Tuyển chọn và xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp cho các chủng bacillus subtilis có khả năng sản sinh bacteriocin hoạt tính cao

BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG Tên đề tài TUYỂN CHỌN VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY THÍCH HỢP CHO CÁC CHỦNG Bacillus subtilis CÓ KHẢ NĂNG SẢN SINH BACTERIOCIN HOẠT TÍNH CAO Mã số đề tài 19 2TP05SV Chủ nhiệm đề tài Đinh Thị Ngọc Ngân Đơn vị thực hiện Viện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm Tp Hồ Chí Minh, 102020 1 LỜI CÁM ƠN Để có được thành công như ngày hôm nay không chỉ là công sức.

BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG Tên đề tài: TUYỂN CHỌN VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN NI CẤY THÍCH HỢP CHO CÁC CHỦNG Bacillus subtilis CĨ KHẢ NĂNG SẢN SINH BACTERIOCIN HOẠT TÍNH CAO Mã số đề tài: 19.2TP05SV Chủ nhiệm đề tài: Đinh Thị Ngọc Ngân Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Tp Hồ Chí Minh, 10/2020 LỜI CÁM ƠN Để có thành cơng ngày hôm không công sức cá nhân mà nhờ vào cố gắng tập thể, bạn bè, anh chị quan trọng hết hỗ trợ tận tình thầy cơ, người đưa đị dẫn lối cho chúng tơi đường tìm kiếm tri thức Trước tiên xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Trường đại học Công nghiệp TP HCM với phòng Quản lý khoa học Hợp tác quốc tế hỗ trợ tạo điều kiện để thực đề tài Chúng tơi cảm ơn đến quý thầy cô viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm tận tình truyền đạt cho tơi kiến thức kỹ chuyên môn, hành trang q giá để tơi tự tin bước vào đời cống hiến cho xã hội Chúng xin chân thành cảm ơn thầy cô Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Ngọc Ẩn dành thời gian quý báu để cố vấn cho lĩnh vực nghiên cứu khoa học Bên cạnh chúng tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Phạm Tấn Việt TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh đồng hành, tạo điều kiện hỗ trợ trình thực đề tài Mặc dù đề tài khơng tránh khỏi thiếu sót, chúng tơi mong nhận ý kiến đóng góp quý báu q thầy giúp đề tài hồn thiện PHẦN I THƠNG TIN CHUNG I Thơng tin tổng quát 1.1 Tên đề tài: Tuyển chọn xác định điều kiện ni cấy thích hợp cho chủng Bacillus subtilis có khả sản sinh bacteriocin hoạt tính cao 1.2 Mã số: 19.2TP05SV 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Họ tên (học hàm, học vị) Đơn vị công tác Vai trò thực đề tài Đinh Thị Ngọc Ngân Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm (Sinh viên) - Khảo sát điều kiện nuôi cấy Bacillus subtilis NN Viết báo cáo Trịnh Tiền Kim Ngân Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm (Sinh viên) Khảo sát điều kiện nuôi cấy Bacillus licheniformis KN Viết báo cáo Nguyễn Phúc Thạnh (Sinh viên) Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm - Phân lập định danh vi khuẩn sinh bacteriocin Kiểm tra khả kháng VSV chủng Bacillus Viết báo cáo 1.4 Đơn vị chủ trì: Viện Cơng nghệ Sinh học vả Thực phẩm trường Đại học Công nghiệp TP HCM 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng 04 năm 2020 1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng 09 năm 2020 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng 09 năm 2020 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): Dựa số thay đổi thực tế sở điều kiện thí nghiệm tình Hình dịch bệnh, chúng tơi có số thay đổi so với thuyết minh ban đầu sau: Thuyết minh ban đầu Aspergillus niger Vi sinh vật đối kháng Nguồn nitrogen pH môi trường ban đầu Thay đổi - Thay bằng: A fumigatus - Bổ sung thêm vi khuẩn: S aureus, S typhi, E coli - Bổ sung thêm nấm mốc: F oxysporum, F equiseti, Aspergillus sp., P chermesinum, N dimidiatum (NH4)2HPO4, NH4H2PO4, - Thay bằng: NH4Cl, NaNO3, tryptone peptone - Bổ sung nồng độ 0.1% - Bổ sung nồng