - 4, hoa cú mu trng, vng n tớm Hu nh anh em dũng h ca Dendrobium l nhng loi hoa rt lõu tn, trung bỡnh khong thỏng Cỏ bit cú loi trờn thỏng hoc cú th hoa n sut nm bi cỏc chi hoa mi luụn luụn th cỏc chi hoa c nh cỏc ging Dendrobium Caesar Alba, Dendrobium Caesar La tin Tuy nhiờn cng cú loi sm n ti tn nh lan Thch hc ( Dendrobium crulllenatum)[29] Dendrobium cng l ging rt phong phỳ v mu sc v hỡnh dng hoa Chớnh vỡ th ngi Vit Nam dựng nhng hỡnh tng khỏc tng trng cho mt s loi Dendrobium no ú: Mt chim b cõu trng (Lan Bch Cõu), mt loi hc l loi (Lan Gi Hc), hay mt n bm vng bay trng giú (Lan Kim ip) Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp (lan Thy tiờn) (lan Nht im hong) (lan Vy rng) (lan M dung) (lan Xon) (lan M g) (lan Bch cõu) (lan Gi hc) (lan Si) (lan Vng xon) (lan Nht im) (lan Kim ip) Hỡnh nh 2: Mt s dng hoa p ca lan Dendrobium - Qu: Qu ca cõy lan Dendrobium l qu nang hỡnh thoi, khụ t m theo cỏc rónh dc, di t - 7cm cú rt nhiu ht nm xen gia nhng si lụng hỳt m Hà Thị Hồng 8K 10 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Khi nng BAP tng dn t (0,5- 1,5) mg/l thỡ h s nhõn tng t 0,97 ln lờn 2,1 ln Tip tc tng nng BAP lờn 2,0 mg/l thỡ h s nhõn li gim xung cũn 1,23 ln T kt qu trờn chỳng tụi nhn thy, h s nhõn cao t 2,1 ln nng 1,5 mg/l BAP Mụi trng thớch hp cho quỏ trỡnh nhõn nhanh chi ca Lan Hong Tho l: MS + 1,5 mg/l BAP + 30 g/l ng + g/l Agar Sau tun nuụi cy Sau tun nuụi cy Hỡnh nh 6: nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn chi Thớ nghim 5: nh hng ca NAA n kh nng hỡnh thnh r ca chi Lan Hong Tho Sau nhõn chi c s lng ln, giai on k tip l to cõy hon chnh chun b a ngoi m Cõy m khụng ch tiờu chun v to lỏ, m cỏc tiờu chun v r nh: S lng r, chiu di r, mp ca ru l cỏc yu t quyt nh Khi nuụi cy iu kin bỡnh thng hoc trờn mụi trng cú b sung nng BAP thp cõy Lan Hong Tho r v thng ch cú hoc r Nhng a m ngoi t nhiờn thng b cht b r mnh, yu, khú thớch nghi vi mụi trng mi Mụi trng to r thng l cỏc mụi trng cú b sung cỏc hp cht ca auxin tỡm hiu ny chỳng tụi tin hnh cỏc thớ nghim Hà Thị Hồng 8K 36 Báo cáo thực tập tốt nghiệp nghiờn cu nh hng ca NAA n kh nng hỡnh thnh r ca chi lan Hong Tho Kt qu thớ nghim c trỡnh by bng sau Bng 5: nh hng ca NAA n kh nng hỡnh thnh r ca chi Cụng thc Nng NAA S lng D1 D2 D3 D4 D5 D6 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 50 50 50 50 50 50 Sau tun nuụi cy S chi phỏt sinh r S r thu c T l to r (%) 19 35 44 43 45 49 21 45 57 50 81 91 38 71 88 87 90 98 Sau tun nuụi cy S S r T l chi thu to r phỏt c (%) sinh r 25 31 49 43 51 86 46 61 92 45 75 91 49 93 99 49 97 100 th 5: Biu din s tỏc ng ca NAA n t l r ca ging Lan Hong Tho Qua bng s liu thu c cho thy: Trờn mụi trng khng b sung NAA t l chi r t thp hn so vi cỏc mụi trng cú b sung