(LUẬN án TIẾN sĩ) nghiên cứu sự thay đổi nồng độ hormon steroid trong nước bọt, sữa và huyết thanh trên những người sống tại vùng phơi nhiễm chất da cam dioxin ở việt nam

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Dioxin nhóm hợp chất hữu độc hại, sản phẩm phụ không mong muốn số ngành cơng nghiệp hóa chất đốt cháy sản phẩm hữu Với dặc tính khơng hịa tan nước, khó thối hóa nên môi trường bị ô nhiễm, dioxin lắng đọng đất, cặn bùn tích trữ sinh học vào số loại động vật có chuỗi thức ăn người Khi xâm nhập vào thể người, dioxin tích lũy chủ yếu mơ mỡ thể đào thải chậm [1] Dioxin tác động đến trình sinh sản phát triển, gây rối loạn hệ thống miễn dịch nội tiết thể có hàm lượng nhỏ Nó tác động đến nhiều quan, hệ quan thể gây rối loạn bệnh lý phức tạp đa dạng, điều làm giảm tuổi thọ người bị phơi nhiễm họ hệ tương lai [2] Trong chiến tranh Việt Nam giai đoạn 1961 đến 1972 quân đội Mỹ rải lượng lớn chất diệt cỏ có tạp nhiễm lượng lớn dioxin thành phần xuống nhiều vùng rộng lớn miền Nam Việt Nam, nhằm mục đích phát quang để phá hủy nơi ẩn lấp quân đội giải phóng chiến đấu miền Nam Việt Nam [3] Do đặc tính bền vững dioxin, tác động gây nên hậu nghiêm trọng sức khoẻ người môi trường sống Việt Nam, đặc biệt bà mẹ trẻ em khu vực phơi nhiễm dioxin Dioxin ảnh hưởng tới bào thai từ sớm qua thai Những trẻ nhỏ tiếp xúc với dioxin bị ảnh hưởng phát triển thể chất tâm thần [2], [4],[5] Phơi nhiễm dioxin gây tác dụng độc hại mà số tác động hệ thống nội tiết Bên cạnh đó, với đặc tính ưa lipid dioxin nên LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com người mẹ cho bú, dioxin đồng phân chủ yếu tập trung vào sữa mẹ Như vậy, sữa mẹ đường thải trừ dioxin chủ yếu Nồng độ dioxin sữa mẹ phụ thuộc vào mức độ tiếp xúc loại đồng phân dioxin Mặt khác, dioxin polychlorinated biphenyls (PCBs) chứng minh tích lũy tuyến thượng thận xâm nhập vào thể Đồng thời làm thay đổi tổng hợp hormon steroid vỏ thượng thận theo liều lượng thời gian tác động Tuy nhiên, tác động dioxin hormon steroid thượng thận chưa điều tra kỹ lưỡng thông qua đánh giá thực nghiệm Hơn nữa, chưa có nhiều nghiên cứu nồng độ dioxin chiến tranh liên quan đến hormon streroid huyết thanh, đặc biệt nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ trẻ em sống khu vực điểm nóng dioxin Việt Nam Vì vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài “nghiên cứu thay đổi nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết người sống vùng phơi nhiễm chất da cam/dioxin Việt Nam” với mục tiêu: Xác định nồng độ dioxin sữa người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Xác định nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ con, sữa huyết người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Tìm hiểu mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết với nồng độ dioxin sữa người mẹ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Hormon steroid 1.1.1 Đại cương hormon steroid Hormon steroid có nguồn gốc từ cholesterol đặc trưng nhân steroid Cấu trúc bao gồm ba vòng sáu cạnh vòng năm cạnh, tương ứng với tên gọi A, B, C D [6] Hình 1.1 Cấu trúc nhân steroid [7] Cấu trúc biết đến cyclopentanoperhydrophenanthrene, có sáu vị trí khơng đối xứng, cung cấp nhiều đồng phân khác Hơn nữa, vị trí C-17 có nhóm mà thay đổi tạo thành hormon steroid khác có chức tùy thuộc vào chức nhóm [6] Hormon steroid tổng hợp loạt mô, bật tuyến thượng thận tuyến sinh dục Tiền thân từ cholesterol