độ 1.0% Thay bằng: 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2 9.0 Nhiệt độ nuôi cấy 36.0℃, 36.5℃, 37.0℃, 37.5℃, 38.0℃ Thời gian nuôi cấy 12h, 24h, 36h, 48h Nồng độ NaCl 3.3%, 3,4%, 3.5%, 3.6%, 3.7% Nhiệt độ bảo quản -40℃, 0℃, 4℃ Thay bằng: 25℃, 28℃, 33℃, 37℃, 45℃ Thay bằng: sau hay giờ, 24 Thay bằng: 0%, 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0% Thay bằng: -60℃, -20℃, 4℃, nhiệt độ phịng (~33℃) 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: triệu đồng II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề Trong năm ngày việc xuất nhiều vi sinh vật đề kháng kháng sinh ngày gia tăng vấn đề báo động toàn giới Theo báo cáo WHO từ năm 2014 đến có triệu người tử vong nhiễm siêu vi khuẩn kháng kháng sinh Các chủng vi khuẩn gây bệnh đa phần kháng thuốc, khoảng 60% ca nhiễm trùng bệnh viện vi khuẩn kháng thuốc nhóm kháng sinh bị kháng Hiện nay, WHO xếp Việt Nam vào nhóm nước kháng sinh bị kháng cao giới mà nguyên nhân đến từ việc lạm dụng mức sử dụng kháng sinh không phù hợp với chứng cho thấy 88-97% cửa hàng bán thuốc kê kháng sinh mà khơng có đơn thuốc bác sĩ [1] [2] Theo nghiên cứu từ bệnh viện Hữu Nghị Việt Tiệp cho thấy E coli Klebsiella spp kháng cephalosporin hệ với tỷ lệ tương đối cao: cefotaxime (52,2%-64,4%) (43,2%-56,7%), kháng ceftazidime (32,3%-53,0%) (39,9%-50,8%), Klebsiella spp kháng imipenem 26,2%-28,1%, kháng meropenem 21,9%-29,6%, đặc biệt xuất chủng Acinetobacter baumannii Pseudomonas aeruginosa đề kháng với tất kháng sinh thử nghiệm [3] Kháng sinh hầu hết sản xuất kháng sinh phổ rộng dùng để ức chế tiêu diệt nhiều loài vi sinh vật gây bệnh việc sử dụng kháng sinh cịn tiêu diệt vi sinh vật sống cộng sinh thể vật chủ (các loài bacteroides sống đại tràng tổng hợp vitamin K cần thiết; vi khuẩn đường ruột giúp chống lại sinh vật gây bệnh), đa số vi sinh vật trở trạng thái tiền xử lí kháng sinh có số khơng thể phục hồi làm ảnh hưởng đến sức khỏe vật chủ [4] Sự khan việc tìm loại kháng sinh thay loại kháng sinh khơng cịn tác dụng chữa trị thúc đẩy cần tìm giải pháp an toàn chẳng hạn bacteriocin hợp chất giống bacteriocin (bacteriocin like substances) [5] Bacteriocin hợp chất giống bacteriocin có số điểm thuận lợi chúng protein peptide sản xuất ribosome nên không giống với kháng sinh, chúng nhạy cảm với protease, có hại với người môi trường xung quanh [6] Bacteriocin ức chế giết chết lồi có quan hệ gần gũi chí khác lồi vơ hại thân vi sinh vật sản xuất chúng có gen giúp chống lại tác động bacteriocin [6] Chính tác dụng có lợi tiềm ứng dụng lớn hợp chất y học chăn nuôi, thủy sản, thực phẩm… nên tiến hành tuyển chọn từ chế phẩm sinh học chủng Bacillus khảo sát điều kiện ni cấy thích hợp cho sản sinh bacteriocin từ chủng vi khuẩn Mục tiêu Xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sản sinh bacteriocin từ chủng Bacillus Với mục tiêu đề tài gồm có nội dung nghiên cứu sau:  Phân lập định danh chủng vi khuẩn Bacillus từ chế phẩm sinh học  Sàng lọc khả kháng khuẩn kháng mốc chủng Bacillus  Khảo sát ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ thời gian nuôi cấy lên khả kháng khuẩn kháng mốc chủng Bacillus  Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường ban đầu lên khả kháng khuẩn kháng mốc chủng Bacillus  Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen lên khả kháng khuẩn kháng mốc chủng Bacillus  Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NaCl lên khả kháng khuẩn kháng mốc chủng Bacillus  Khảo sát nhiệt độ thời gian bảo quản dịch bacteriocin thô Phương pháp nghiên cứu 3.1 Phương pháp phân lập Cân g bột chế phẩm sinh học cho vào môi trường LB broth, nuôi lắc 150 vòng/phút 30 phút 37°C Dùng que cấy nhúng vào ống giống hoạt hóa tiến hành cấy ria