NAA ch cú 38% sau tun v 49% sau tun nuụi cy Hà Thị Hồng 8K 37 Báo cáo thực tập tốt nghiệp mụi trng cú b sung NAA t l chi r tng dn nng NAA tng t (0,1- 0,5) mg/l Tip tc tng nng NAA lờn thỡ t l chụi r tip tc tng T l chi to r cao nht t 98% sau tun nuụi cy v 100% sau tun nuụi cy D6 vi nng NAA l 0,5mg/l Nh vy mụi trng thớch hp cho vic to r giai on to cõy hon chnh a m l: Vacin + 0,5mg/l NAA + 30 g/l ng + g/l Agar Sau tun nuụi cy Sau tun nuụi cy Hỡnh nh 7: nh hng ca NAA n quỏ trỡnh r ca chi Hà Thị Hồng 8K 38 Báo cáo thực tập tốt nghiệp PHN 5: KT LUN V NGH 5.1 Kt lun T cỏc kt qu trờn chỳng tụi rỳt kt lun sau: - Nng v thi gian kh trựng tt nht cho ngng hoa non ging Lan Hong Tho l HgCl2 0,1% thi gian 10 phỳt, cho t l mu sng cao nht t 70% - Nng BAP bng 1,0 mg/l cho kh nng to chi t mt ng cao nht t 88% sau tun nuụi cy v 89% sau tun nuụi cy Mụi trng thớch hp cho kh nng to chi t mt ng l: MS+ 1,0 mg/l + 30g/l ng+ 6g/l Agar - Kh nng to PLB tt nht l nng 1,0 mg/l NAA kt hp vi mg/l BAP cho h s nhõn sau tun l 4,12 ln v sau tun l 4,88 ln vi mụi trng u vit l: MS + 1,0 mg/l BAP + 1,0 mg/l NAA+ 30 g/l ng + g/l Agar - Nng BAP b sung vo mụi trng thớch hp nht cho quỏ trỡnh nhõn nhanh chi ca Lan Hong Tho l 1,5 mg/l Mụi trng thớch hp nhõn nhanh l: MS + 1,5mg/l BAP + 30 g/l ng + g/l Agar - Mụi trng thớch hp cho vic r - to cõy hon chnh a m l: Vacin + 0,5 g/l NAA + 30 g/l ng + g/l Agar 5.2 ngh Do thi gian nghiờn cu cú hn nờn chỳng tụi cha hon thin c qui trỡnh to cõy hon chnh a cõy m Trong thi gian ti õy, chỳng tụi s tip tc hon thin qui trỡnh nhõn nhanh ging Lan mi cú cht lng hoa tt Hà Thị Hồng 8K 39 Báo cáo thực tập tốt nghiệp TI LIU THAM KHO Ti liu ting vit Lờ Trn Bỡnh, H Hu Nh, Lờ Th Mui (1997), Cụng ngh sinh hc thc vt ci tin ca cõy trng, NXB Nụng nghip, H Ni, trang 62-80 Phan Thỳc Huõn (1989), Hoa lan cõy cnh v phỏt trin sn xut kinh doanh, NXB TP H Chớ Minh Phan Thỳc Huõn (2005), Hoa lan nuụi trng v kinh doanh, NXB Phng ụng Trn Vn Huõn, Vn Tớch Lm, K thut nuụi trng cõy lan, NXB M thut Nguyn Mnh Hựng, Nguyn Mnh Chinh (2008), Trng, chm súc v phũng tr sõu bnh cõy hoa lan, NXB Nụng nghip, TP H Chớ Minh Dng c Huyn (1992), Nghiờn cu phõn loi chi Hong tho Dendrobium Sw (h lan- Orchidaceae) Vit Nam, Lun ỏn phú tin s khoa hc sinh hc, NXB H Ni Phm Th Liờn (2001), Nghiờn cu ỏnh giỏ v phỏt trin mt s ging a lan Bc Vit Nam, lun ỏn tin s nụng nghip Nguyn Xuõn Linh (1998) , Hoa v k thut trng hoa, NXB Nụng nghip, H Ni Trn Vn Móo(biờn dch) (2005), Hi ỏp v k thut nuụi trng hoa v cõy cnh(tp 1), NXB Nụng nghip, H Ni 10 Chu Vn Mn (2001), ng dng tin hc sinh hc, NXB i hc Quc Gia H Ni, trang 118-126 11 Nguyn Cụng Nghip (1986), Trng hoa lan, NXB TP H Chớ Minh 12 Nhiu tỏc gi (2008), Hoa lan ton tp, NXB Phng ụng 13 Mai Th