(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến khả năng tạo mô sẹo cây gừng núi đá (zingiber sp ) trong điều kiện in vitro

1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TRIU MINH HU Tờn ti: Nghiên cứu ảnh hởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá (Zingiber sp.) điều kiện in vitro KhóA LUậN TốT NGHIệP ĐạI HọC H o tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ sinh học Lớp : K42 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 - 2014 Giảng viên hướng dẫn: ThS Lâm Mai Tùng Trung tâm ứng dụng tiến Khoa học Công nghệ tỉnh Lạng Sơn ThS Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH-CNTP, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2014 n LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm thời gian thực tập tốt nghiệp em thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá (Zingiber sp.) điều kiện in vitro” Qua tháng thực tập phòng Kỹ thuật Trung tâm Ứng dụng Tiến Khoa học Công nghệ tỉnh Lạng Sơn em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc trung tâm thành viên phòng Kỹ thuật tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Ths Lâm Mai Tùng, Ths Lương Thị Thu Hường KS Vi Thị Minh Tâm tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vất chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có giới hạn nên đề tài khơng thể tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày 27 tháng 05 năm 2014 Sinh viên thực Triệu Minh Huệ n DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng Thành phần hóa học tinh dầu gừng Bảng 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu gừng Núi đá điều kiện in vitro 26 Bảng 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng việc kết hợp khử trùng HgCl2 0,1% Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu cấy gừng Núi đá điều kiện in vitro 28 Bảng 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 -D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro 30 Bảng 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA IAA đến khả hình thành mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 31 Bảng 4.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D kết hợp với BA đến khả hình thành mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 33 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đường saccharose đến khả hình thành mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 35 n DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình Một số hình ảnh mơ tả đặc điểm hình thái gừng Núi đá Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu cấy gừng Núi đá điều kiện in vitro .27 Hình 4.1.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng việc kết hợp khử trùng HgCl2 0,1% với Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu gừng Núi đá điều kiện in vitro 29 Hình 4.2.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D đến khả hình thành mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro .30 Hình 4.2.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D kết hợp với BA đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 34 Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng đường saccharose đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro .36 n DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT AND : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CT : Công thức CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic acid TN : Thí nghiệm 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid n MỤC LỤC Trang Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan gừng núi đá 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm phân bố 2.1.3 Đặc tính sinh học 2.1.4 Thành phần hóa học .6 2.1.5 Tác dụng 2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào 2.2.1 Tính tồn di truyền tế bào 2.