tổng hợp tế bào từ acetate, từ thành phần este-cholesterol giọt lipid tế bào từ hấp thu lipoprotein tỉ trọng thấp chứa cholesterol LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.1.2 Các loại hormon steroid Các hormon steroid xác định theo nguồn gốc tác dụng sinh học chủ yếu chúng Thông thường, phân loại hormon steroid vào năm nhóm chính, chủ yếu dựa vào thụ thể mà chúng ràng buộc 1.1.2.1 Glucocorticoid Glucocorticoid bao gồm thành phần cortisol corticosteron bắt nguồn từ vỏ thượng thận ảnh hưởng chủ yếu đến trao đổi chất theo nhiều cách khác Cortisol glucocorticoid tiết tuyến vỏ thượng thận, có nguồn gốc sinh học từ pregnenolon với vai trò enzym 17α- hydroxypregnenolon, 17α-hydroxyprogesteron 11- deoxycortisol Glucocorticoid thường xâm nhập qua màng tế bào gắn với thụ thể glucocorticoid bào tương Sau phức hợp xâm nhập vào nhân tế bào gắn vào vị trí chuyên biệt ADN, dẫn đến gen đặc hiệu biểu có chép ARN thông tin Cuối cùng, protein đặc hiệu tổng hợp phát huy tác dụng sinh học glucocorticoid Mặc dù thụ thể glucocorticoid giống nhiều mô quan protein tổng hợp lại thay đổi nhiều tùy thuộc vào mơ đích phát huy tác dụng khác mô khác nhau, điều tạo nên tác dụng đa dạng glucocorticoid [8] Hình 1.2 Cấu trúc hóa học cortisol [7] LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.1.2.2 Mineralocorticoid Các mineralocorticoid tuyến thượng thận tiết bao gồm aldosteron 11-deoxycorticorterson Aldosteron sản xuất vùng cầu vỏ thượng thận bắt nguồn từ progesteron ảnh hưởng chủ yếu hệ thống renin - angiotensin, trình tồng hợp theo bước sau: Progesteron → 11-Deoxycorticosteron → Corticosteron → Aldosteron Các bước xúc tác enzym CYP21A2, CYP11B1 aldosteron synthase/CYP11B tương ứng nhóm hydroxyl progesteron carbon-21 mang 11-deoxycorticosteron corticosteron sau bước hydroxyl carbon-11 Q trình hydroxyl khử oxi hóa carbon-18 xúc tác CYP11B2 kết hình thành aldosteron Mineralocorticoid có tác dụng quan trọng việc điều hịa thể tích dịch ngoại bào chuyển hóa kali hay cịn gọi nhóm hormon chuyển hóa muối nước [8] 1.1.2.3 Androgen Androgen bắt nguồn từ tuyến vỏ thượng thận, tuyến sinh dục chủ yếu ảnh hưởng đến trưởng thành chức quan sinh dục thứ cấp Hormon androgen có nguồn gốc từ hai steroid 17α-hydroxy bao gồm 17αhydroxypregnenolon 17α -hydroxyprogesteron Hai steroid chuyển đổi enzym CYP17 để trở thành androgen dehydroepiandrosteron (DHEA) androstenedion tương ứng DHEA chuyển thành androstenedion 3β-HSD (3β-hydroxysteroid dehydrogenase) Sự hình thành androgen tuyến thượng thận giới hạn DHEA androstenedion, tinh hồn lại có diện 17β-HSD (17β-hydroxysteroid dehydrogenase) tế bào Leydig để đảm bảo hình thành testosteron [9],[10] LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Tuyến vỏ thượng thận sản xuất androgen góp phần quan trọng nhiều q trình sinh lý Các androgen androstenedion, DHEA dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) chuyển thành testosteron mơ khác Trước tuổi dậy có lượng nhỏ androgen tiết trước Androgen cần thiết cho phát triển hệ thống sinh sản nam đặc biệt giai đoạn dậy thì, nhóm hormon góp phần quan trọng cho hình thành trì ham muốn tình dục Androgen có xu hướng làm tăng kích thước quan sinh sản nam giới Ngược lại, thiếu hụt nam giới trưởng thành gây teo giảm hoạt động phận sinh dục [8] Ở phụ nữ khoảng nửa androgen hàng ngày sản xuất từ buồng trứng dạng testosteron androstenedion Phần lại tuyến thượng thận sản xuất, chủ yếu DHEA