Tõm, V Th Hin, Nguyn Quang Thch, Nguyn Trng Sn (1999), Nghiờn cu v nhõn nhanh protocorm lan Dendrobium E.R Kt Hà Thị Hồng 8K 40 Báo cáo thực tập tốt nghiệp qu nghiờn cu khoa hc n cỏn b ging dy i hc nụng nghip I, 19971999 14 Hong Minh Tn, Nguyn Quang Thch (1983), Cht iu hũa sinh trng vi cõy trng, NXB Nụng nghip, H Ni 15 Nguyn Vn Uyn v cng s (1993), Nuụi cy mụ thc vt phc v cho cụng tỏc nhõn ging cõy trng, NXB Nụng nghip 16 Nguyn Vn Uyn, Nng Vnh v cng s (1999), Cụng ngh nhõn ging cỏc cõy trng quan trng, Bỏo cỏo hi ngh Khoa hc ton quc v cụng ngh sinh hc, trang 96 17 o Thanh Võn, ng Th T Nga (2008), Giỏo trỡnh hoa lan, NXB Nụng nghip, H Ni 18 V Vn V (1999), Sinh lý thc vt, NXB Giỏo dc H Ni 19 Phm Hong H,( 2000), cõy c Vit Nam , NXB Tr 20 Nng Vnh, (2003), Cụng ngh sinh hc cõy trng, NXB Nụng Nghip Ti liu ting Anh 19 Carlson R.F (1964), Dwarf fruit trees, Mich Arg Ext Serv Bull, pp.432 20 Murashige, T., and R Skoog (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture , Phys Plant 15: 473-497 21 Narayanaswamy, T., (1980), Regenneration of plants from tissue culture In: applied and Fundamental Aspects of plants cell, tissue and Organ culture Eds J Reinert and Y.P.S Bajaj Springer- Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 179-245 22 Nickell, L.G.(1973), Tess - tube Approaches to by pass Sexx, Hawaiian Planters Record.58, pp 239 - 314 23 Staritsky, G (1970), Tissue culture of the oil palm ( elaeis guineensis Jacq as a tool for its vegetative propagation), Euphytica, pp.228292 Hà Thị Hồng 8K 41 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Ti liu Internet 24 http://www.hoalanvietnam.org 25 http://www.hoinongdan.org.vn 26 http://www.longdinh.com 27 http://www.hcmbiotech.com.vn 28 http://dost.dadang.gov.vn 29 http://www.tuvannongnghiep.com.vn Hà Thị Hồng 8K 42 Báo cáo thực tập tốt nghiệp PH LC Cỏc thnh phn c bn ca mụi trng MS (Murashige v Skoog,1962) Thnh phn khoỏng a lng NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4 KH2PO4 Thnh phn khoỏng vi lng MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Na2EDTA FeSO4.7H2O Vitamin Thiamine HCl Nicotinic Axit Pyridoxine HCl Glyxine Hà Thị Hồng 8K Nng (mg/l) 1650 1900 440 370 170 Nng (mg/l) 23,3 8,6 6,2 0,83 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8 Nng (mg/l) 0,1 0,5 0,5 2,0 43 Báo cáo thực tập tốt nghiệp LI CM N hon thnh khoỏ lun ny trc ht tụi xin gi li cm n chõn thnh v sõu sc ti TS H Th Thuý phú giỏm c, Phũng Thớ nghim Trng im Cụng ngh T bo Thc vt Vin Di Truyn Nụng Nghip Ths Lờ Th Liờn- ging viờn khoa CNSH trng Cao ng Nụng Lõm Bc Giang, ngi ó to mi iu kin thun li v tn tỡnh hng dn tụi quỏ trỡnh thc tt nghip Tụi xin cm n KS Dng Minh Nga ngi ó gi m cho tụi nhng phng hng nghiờn cu v ó tn