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 2.2.3 Nuôi cấy mô sẹo 10 2.2.4 Điều kiện môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.3 Tình hình nghiên cứu gừng nước giới .17 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 17 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 18 Phần 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 19 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 19 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .19 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 19 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 19 3.3 Điều kiện nuôi cấy 19 3.4 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 19 3.5 Nội dung nghiên cứu 19 n 3.6 Phương pháp nghiên cứu 20 3.6.1.Chuẩn bị vật liệu nghiên cứu 20 3.6.2 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy 20 3.6.3 Nuôi cấy mô sẹo 20 3.6.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 20 3.7 Chỉ tiêu theo dõi 24 3.8 Xử lý số liệu 25 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng thích hợp tạo vật liệu phục vụ nuôi cấy gừng Núi đá điều kiện in vitro .26 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0.1% đến hiệu khử trùng mẫu gừng Núi đá điều kiện in vitro 26 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng việc kết hợp khử trùng HgCl2 0.1% Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu cấy gừng Núi đá 28 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 29 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro 29 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA IAA đến khả hình thành mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro .31 4.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D kết hợp với BA đến khả hình thành mơ sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro 33 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đường saccharose đến khả hình thành mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 35 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận .37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 n Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Gừng (Zingiber officinable Roscoe.) loại thân thảo, lấy củ, sống lâu năm sử dụng nhiều công nghiệp thực phẩm thảo dược [32] Chúng trồng phổ biến hầu nhiệt đới Ấn Độ, Bangladet, Jaiwan, Jamaica, Nigieria, Indonesia, Ceylon, Sierraleone, Australia, Trung Quốc Nhật Bản [21], gồm 1200 loài thuộc 53 chi Chi Zingiber gồm 85 loài thảo mộc thơm từ Đông Á vùng nhiệt đới Australia [19] Bộ phận sử dụng củ gừng (thân rễ, rhizome) [17] Gừng có vị cay, thơm giàu hợp chất thứ cấp nhựa dầu, dẫn xuất phenol, zingiberene, gingerol [33] Trong phương pháp chữa bệnh truyền thống thường sử dụng để điều trị bệnh đau đầu, buồn nôn, cảm lạnh, viêm khớp, thấp khớp, nhức mỏi bắp, viêm [20] Ở Ấn Độ Trung Quốc thời cổ xưa sử dụng gừng điều trị bệnh người gia súc [47] Trong công nghiệp thực phẩm, gừng sử dụng để tạo hương vị sản xuất số sản phẩm bánh kẹo, trà, mứt, nước giải khát,…[17] Gừng thường nhân giống củ, hệ số nhân thấp Năng suất gừng không cao nhiễm vi khuẩn gây héo (Pseudomonas solanacearum), thối rễ (Pythium aphanidermatum) tuyến trùng (Meloidgyne spp.) Những bệnh truyền qua củ giống vào năm sau, sản xuất dòng bệnh với tỷ lệ nhân giống cao cần thiết để có vụ mùa với suất cao [50] Đã có nhiều nghiên cứu gừng giới vi nhân giống [31], nuôi cấy quan [34], phát sinh phôi soma [41], phát sinh quan [38], nuôi cấy tế bào trần, bảo tồn phôi số nghiên cứu khác Tuy nhiên, chưa có nhiều nghiên cứu gừng Núi đá – loại địa, quý Theo định 80/2005/QĐ - BNN danh mục nguồn gen quý cần bảo tồn Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn ban hành ngày 05/12/2005, gừng Núi đá loài quý cần bảo tồn Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá (Zingiber sp.) điều kiện in vitro” n 1.2 Mục đích đề tài - Nghiên cứu phương pháp khử trùng thích hợp để tạo vật liệu phục vụ cho nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định ảnh hưởng phương pháp khử trùng (thời gian khử trùng, phương pháp khử trùng) đến khả tạo vật liệu phục vụ cho tạo mô sẹo gừng Núi đá - Xác định ảnh hưởng hàm lượng đường saccharose đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro - Xác định ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Sự thành công đề tài với nghiên cứu tác giả khác tạo quy trình nhân giống phù hợp cho gừng Núi đá điều kiện in vitro phục vụ nghiên cứu chiết xuất hợp chất hóa học quan trọng gừng nói chung gừng Núi đá nói riêng - Là sở cho nghiên cứu khoa học khác 