DHEA-S, mà chuyển đổi thành androstenedion testosteron mô khác Ở phụ nữ sản xuất dư thừa androgen xảy rối loạn tuyến thượng thận, rối loạn buồng trứng rối loạn chuyển hóa mỡ [8],[10] 1.1.2.4 Estrogen Estrogen hormon steroid nữ sản xuất chủ yếu buồng trứng, số lượng sản xuất vỏ thượng thận, thai tinh hoàn nam giới Estrogen giúp kiểm sốt phát triển giới tính, bao gồm thay đổi thể chất liên quan đến tuổi dậy Nó ảnh hưởng đến q trình rụng trứng chu kỳ kinh nguyệt, cho bú sau mang thai, tình trạng tâm lý trình lão hóa Estrogen bao gồm thành phần estron estradiol chúng chủ yếu ảnh hưởng đến phát triển, trưởng thành chức quan sinh dục nữ giới xác định tính dục nữ Q trình tổng hợp estrogen địi hỏi enzym P450 nhóm aromatase hay CYP19A1 Chất hai LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com androstenedion (cho estron) testosteron (cho estradiol) Estron estradiol hốn đổi cho thơng qua phản ứng thuận nghịch liên quan đến enzym 17β-HSD, trình chuyển đổi androstenedion-testosteron Hoạt động aromatase có mặt buồng trứng thai [11],[12],[13] 1.1.2.5 Progesteron Progesteron sản xuất buồng trứng, thai phần nhỏ tuyến thượng thận, có vai trị quan trọng chu kỳ kinh nguyệt trì phát triển bào thai Trong mang thai, progesteron kích thích phát triển tuyến vú [14] 1.1.3 Tổng hợp hormon steroid Trong cholesterol tổng hợp nhiều mơ thể, hormon steroid tổng hợp vỏ thượng thận, buồng trứng tinh hoàn Nguồn gốc cấu trúc hợp chất cholesterol có chứa hệ thống liên kết bao gồm 27 ngun tử carbon Nó tạo thành từ ba vịng carbon sáu cạnh vòng carbon năm cạnh, chuỗi bên có số nguyên tử carbon từ 20 đến 27 đính kèm vị trí 17 hydrocarbon đa vòng Các hormon steroid tổng hợp nhóm tế bào định phụ thuộc vào vai trị enzym, đa số enzym thuộc nhóm cytochrom P450 oxygenase Dưới tác động enzym P450 SCC hay CYP11 A ty lạp thể tế bào, chuỗi bên cholesterol tách tạo thành pregnenolon Quá trình chịu tác động hormon kích vỏ thượng thận ACTH [8] Sau hình thành, pregnenolon chuyển khỏi ty thể tế bào để tiếp tục chuyển đổi thành 17-hydroxy-pregnenolon tác dụng enzym P450C17 Tác dụng hệ thống enzym 3β-HSD2 chuyển nối đôi để tạo thành 17α-hydroxy- progesteron từ 17-hydroxy-pregnenolon LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Sau đó, vùng lưới vùng bó vỏ thượng thận enzym P450C21 P450C11 làm trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 11β thành phần 17-hydroxy-pregnenolon Sau chuỗi phản ứng kết thúc chuyển 11-deoxycortisol thành cortisol 11 deoxycorticosteron thành corticosteron [8] Tại vùng cầu lớp vỏ thượng thận, enzym P450 aldo hay gọi CYP11 B2 đóng vai trị trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 11β q trình oxy hóa vị trí 18 để chuyển đổi từ 11-deoxycorticosteron thành corticosteron 18-hydroxycorticosteron Cuối chuỗi phản ứng tạo thành aldosteron hormon có vai trị chuyển hóa muối nước Trong hệ võng nội mạc, có enzym P450C17 đóng vai trị trung gian cho q trình hoạt động 17α-hydroxylase 17-20 lyase, enzym P450C21 làm trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 21 progesteron 21-hydroxyprogesteron Androgen vỏ thượng thận tổng hợp khởi đầu tác dụng enzym P450C17, với hoạt hóa enzym thành phần pregnenolon progesteron hydroxyl hóa vị trí 17α Tại ty thể tế bào tác dụng enzym 17,20 demolase chuỗi bên có nguyên tử carbon vị trí 17 bị tách khỏi thành phần 17-hydroxy-pregnenolon để tạo thành DHEA có chứa nhóm ceto vị trí C17 Tiếp theo tác dụng enzym