tỡnh giỳp tụi sut quỏ trỡnh thc Tụi xin cm n ton th cỏc anh ch phũng Thớ nghim Trng im Vin Di Truyn Nụng Nghip H Ni ó to mi iu kin thun li giỳp tụi quỏ trỡnh thc Tụi xin by t lũng bit n sõu sc n th cỏn b giỏo viờn Khoa CNSH Trng cao ng Nụng Lõm ó hng dn ging dy v ch bo tụi tn tỡnh quỏ trỡnh hc ti trng Tụi xin chõn thnh cm n gia ỡnh, bn bố nhng ngi luụn bờn tụi ó ng viờn khuyn khớch tụi thi gian hc hon thnh khoỏ lun ny H Ni, ngy 30 thỏng 05 nm 2010 Sinh viờn thc hin H Th Hng CH VIT TT V MT S THUT NG NCM : Nuụi cy mụ BAP : Benzyl Amino Purin NAA : Naphtyl Acetid Axid MS : Mura Shige & Skoog, 1962 CT : Cụng thc TN : Thớ nghim CTTD : Ch tiờu theo dừi PLB : Protocorm like body l nhng th cú dng tng t Protocorm nhng phỏt trin t nhng phn mụ khỏc ca Lan (vớ d nh lỏt ct mụ lỏ), khụng phi t ht Protocorm: Trong quỏ trỡnh ny mm, ht Lan cha phụi to cu trỳc cú dng c hoc tin chi c gi l Protocorm, m t ú s phỏt trin thnh mt cõy hon thin Trong mụi trng nuụi cy invitro, phn sinh dng ca nhiu loi Lan to Protocorm mm, trũn, m t ú chỳng cú th c nhõn lờn hoc bt chi thnh mt cõy (Glossary 0r biotechnology and genetic engineering-FAO CORPORATE DOCUMENT REPOSITORY) MC LC PHN 1: M U 1.1 t 1.2 Mc tiờu, ý ngha v yờu cu ca ti 1.2.1 Mc tiờu ca ti 1.2.2 Yờu cu ca ti 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti PHN 2: TNG QUAN 2.1 Giỏ tr kinh t ca hoa Lan .3 2.1.1 Trờn th gii 2.1.2 Vit Nam .4 2.1.2 Tm quan trng i vi vic trỡ v bo v ngun ging 2.2 Gii thiu v ging lan Lan Hong Tho Dendrobium 2.2.1 Gii thiu chung v h Lan 2.2.2 Gii thiu v ging lan Hong Tho Dendrobium 2.2.2.1 Tờn v ngun gc .6 2.2.2.2 c im .8 2.3 Cỏc phng phỏp nhõn ging hoa Lan 11 2.3.1 Phng phỏp nhõn ging hu tớnh 11 2.3.2 Phng phỏp nhõn ging vụ tớnh 12 2.3.3 Phng phỏp vi nhõn ging (micropropagation) 13 2.3.4 Nhõn ging Lan bng phng phỏp NCM t bo .14 PHN : VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 24 3.1 Vt liu 24 3.2 Ni dung v phng phỏp nghiờn cu 24 3.2.1 Giai on to vt liu ban u .24 3.2.2 Giai on nhõn nhanh 25 3.3 iu kin nuụi cy 26 3.4 Cỏc ch tiờu v phng phỏp theo dừi nuụi cy mụ t bo 26 3.3.6 Phng phỏp x lý s liu: 27 PHN 4: 28 KT QU V THO LUN .28 4.1 To ngun vt liu u 28 5.1 Kt lun 39 5.2 ngh 39 TI LIU THAM KHO .40 Ti liu ting vit 40 Ti liu ting Anh 41 Ti liu Internet .42 LI CM N i DANH MC HèNH NH Hỡnh nh 1: Lan Dendrobium Hỡnh nh 2: Mt s dng hoa p ca lan Dendrobium 10 Hỡnh nh 3: Qu lan Dendrobium ngoi t nhiờn 11 Hỡnh nh : Ngng hoa non ging Lan Hong Tho 28 Hỡnh nh 5: nh hng ca BAP v NAA n quỏ trỡnh to PLB ca ging hoa Lan Hong Tho .34 Hỡnh nh 6: nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn chi 36 Hỡnh nh 7: nh hng ca NAA n quỏ trỡnh r ca chi 38 PHN 5: KT LUN V NGH 39 DANH MC BNG BIU Bng 1: nh hng ca nng v