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Cung cấp số lượng gừng Núi đá tự nhiên góp phần bảo tồn nguồn gen quý khai thác triệt để giá trị kinh tế dược liệu chúng n Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan gừng núi đá 2.1.1 Phân loại Theo hệ thống thực vật học gừng Núi đá phân loại sau [15]: Giới : Plantae Ngành : Magnoliophyta Lớp : Liliopsida Họ : Zingiberaceae Bộ : Zingiberales Chi : Zingiber Loài : Zingiber sp Tên Việt Nam : Gừng Núi đá Tên khoa học : Zingiber sp Tên khác : Gừng đá, gừng Núi đá Tiếng Tày gọi khing phia 2.1.2 Đặc điểm phân bố Gừng lồi trồng phổ biến khắp giới, có nguồn gốc từ trung tâm Châu Á, trồng vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Chúng trở thành trồng kinh tế cho nông dân Châu Mỹ La - tinh, Châu Phi Đông Nam Á Gần 50% sản lượng gừng thu hoạch xuất xứ từ Ấn Độ, phần từ Châu Phi, Brazil, Jamica Trong vùng Đơng Nam Á, Trung Quốc nước có diện tích trồng gừng cao (50.000 đến 80.000 ha), Thái Lan, Hàn Quốc Việt Nam [47] Ở Việt Nam, gừng trồng từ lâu đời, khắp nơi khắp địa phương từ Bắc vào Nam [9] Tuy nhiên, gừng trồng rải rác vườn hộ gia đình [2] Gừng Núi đá phân bố số tỉnh Lạng Sơn, Nà Rì, Bắc Cạn, Cao Bằng, Hà Giang, Tây Bắc miền Trung Tây Nguyên, Khánh Hòa, Gia Lai, Đắc Lắc, mọc tự nhiên vùng núi đá, mọc xen đá, bờ suối nơi ẩm mát - tán rừng già , thường phát triển theo cụm (5,6 thân) Tên gừng Núi đá bắt nguồn từ nơi chúng có khả sống phát triển tốt Loại gừng thường mọc dãy núi đá cao khoảng 1m, củ đốt ngón tay, có mùi vị thơm giống mùi bọ xít n 39 14 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, NXB Giáo Dục 15 Hoàng Thị Sản (2009), Phân loại học thực vật, NXB Giáo Dục 16 Võ Châu Tuấn ( 2014), “Nghiên cứu nuôi cấy tế bào nghệ đen (Curcuma zedoaria Roscoe) khảo sát khả tích lũy số hợp chất có hoạt tính sinh học chúng” Luận án tiến sỹ Trường đại học khoa học – Đại học Huế II Tài liệu Tiếng Anh 17 Afshari RT, Angoshtari R, Kalantari S , Effects of light and different plant growth regulators on induction of callus growth in rapeseed (Brassica napus L.) genotypes Plant Omics J 2011, 4(2): 60-67 18 A.K.Ghosh, S.Banerjee, H.I.Mullick and J.Banerjee, Zingiber officinale: A nutural gold, International Journal of farma and bio science 19 Babu KN, Samsudeen K, Ravindran PN Direct regeneration of plantlets from immature inflorescence of ginger (Zingiber officinale Rosc.) by tissue culture J Spices Aromat Crops 1992, 1: 43-8 20 Badreldin HA, Blunden G, Tanira Musbah O, Nemmar A Some phytochemical, pharmacological and toxicological properties of ginger (Zingiber officinale Rosce) Food Chem Toxical 2008, 46: 409- 420 21 Bajai YPS Biotechnology in agriculture and forestry: Medicinal and aromatic plants Vol VI Berlin: Springer -Verlag; 1989 24 Chan LK, Thong WH In vitro propagation of Zingiberaceae species with medicinal properties J Plant Biotechnol 2004, 6: 181-188 25 Dekker AJ, Rao AN, Gob CJ In vitro storage of multiple shoot cultures of ginger at ambient temperatures of 24-29 ْC Sci Hort 1991; 47: 157-67 26 Evans WC (2002) Trease and Evans Pharmacognosy, 16th Edn, Saunders Elsevier: 289-292 27 Dougall D K., Nutrition and metabolism In: Staba E J (ed) Plant tissue culture as a source of biochemical, Chemical Rubber Company Press, Boca Raton, Florida pp 1980, 21-58 28 Faridah, Q Z., Abdelmageed, A H A., Julia, A A and Nor Hafizah, R., “Efficient in vitro regeneration of Zingiber zerumbet Smith (a valuable medicinal plant) plantlets from rhizome bud explants”, African Journal of Biotechnology 2011 Vol.10(46), pp 9303-9308 n 40 20 Grant KL, Lutz RB Alternative therapies: ginger Am J Health Syst Pharm 2000; 57: 945-7 30 Hilderbrant, A.C; Wilmar, J.C; Fohns, H; Riker, A.J (1963) Growth of edible chlorofyllous plant tissue in vitro Am.J.Bot 50: 248 – 254 31 Hosoki T, Sagawa Y Clonal propagation of ginger (Zingiber officinale Rosc.) through tissue culture Hort Sci 1997, 12: 451-2 32 InDu Sasidharan,, A NirMala Menon Comparative chemical composition and antimicrobial activity Fresh & dry ginger oils (Zingiber officinale Roscoe.) International of current phamaceutical Reseach 2005, vol 2, inssue 