sulfokinase thượng thận DHEA chuyển thành DHEA sulfat, trình thuận nghịch Enzym 17,20 demolase có tác dụng chuyển đổi từ 17-hydroxyprogesteron thành androstenedion, lại phần nhỏ androstenedion thành lập từ DHEA [9],[10] Ở người trưởng thành androgen bao gồm DHEA androstenedion hay estrogen gồm estron (E1) estradiol (E2) chủ yếu LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com tổng hợp tinh hoàn nam giới buồng trứng nữ giới tác dụng hormon kích thích LH FSH [8] Tuy nhiên, đường sinh tổng hợp hormon steroid với thành phần tham gia giống tất mô, khác biệt khả tổng hợp tiết kích thích hay ức chế số enzym cụ thể Sinh tổng hợp hormon steroid đòi hỏi kích thích enzym oxy hóa nằm ty thể lưới nội chất Hình 1.3 Sơ đồ tổng hợp hormon steroid [15] 1.1.4 Tác dụng sinh học Các hormon steroid giải phóng lưu thơng máu sau chúng hình thành, chúng lưu thông đến phận khác thể thực hoạt tính sinh học cách qua màng tế bào LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 10 liên kết với thụ thể tế bào Phức hợp hormon steroid - thụ thể thực tác dụng sinh học chúng cách gắn vào nucleotid cụ thể ADN gen đáp ứng [8] Sự tương tác phức hợp hocmon steroid - thụ thể với ADN gây kích thích kìm hãm q trình phiên mã gen liên quan Một số rối loạn nội tiết liên quan đến rối loạn sinh tổng hợp steroid khiếm khuyết enzym cụ thể Khơng có khả tiết mức bình thường steroid thượng thận dẫn đến mắc bệnh tăng sản bẩm sinh tuyến thượng thận (CAH) Trong phần lớn trường hợp, hội chứng đột biến gen CYP21A2 kết hợp với tăng tiết androgen thượng thận phần nam hóa bé gái Khuyết tật tổng hợp androgen tinh hồn (do đột biến gen CYP17 17β-HSD) dẫn đến tượng lưỡng tính nam [16],[17],[18] Các hormon steroid tổng hợp tiết tuyến nội tiết vỏ thượng thận tuyến sinh dục Sau giải phóng vào máu, chúng lưu hành đến phận khác thể, nơi chúng đem lại đáp ứng cụ thể từ tế bào cụ thể Các glucocorticoid ảnh hưởng đến hoạt động chuyển hóa carbonhydrat, protein lipid ảnh hưởng loạt chức quan trọng khác bao gồm phản ứng viêm khả thích ứng với căng thẳng Các mineralocorticoid phần lớn chức để điều chỉnh tiết muối nước thận Cả androgen estrogen ảnh hưởng đến phát triển sinh dục chức Các hormon tạo nên khác biệt giới tính, từ đặc điểm giới tính thứ cấp đến hành vi tình dục Progesteron sản xuất thể vàng thai, tác động đến phát triển niêm mạc tử cung LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 200 Murphy B.E, Clark S.J, Donald I.R et al, (1974) Conversion of maternal cortisol to cortisone during placental transfer to the human fetus Am J Obstet Gynecol, 118(4): p 538-41 201 Reynolds R.M, (2013) Glucocorticoid excess and the developmental origins of disease: two decades of testing the hypothesis 2012 Curt Richter Award Winner Psychoneuroendocrinology, 38(1): p 1-11 202 Moisiadis V.G andMatthews S.G, (2014) Glucocorticoids and fetal programming part 1: Outcomes Nat Rev Endocrinol, 10(7): p 391-411 203 Moisiadis V.G andMatthews S.G, (2014) Glucocorticoids and fetal programming part 2: Mechanisms Nat Rev Endocrinol, 10(7): p 403-11 204 Quissell D.O, (1993) Steroid hormone analysis in human saliva Ann N Y Acad Sci, 694: p 143-5 205 Kim M.S, Lee Y.J, and Ahn R.S, (2010) Day-to-day differences in cortisol levels and molar cortisol-to-DHEA ratios among working individuals Yonsei Med J, 51(2): p 212-8 206 Touitou Y, Auzeby A, Camus F et al, (2009) Daily profiles of salivary and urinary melatonin and steroids in healthy prepubertal boys J Pediatr Endocrinol Metab, 22(11): p 1009-15 207 Gerritsen L, Geerlings M.I, Beekman A.T et al, (2010) Early and late life events and salivary cortisol in older persons Psychol Med, 40(9): p 1569-78 208 Wudy SA, Hartmann M, and J H, (2002) Determination of 11deoxycortisol (Reichstein's compound S) in human plasma by clinical isotope dilution mass spectrometry using benchtop gas chr matographymass selective detection, in Steroids 2002 p 851-857 209 Chace D.H, (2009) Mass spectrometry in newborn and metabolic screening: historical perspective and future directions J Mass Spectrom, 44(2): p 163-70 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành chương trình nghiên cứu sinh viết luận án này, em nhận hướng dẫn, giúp đỡ nhiệt tình q thầy Cho phép em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: GS TS Teruhiko Kido, Trưởng Khoa Khoa học sức khỏe, Viện đào tạo Y dược Khoa học sức khỏe, Trường Đại Học Kanazawa, thầy tận tình giúp đỡ, cho em kiến thức kinh nghiệm, đồng thời hỗ trợ phương tiện kinh phí để đề tài thực TS Đặng Đức Nhu, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi để em thực đề tài hoàn thành luận án PGS TS Phạm Thiện Ngọc, GS TS Tạ Thành Văn Bộ Mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội, thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ truyền thụ cho em kiến thức quý báu để thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn: Ban Giám Hiệu, Phòng Đào tạo sau Đại học, Ban 10-80, tập thể Bộ mơn Hóa sinh Trường Đại Học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập trường Ban Giám Đốc, Khoa Sinh hóa Bệnh viện Việt Tiệp Hải Phịng quan tâm ủng hộ, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình học tập Trân trọng biết ơn chia sẻ, giúp đỡ động viên sâu sắc gia đình, bạn bè đồng nghiệp LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận án trung thực, thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Đào Văn Tùng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC VÀ KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACTH : Adrenocorticotropic Hormone Kích tố vỏ thượng thận Adion : Androtenedion AND : Acid Deoxyribo Nucleic AhR : Aryl hydrocarbon Receptor Thụ thể Aryl hydrocarbon ARN : Acid Ribonucleic mARN : messenger Acid Ribonucleic IARC : International Agency for Research on Cancer Cơ quan nghiên cứu Quốc tế ung thư CAH : Congenital Adrenal Hyperplasia Tăng sản thượng thận bẩm sinh CDC : Centers for Disease Control and Prevention Trung tâm kiểm soát phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ CLIA : Chemiluminescent Immuno Assay Xét nghiệm miễn dịch hóa phát quang DDI : Daily Dioxin Intake Lượng dioxin tiêu thụ hàng ngày DHEA : Dehydroepiandrosteron DHEA-S : Dehydroepiandrosterone Sulfate DR CALUX : Dioxin Response Chemically Activated Luciferase gene Expression Kỹ thuật cảm biến sinh học tế bào để định lượng dioxin E1 : Estron E2 : Estradiol ECL : Electrode Chemi Luminescence Kỹ thuật điện hóa phát quang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com EGFR : Epidermal Growth Factor Receptor Thụ thể phát triển biểu bì ELISA : Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kỹ thuật miễn dịch enzym FIA : Fluoroimmunoassay Xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang FSH : Follicle-Stimulating Hormone Kích thích tố nang trứng 3β-HSD : 3β hydroxysteroid dehydrogenase 17β-HSD : 17β-hydroxysteroid dehydrogenase