thi gian kh trựng i vi ngng Lan Hong Tho 29 Bng 2: nh hng ca nng BAP n kh nng to chi t mt ng ca ging Lan Hong Tho 31 Bng 3: nh hng ca nng NAA v nng BAP = 1mg/l n kh nng to PLB ca Lan Hong Tho .33 Bng 4: nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn nhanh chi ca ging Lan Hong Tho 34 Bng 5: nh hng ca NAA n kh nng hỡnh thnh r ca chi 37 DANH MC TH th 1: Biu din tỏc ng ca hoỏ cht n t l mu sng, mu cht v mu nhim .29 th 2:Biu din s tỏc ng ca BAP n kh nng phỏt sinh chi t mt ng ca ging Lan Hong Tho 31 th 3: Biu din s tỏc ng ca NAA v BAP= mg/l n kh nng to BLP ca ging Lan Dendrobium 33 th 4: Biu din s tỏc ng ca BAP n h s nhõn chi 35 th 5: Biu din s tỏc ng ca NAA n t l r ca ging Lan Hong Tho .37 [...]... nay thỡ hu ht cỏc loi hoaLan ó c nhõn nhanh bng cỏch s dng phng phỏp NCM t bo ó cú rt nhiu nhng cuc hi tho v hoa Lan c t chc trờn th gii c bit l cỏc nc thuc khu vc Chõu Nhng nghiờn cu chi tit cho tng loi, tng ging tng khu vc ó v ang c cỏc nh khoa hc nghiờn cu a ra nhng quy trỡnh nhng ci tin ngy mt hon chnh hn + Cỏc phng phỏp nhõn ging in vitro hoa Lan a Nuụi cy in vitro hoa Lan bng cỏch s dng chi nh... tập tốt nghiệp PHN 3 : VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 3.1 Vt liu i tng nghiờn cu l ngng hoa non ca ging Lan Hong Tho Hong Tho Mụi Tớm : Dendrobium woon leng 3.2 Ni dung v phng phỏp nghiờn cu xõy dng qui trỡnh nhõn nhanh ging Lan Hong Tho, chỳng tụi ó tin hnh cỏc thớ nghim invitro Cỏc thớ nghim ny c thc hin ti Phũng Thớ nghim Trng im Cụng ngh T bo Thc Vt, Vin Di Truyn Nụng Nghip Ni dung nghiờn cu bao gm:... trong vic nhõn nhanh nhng ging cõy ny 2.3.4 Nhõn ging Lan bng phng phỏp NCM t bo + C s khoa hc nuụi cy mụ t bo a Tớnh ton nng ca t bo Nm 1902 ln u tiờn nh thc vt hc ngi c l Haberlandt ó xng ra phng phỏp nuụi cy mụ t bo thc vt chng minh cho tớnh ton nng ca t bo Theo nhn nh ca ụng mi t bo bt k t mt c th sinh vt a bo u cú kh nng tim tng phỏt trin thnh mt c th hon chnh Ngay t nm 1898, Haberlandt ó bt...Hỡnh nh 3: Qu lan Dendrobium ngoi t nhiờn - Ht: Trong mi qu lan thng cha mt lng ht rt ln (vi chc nghỡn n vi trm nghỡn ht trong mt qu), hu nh khụng trng lng, rt nh Mng ht dng mt vừng trong sut, cha y khụng khớ, rt d phỏt tỏn trong khụng gian nh giú.[6] 2.3 Cỏc phng phỏp nhõn ging hoa Lan 2.3.1 Phng phỏp nhõn ging hu tớnh Nhõn ging hu tớnh l bin phỏp... thớch ny mm hỡnh thnh cõy con Song thc t, do cu trỳc ca ht Lan ch l khi t bo cha phõn hoỏ vỡ vy m kh nng ny mm ca ht trong iu kin t nhiờn l cc thp Ch trong nhng iu kin khỏ ti u nh: m t, cú nm cng sinh thỡ cng ch cú t l khong mt phn triu ht Lan cú th ny mm c Trong iu kin hin nay, nh cú k thut nuụi cy invitro m ngi ta cú th iu khin s ny mm ca ht Lan trong iu kin nhõn to khỏ d dng Th phn cú 2 cỏch: + Nh... nuụi