33 Imaneh dehghani; Akbar Mostajeran; Gholamreza asqhari (2011) In vitro and in vivo Production of Gingerols and Zingiberene in Ginger Plant (Zingiber officinale Roscoe) Iranican Journal of pharmaceutical Sciences, vol 7, Issue 2, 117 – 121 34 Josue Jack F Malamug, Haruhisa Inden and Tadashi Asahira Plantlet regeneration and propagation from ginger callus Scientia Horticulturae 1991, 48: 89-97 Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam 35 Jonoubi P, Mousavi A, Majd A, Salmanian AH, Jalali JM Efficient regeneration of Brassica napus L hypocotyls and genetic transformation by Agrobacterium tumefaciens Biol Plantarum 2005 49: 175-180 36 Kulkarni VM, Varshny LR, Bapat VA, Rao PS Somatic embryogenesis and plant regeneration in a seeded banana [Ensete superbum (Roxb.) Cheesman Curr Sci India 2002, 83: 939-941 37 Kurmar and Kan War Plant regenaration from cell suspension in Gerbera gamesonii Bolus J Fruit Ornam Plant Res 2007, 15:157 – 166 38 Kulkarni VM, Varshny LR, Bapat VA, Rao PS Somatic embryogenesis and plant regeneration in a seeded banana [Ensete superbum (Roxb.) Cheesman Curr Sci India 2002, 83: 939-941 39 Maretzki A Thom A, Nickele LG, Influence of osmostic potection on the growth and chemical composition of sugarcane cell cultures Hawaii Plant Res 1972, 58: 183 – 199 40 Miller Co, Skoog F, Okumura FS, Von Saltza MH, Strong FM Isolation, structure and synthesis of kinetin, a cell division factor from deoxyribonucleic acid J Amer Chem Soc 1957, 78: 1350 – 1380 41 Mustafa T, Srivastava KC and Jensen KB Drug Development Report: Pharmacology of ginger, Zingiber officinale J Drug Dev, (24): (1993) n 41 42 Murashige, T And F Skoog A revisied medium for rapid growth and bioassay with tobacco culture physiol Plant 1962, 15: 473 – 497 43 Mrudul VS, John CK, Rajani SN Factors affecting in vitro microrhizome production in turmeric Plant cell tiss Org 2001, 64: – 11 44 Necta DS, Leela G, Susan E (2002) Micropropagation and field evaluation of micropropagation plants of turmeric Plant Cell Tiss Org 2002, 68: 143 – 151 45 Nadgauda R.S, Kulkarni D.D., Mascarenhas A.F and Jagannathan V Development of lantlets from cultured tissues of ginger (Zingiber officinale Roscoe) In: P.S Rao, M.R Iqeoic ai,.d M.S Chadha (Editors), Plant Tissue Culture 1980, Genetic Manipulation and Somatic Hybridization of Plant Cells Proceedings ofa Nationai, Symposium held at BARC, Bombay, India, pp 358-368 46 Anasori P and Asghari G Effects of light and differentiation on gingerol and gingerberene in callus culture of zingiber officinale Phamaceutical Science 2008, 3(1); 59 - 63 47 Ravindran P.N and Nirmal Babu K (2005) Ginger: The genus of Zingiber CRC press 48 Prakash S, Elangomathavan R, Seshadri S, Kathiravan K, Ignacimuthu S Efficient regeneration of Curcuma amada Roxb plantlets from rhizome and leaf sheath explants Plant Cell Tiss Org 2004, 78: 159-165 49 Roy A, Ghosh S., Chaudhuri M., Saha PK Effect of different plant hormones on callus induction in Gymnema sylvestris R.Br (Asclepiadaceae) Afr J Biotechnol 2008, 7(13): 2209-2211 50 Sharma TR., Singh BM High-frequency in vitro multiplication of diseasefree Zingiber officinale Rosco Plant Cell Rep 1997; 17: 68-72 51 Skirvin R.M, Chu M.C., Mary L., Heather Y and Thomas F., 1986 Stability of tissue culture medium pH as a function of autoclaving, time and cultured plant material Plant Cell Rep., 4: 292-294 52 CM Tamil Sundram, M Suffian, M Annuar and Norzulaani Khalid Optimization of culture condition for callus induction from shoot buds for establishment of rapid growth cell suspension cultures of Mango ginger (Curcuma mangga) Australian journal of crop science 2012, 6(7) : 1139 - 1146 53 Pierik, RLM (1990) Cultivo in vitro de las plantas superiors Multiprensa publisher, Madrid, España, pp: 326 n 42 PHỤ LỤC Phụ lục Một số hình ảnh trình nghiên cứu Hình Mầm chồi gừng Núi đá sử dụng làm mẫu A B Hình Mẫu sống khơng nhiễm (A) mẫu chết (B) n 43 Hình Mẫu phình sau 10 ngày ni cấy Hình Trong mơi trường khơng bổ sung chất kích thích sinh trưởng mẫu hình thành chồi rễ n 44 C D Hình Mơ sẹo hình thành sau tuần tuần ni cấy Hình Mơ sẹo có hình thái khác nồng độ chất kích thích sinh trưởng khác Mô sẹo màu trắng xanh, ( trái), mô sẹo màu vàng, (phải) n 45 Phụ lục Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0.1% đến hiệu khử trùng mẫu gừng Núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE NHIEM FILE TN1 31/ 5/14 0:36 :PAGE Bang 1: Anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den hieu qua khu trung mau cay gung Nui da VARIATE V003 NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2863.84 954.615 245.43 0.000 * RESIDUAL 31.1162 3.88953 * TOTAL (CORRECTED) 11 2894.96 263.178 BALANCED ANOVA FOR VARIATE K.NHIEM FILE TN1 31/ 5/14 0:36 :PAGE Bang 1: Anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den hieu qua khu trung mau cay gung VARIATE V004 K.NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1316.60 438.866 93.30 0.000 * RESIDUAL 37.6316 4.70395 * TOTAL (CORRECTED) 11 1354.23 123.112 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE TN1 31/ 5/14 0:36 :PAGE Bang 1: Anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den hieu qua khu trung mau cay gung VARIATE V005 CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1437.87 479.290 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.28287 160359 * TOTAL (CORRECTED) 11 1439.15 130.832 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1 31/ 5/14 0:36 :PAGE Bang 1: Anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den hieu qua khu trung mau cay gung MEANS FOR EFFECT CT$ - n 46 CT$ NOS NHIEM K.NHIEM CHET 60.4500 36.3000 3.25000 50.7800 45.0100 4.21000 29.0200 65.1100 5.87000 22.6300 47.0800 29.6300 SE(N= 3) 1.13864 1.25219 0.231199 5%LSD 8DF 3.71300 4.08327 0.753917 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1 31/ 5/14 0:36 :PAGE Bang 1: Anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den hieu qua khu trung mau cay gung F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | NHIEM 12 40.720 16.223 1.9722 4.8 0.0000 K.NHIEM 12 48.375 11.096 2.1689 4.5 0.0000 CHET 12 10.740 11.438 0.40045 3.7 0.0000 n | 47 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng việc kết hợp khử trùng HgCl2 0.1% với Ca(OCl)2 15% đến hiệu khử trùng mẫu gừng Núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMSKN FILE TN1H 2/ 6/14 15:49 :PAGE anh huong cua viec ket hop khu trung bang HgCl2 0.1% voi Ca(OCl)2 15% den hieu qua khu trung mau cay gung nui da VARIATE V003 TLMSKN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7014.80 1753.70 208.20 0.000 * RESIDUAL 10 84.2302 8.42302 * TOTAL (CORRECTED) 14 7099.03 507.074 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1H 2/ 6/14 15:49 :PAGE anh huong cua viec ket hop khu trung bang HgCl2 0.1% voi Ca(OCl)2 15% den hieu q MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLMSKN 65.3300 69.8000 81.3300 42.5000 20.8300 SE(N= 3) 1.67561 5%LSD 10DF 5.27991 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1H 2/ 6/14 15:49 :PAGE anh huong cua viec ket hop khu trung bang HgCl2 0.1% voi Ca(OCl)2 15% den hieu q F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMSKN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 55.958 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 22.518 2.9022 5.2 0.0000 n | | | | 48 Bảng 3: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE TN3 30/ 5/14 23:39 :PAGE Bảng 3: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7013.44 1402.69 489.13 0.000 * RESIDUAL 12 34.4130 2.86775 * TOTAL (CORRECTED) 17 7047.86 414.580 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 30/ 5/14 23:39 :PAGE Bảng 3: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MO SEO 2.15000 56.3400 61.1200 42.0800 38.5600 25.1200 SE(N= 3) 0.977710 5%LSD 12DF 3.01266 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 30/ 5/14 23:39 :PAGE Bảng 3: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 18 37.562 20.361 1.6934 4.5 0.0000 n | 49 Bảng 3: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng núi đá điều kiện in vitro VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3545.29 443.162 142.58 0.000 * RESIDUAL 18 55.9487 3.10826 * TOTAL (CORRECTED) 26 3601.24 138.509 - n 50 Bảng Kết qủa nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA IAA đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE TN34 5/ 6/14 23:38 :PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2505.74 313.218 95.35 0.000 * RESIDUAL 18 59.1270 3.28483 * TOTAL (CORRECTED) 26 2564.87 98.6489 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN34 5/ 6/14 23:38 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 3 DF TLMS 35.1200 38.1100 42.2400 48.8900 52.8700 68.1400 57.5600 53.8900 51.3433 SE(N= 3) 1.04640 5%LSD 18DF 3.10900 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN34 5/ 6/14 23:38 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMS GRAND MEAN (N= 27) NO OBS 27 49.796 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.9322 1.8124 3.6 0.0000 n | | | | 51 Bảng Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D kết hợp với BA đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE TN5 31/ 5/14 1:52 :PAGE BANG 5: ANH HUONG CUA NONG DO 2,4 - D KET HOP VOI BA DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA TRONG DIEU KIEN IN VITRO VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 24065.5 4010.91 ****** 0.000 * RESIDUAL 14 38.4993 2.74995 * TOTAL (CORRECTED) 20 24104.0 1205.20 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 31/ 5/14 1:52 :PAGE BANG 5: ANH HUONG CUA NONG DO 2,4 - D KET HOP VOI BA DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA TRONG DIEU KIEN IN VITRO MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MO SEO 1.27000 75.6800 1.05000 79.8900 77.1500 45.2300 12.5000 SE(N= 3) 0.957418 5%LSD 14DF 2.90406 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 31/ 5/14 1:52 :PAGE BANG 5: ANH HUONG CUA NONG DO 2,4 - D KET HOP VOI BA DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA TRONG DIEU KIEN IN VITRO F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 21) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 21 41.824 34.716 1.6583 4.0 0.0000 n | 52 Bảng Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đường saccharose đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO SEO FILE TN6 31/ 5/14 2: :PAGE BANG 6: ANH HUONG CUA HAM LUONG DUONG DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA VARIATE V003 MO SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1350.71 450.236 141.77 0.000 * RESIDUAL 25.4061 3.17576 * TOTAL (CORRECTED) 11 1376.11 125.101 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 31/ 5/14 2: :PAGE BANG 6: ANH HUONG CUA HAM LUONG DUONG DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MO SEO 45.3200 50.2700 32.1200 23.4500 SE(N= 3) 1.02888 5%LSD 8DF 3.35506 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 31/ 5/14 2: :PAGE BANG 6: ANH HUONG CUA HAM LUONG DUONG DEN KHA NANG TAO MO SEO CAY GUNG NUI DA F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | MO SEO 12 37.790 11.185 1.7821 4.7 0.0000 n | 53 Phụ lục Môi trường MS Bottle Stock Component Solution (g/l) I II III IV NH4NO3 KNO3 82,5 95 MgSO4 7H2O MgSO4 4H2O 37,0 ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O 2,23 1,058 0,0025 CaCl2.2H2O KI 44,0 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O V FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O Amount to take preparation (ml) 20 Final concentratic (mg/ l) 1.650,0 1.900,0 370,0 10 10 22,3 10,6 0,025 440,0 0,83 0,025 17,0 0,62 0,025 10 2,784 3,724 10 170,0 6,2 0,25 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl 100 100 100 0,5 2,0 0,1 0,5 2,0 0,1 PyridoxineHCl 100 0,5 0,5 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar PH 8.000,0 5,8 n ... cho tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro - Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng tới khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro - Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng. .. nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ 2,4 - D đến khả tạo mô sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro. .. đến khả hình thành mơ sẹo Một số kiến nghị nghiên cứu gừng Núi đá: - Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy số chất thiết yếu đến hình thành mơ sẹo gừng Núi đá điều kiện in vitro - Nghiên cứu ảnh