HRGC/HRMS : High-resolution gas chromatography/high-resolution mass Hệ thống sắc ký khí khối phổ có độ phân giải cao IL : Interleukin IOM : Institute of Medicine Viện hàn lâm Khoa học Hoa Kỳ LC-MS/MS : Liquid Chromatography–Mass Spectrometry- Mass Spectrometry Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ song song LH : Luteinizing Hormone Kích thích tố thể vàng NIOSH : National Institute for Occupational Safety and Health Viện nghiên cứu Sức khỏe Bảo hộ lao động Hoa Kỳ P450 SCC : Men tách chuỗi bên cholesterol (CYP11A1) P450C11β : 11β- Hydroxylase (CYP11B1) P450C11AS : Aldosteron Synthetase (CYP11B2) P450C17 : 17α-Hydroxylase (CYP17) P450C19β : 11β- Hydroxylase (CYP19A1) P450C21 : 21β- Hydroxylase (CYP21A2) RIA : Radioimmunoassay kỹ thuật miễn dịch phóng xạ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com SECA : The Southern Early Childhood Association TEQ : Toxic Equivalent TEFs : Toxic Equivalency Factor T4 : Thyroxin T3 : Triiodothyronin TCDD : 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-para-dioxin TCDF : 2,3,7,8-tetrachlorodibenzofuran TNF : Tumor Necrosis Factor cytokine thuộc yếu tố gây hoại tử PCBs : Polychlorinate biphenyls PCDD : Polychlorinated dibenzo-para-dioxins PCDFs : Polychlorinated dibenzofuran ppt : parts-per-trillion Một phần nghìn tỷ WHO : World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới U.S EPA : United States Environmental Protection Agency Cơ quan bảo vệ môi trường Hoa Kỳ PGHS-2 : Prostaglandin-Encoperoxide H2 synthase-2 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục chữ viết tắt Mục lục Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Hormon steroid 1.1.1 Đại cương hormon steroid 1.1.2 Các loại hormon steroid 1.1.3 Tổng hợp hormon steroid 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.1.5 Một số phương pháp định lượng hormon steroid 11 1.2 Chất độc da cam/dioxin 17 1.2.1 Cơng thức hóa học 18 1.2.2 Tính chất lý học, hóa học dioxin 19 1.2.3 Các nguồn ô nhiễm 21 1.2.4 Chuyển hóa tiết 22 1.2.5 Cơ chế tác động 24 1.2.6 Lịch sử ô nhiễm dioxin Việt Nam 27 1.2.7 Ảnh hưởng dioxin sức khỏe người 28 1.2.8 Một số phương pháp định lượng dioxin 39 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 Khu vực nghiên cứu 43 2.2 Đối tượng nghiên cứu 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 46 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ 46 2.3 Phương pháp nghiên cứu 46 2.4 Các quy trình kỹ thuật nghiên cứu 46 2.4.1 Quy trình lấy mẫu 46 2.4.2 Kỹ thuật định lượng dioxin sữa 50 2.4.3 Kỹ thuật định lượng hormon steroid kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ kép 52 2.5 Ước tính lượng dioxin hấp thụ hàng ngày trẻ bú sữa mẹ 55 2.6 Địa điểm phân tích 55 2.7 Xử lý số liệu nghiên cứu 56 2.8 Đạo đức nghiên cứu 57 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 58 3.1 Đặc điểm chung 58 3.1.1 Đặc điểm chung mẹ 58 3.1.2 Đặc điểm chung 59 3.2 Nồng độ dioxin sữa mẹ 61 3.3 Nồng độ hormon steroid nước bọt 67 3.3.1 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 67 3.3.2 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ thời điểm sau năm cho bú 70 3.3.3 Nồng độ hormon steroid nước bọt trẻ thời điểm tuổi 73 3.4 Nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ 75 3.4.1 Nồng độ hormon steroid sữa mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 75 3.4.2 Nồng độ hormon steroid huyết mẹ thời điểm sau năm cho bú 77 