cy Hỡnh nh 5: nh hng ca BAP v NAA n quỏ trỡnh to PLB ca ging hoa Lan Hong Tho Thớ nghim 4: nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn nhanh chi ca Lan Hong Tho H s nhõn ph thuc vo kh nng phõn bo ca t bo nuụi cy trong iu kin bỡnh thng, tc phõn bo din ra chm song khi cú s tỏc ng ca cỏc phyto hooc mụn thỡ quỏ trỡnh phõn chia t bo din ra nhanh hn BAP b sung vo mụi trng vi nng thớch hp s kớch thớch s chi phỏt... BAP b sung vo mụi trng vi nng thớch hp s kớch thớch s chi phỏt sinh vỡ kớch thớch s phõn chia t bo [20] Kt qu nghiờn cu nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn nhanh ca ging Lan Hong Tho c th hin bng4: Bng 4: nh hng ca BAP n quỏ trỡnh nhõn nhanh chi ca ging Lan Hong Tho Hà Thị Hồng 8K 34 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Cụng thc Nng S lng (mg/l) mu Sau 2 tun nuụi cy Sau 4 tun nuụi cy S chi H s S chi H s thu c... nhng chi nỏch xa vi nh ngn (Loh, Goh, and Rao,1978) iu ny nhn thy rừ trờn i tng Dendrobium (Kim et al, 1970; Singh, 1976) Chớnh vỡ vy m trong quỏ trỡnh ly mu v nuụi cy ngi ta ch nờn chn cỏc chi cú kớch thc t 3- 4 cm l tt nht Hà Thị Hồng 8K 20 Báo cáo thực tập tốt nghiệp i vi mt s ging Lan c bit l nhng loi thuc nhúm Lan a thõn thỡ vic s dng chi nỏch nuụi cy va cú hiu qu cao va cú th bo ton c cõy... hoa Lan l tng i nhy cm vi s cú mt ca cỏc cht iu tit sinh trng b sung vo trong mụi trng c bit vi mu ó qua mt s ln cy chuyn Vic b sung cỏc cht ph gia khỏc (dch chit ca mt s loi nh: khoai tõy, chui, u , c rt) l ht sc cú ý ngha i vi quỏ trỡnh nhõn ging in vitro hoa Lan Hà Thị Hồng 8K 23 Báo cáo thực tập tốt nghiệp PHN 3 : VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 3.1 Vt liu i tng nghiờn cu l ngng hoa non ca ging Lan. .. dng [19] Hà Thị Hồng 8K 18 Báo cáo thực tập tốt nghiệp + Cỏc nghiờn cu v NCM hoa Lan Hoa Lan l mt trong nhng loi cõy trng thnh cụng nht trong nhõn ging vụ tớnh bng phng phỏp NCM mc thng mi NCM ó c thớ nghim t th k 17 nhng ch thnh cụng sau nhng su tm v mụi trng nuụi cy ca White v Gautheret ó ỏp dng phng phỏp NCM hoa Lan nm 1956 Morel (1960) ó to c cõy Cymbidium sch virus t cõy b bnh bng nuụi cy chi ... (lan M dung) (lan Xon) (lan M g) (lan Bch cõu) (lan Gi hc) (lan Si) (lan Vng xon) (lan Nht im) (lan Kim ip) Hỡnh nh 2: Mt s dng hoa p ca lan Dendrobium - Qu: Qu ca cõy lan Dendrobium l qu nang hỡnh... (Lan Bch Cõu), mt loi hc l loi (Lan Gi Hc), hay mt n bm vng bay trng giú (Lan Kim ip) Hà Thị Hồng 8K Báo cáo thực tập tốt nghiệp (lan Thy tiờn) (lan Nht im hong) (lan Vy rng) (lan M dung) (lan. .. xut hoa Lan nc ta Chớnh vỡ vy, chỳng tụi ó thc hin ti : Nghiờn cu xõy dng qui trỡnh nhõn nhanh invitro ging Lan Dendrobium 1.2 Mc tiờu, ý ngha v yờu cu ca ti 1.2.1 Mc tiờu ca ti - Tỡm qui trỡnh