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.5 Tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết mẹ sau năm cho bú 80 3.6 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid 82 3.6.1 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid nước bọt 82 3.6.2 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ 85 3.7 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt với hormon steroid sữa huyết 87 3.7.1 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ với hormon steroid sữa thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 87 3.7.2 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ với hormon steroid huyết thời điểm sau năm cho bú 88 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 89 4.1 Đặc điểm chung 89 4.1.1 Đặc điểm khu vực nghiên cứu 89 4.1.2 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 90 4.2 Nồng độ dioxin sữa mẹ 92 4.3 Mơ hình đáp ứng liều dioxin hormon steroid 94 4.4 Nồng độ hormon steroid nước bọt 98 4.4.1 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ 98 4.4.2 Nồng độ hormon steroid nước bọt 101 4.4 Nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ 106 4.4.1 Nồng độ hormon steroid sữa mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 106 4.4.2 Nồng độ hormon steroid huyết mẹ thời điểm sau năm cho bú 107 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.5 Tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết người mẹ sau năm cho bú 108 4.6 Mối liên quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid 110 4.7 Mối liên quan nồng độ dioxin sữa mẹ với số thể trẻ 113 4.8 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt với hormon steroid sữa huyết 117 KẾT LUẬN 120 KIẾN NGHỊ 123 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Đặc điểm người mẹ khu vực nghiên cứu 58 Bảng 3.2 Đặc điểm trẻ thời điểm nghiên cứu 59 Bảng 3.3 Cân nặng lúc sinh trẻ Kim Bảng Phù Cát 60 Bảng 3.4 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDDs sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 61 Bảng 3.5 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDFs sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 62 Bảng 3.6 So sánh nồng độ tổng số đồng phân dioxin sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 63 Bảng 3.7 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDDs sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ 64 Bảng 3.8 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDFs sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ 65 Bảng 3.9 So sánh nồng độ tổng số đồng phân dioxin sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ 66 Bảng 3.10 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ Kim Bảng Phù Cát 67 Bảng 3.11 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 68 Bảng 3.12 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 69 Bảng 3.13 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ Kim Bảng Phù Cát 70 Bảng 3.14 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 71 Bảng 3.15 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 72 Bảng 3.16 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt trẻ Kim Bảng Phù Cát 73 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.17 So sánh nồng độ hormon nước bọt trẻ đầu lòng, thứ Kim Bảng Phù Cát 73 Bảng 3.18 So sánh nồng độ hormon nước bọt trẻ trai, trẻ gái Kim Bảng Phù Cát 74 Bảng 3.19 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 75 Bảng 3.20 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 76 Bảng 3.21 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 76 Bảng 3.22 So sánh nồng độ hormon steroid huyết mẹ Kim Bảng Phù Cát 77 Bảng 3.23 So sánh nồng độ hormon steroid huyết người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 78 Bảng 3.24 So sánh nồng độ hormon steroid huyết người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 79 Bảng 3.25 So sánh tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết mẹ Kim Bảng Phù Cát thời điểm sau năm cho bú 80 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Mức độ dioxin sữa mẹ khu vực nghiên cứu 63 Biểu đồ 3.2 Mức độ dioxin sữa người mẹ sinh đầu lòng sinh thứ 66 Biểu đồ 3.3 Nồng độ hormon cortisol (A) cortison (B)của người mẹ Biểu đồ 3.4 Kim Bảng Phù Cát thời điểm 81 Tương quan tổng đồng phân PCDDs+PCDFs với nồng độ cortisol (A) cortison (B) nước bọt người mẹ sinh đầu lòng 82 Biểu đồ 3.5 Tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ cortisol (A) cortison (B) nước bọt mẹ 83 Biểu đồ 3.6 Tương quan nồng độ dioxin sữa mẹ với nồng độ cortisol (A), cortison (B) DHEA (C) nước bọt 84 Biểu đồ 3.7 Tương quan tổng đồng phân PCDDs+PCDFs với nồng độ cortisol (A) cortison (B) sữa mẹ 85 Biểu đồ 3.8 Tương quan nồng độ dioxin sữa mẹ với nồng độ cortisol (A) cortison (B) huyết mẹ 86 Biểu đồ 3.9 Mối tương quan nồng độ cortisol (A), cortisol (B), androstenedion (C) estradiol (D) sữa nước bọt 87 Biểu đồ 3.10 Mối tương quan nồng độ cortisol (A), cortisol (B), DHEA (C), androstenedion (D), estron (E) estradiol (F) huyết nước bọt 88 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc nhân steroid Hình 1.2 Cấu trúc hóa học cortisol Hình 1.3 Sơ đồ tổng hợp hormon steroid Hình 1.4 Cấu trúc hóa học dibenzo-para-dioxin .18 Hình 1.5 Cấu trúc hóa học PCDD 19 Hình 1.6 Hoạt động thụ thể AhR tương tác với dioxin tế bào .24 Hình 1.7 Máy bay Mỹ rải chất da cam xuống lãnh thổ Việt Nam chiến dịch Ranch Hand 27 Hình 1.8 Tập kết chất da cam/dioxin trước đưa phun rải năm từ 1961 – 1972 28 Hình 2.1 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 43 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 45 Hình 2.3 Hình ảnh cân đo số thể trẻ 47 Hình 2.4 Hướng dẫn đo số thể trẻ lớn 49 Hình 2.5 Sơ đồ quy trình phân tích dioxin sữa .50 Hình 2.6 Sơ đồ quy trình phân tích hormon huyết nước bọt 55 Hình 4.1 Sơ đồ tổng hợp steroid hormon 96 Hình 4.2 Mức độ lưu hành DHEA thể 104 Hình 4.3 Ảnh hưởng dioxin enzym CYP17 105 Hình 4.4 Vai trị enzym 11Beta-hydroxysteroid dehydrogenase typ 1của thai 116 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3,24,27,28,62,65,80-87,101 1-2,4-23,25-26,29-61,63-64,66-79,88-100,102-157 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... biệt nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ trẻ em sống khu vực điểm nóng dioxin Việt Nam Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?nghiên cứu thay đổi nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa. .. sữa huyết người sống vùng phơi nhiễm chất da cam/ dioxin Việt Nam? ?? với mục tiêu: Xác định nồng độ dioxin sữa người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Xác định nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ con, sữa. .. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Khu vực nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành khu vực khác Nhóm chủ cứu tiến hành vùng phơi nhiễm chất da cam/ dioxin mức độ cao hay gọi “điểm nóng dioxin? ??’,