đĩa môi trường LB agar nuôi ủ 37°C 24 Chọn khuẩn lạc đặc trưng cấy ria có chủng vi khuẩn khiết Tiến hành giữ giống cho thí nghiệm 3.2 Phương pháp giữ giống Chọn khuẩn lạc riêng lẻ tăng sinh ml môi trường LB, hút 10% giống vào 10 ml môi trường LB ni cấy lắc 150 vịng/phút đến OD600= 0.6-0.8 Sau phân phối vào eppendorf dịch khuẩn glycerol với tỷ lệ 1:1, tiến hành trữ đông -60ºC 3.3 Phương pháp định danh Quan sát đại thể, vi thể Hình thái khuẩn lạc quan sát sau 24 nuôi cấy môi trường thạch LB Tiến hành quan sát đặc điểm khuẩn lạc dựa vào yếu tố: màu sắc, kích thước, bề mặt khuẩn lạc, hình dạng rìa khuẩn lạc [7] Cấu trúc vi thể khuẩn lạc quan sát tiêu nhuộm Gram: (1) Chọn khuẩn lạc đặc trưng (2) Tạo vết bơi cách dùng que cấy lấy vi khuẩn hịa vào giọt nước lam kính sau hơng khơ lửa đèn cồn (3) Nhuộm tiêu theo thứ tự thuốc nhuộm tím kết tinh 60 giây - rửa nước - Lugol 60 giây - rửa nhanh cồn 96° - rửa nước - safranin 60 giây - rửa nước (4) Quan sát ghi nhận Hình ảnh vật kính X100 với dầu Vi khuẩn Bacillus đa số tạo bào tử sau 48 giờ, sau thời gian nuôi ủ chọn khuẩn lạc đặc trưng tiến hành nhuộm bào tử: (1) Chọn khuẩn lạc đặc trưng (2) Tạo vết bôi cách dùng que cấy lấy vi khuẩn hịa vào giọt nước lam kính sau hong khơ lửa đèn cồn (3) Đặt lam kính lên giá đỡ đặt vào nồi nước đun sôi, đặt giấy lọc vệt bôi (4) Nhỏ 2-3 giọt malachite lên để yên 10 phút sau rửa nước cất (5) Nhỏ 2-3 giọt safranin 30 giây, rửa lại nước cất, để khơ (6) Quan sát vật kính X100 ghi nhận Hình ảnh Các phản ứng sinh hóa Thử nghiệm phản ứng sinh hóa: Thử nghiệm indol, VP, amylase, catalase, có khả di động, hiếu khí [7] - Thử nghiệm indol: Vi khuẩn nuôi cấy môi trường canh thang Tryptophan 35-37°C 18-24 giờ, sau thời gian ủ nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Kovac quan sát kết Dương tính xuất vịng đỏ phía dung dịch ni cấy - Thử nghiệm VP: Vi khuẩn nuôi cấy môi trường MR-VP 37°C 24-48 Sau thời gian nuôi ủ lấy ml dịch nuôi cấy cho vào ống nghiệm mới, thêm 0.6 ml dung dịch α-napthol 15% với 0.2 ml KOH 40% Sau 15-20 phút quan sát kết Kết dương tính xuất màu đỏ môi trường - Thử nghiệm tính di động: Cấy vi khuẩn đâm sâu vào mơi trường thạch mềm (0.5% agar) vi khuẩn có tính di động làm môi trường đục, phát triển lan khỏi vệt cấy - Thử nghiệm catalase: Lấy vi khuẩn đặt lên lam kính sạch, nhỏ vài giọt H2O2 30% lên vi khuẩn, quan sát sau - giây Phản ứng dương tính có bọt khí xuất - Kiểm tra hoạt tính amylase: bổ sung vào môi trường LB agar 1% tinh bột, cấy chấm điểm vi khuẩn sau ủ 37°C 24-48 Tiến hành nhỏ lugol vào đĩa thạch, vi khuẩn có khả phân giải amylase xuất vòng phân giải Định danh phương pháp sinh học phân tử Mẫu gửi giải trình tự công ty TNHH Dịch Vụ Thương Mại Nam Khoa Kết giải trình tự xử lí so sánh với sở liệu 16S-rRNA vi khuẩn có sẵn NCBI cơng cụ BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) sử dụng để vẽ phát sinh loài phần mềm Mega version (Tamura, Peterson, Stecher, Nei, and Kumar, 2011) 3.4 Phương pháp thu nhận dịch nuôi cấy Bacillus nuôi tăng sinh môi trường LB broth với tốc độ lắc 150 vòng/phút 24 giờ, sau chia nhỏ dịch huyền phù vào ống eppendorf 1.5 ml, tiến hành ly tâm 14000 vòng/ phút 15 phút 4℃ loại bỏ cặn tế bào Phần dịch sau ly tâm lọc qua màng lọc 0.45 µm điều kiện vơ trùng để loại bỏ phần tế bào cịn sót lại [8] 3.5 Phương pháp khuếch tán giếng thạch Vi khuẩn nuôi cấy qua đêm mơi trường LB broth, sau dịch vi khuẩn pha loãng tương đương với giá trị McFarland 0.5 (≈1.5x108 CFU/ml) để sử dụng làm đối kháng Chuẩn bị đĩa môi trường LB agar (10 ml), hút 100 µl dịch vi khuẩn thị trang bề mặt thạch khô Tiến hành đục giếng với đường kính mm đĩa thạch Hút 50 µl dịch cho vào giếng với giếng 1: dịch nuôi cấy; giếng 2: dung dịch NaCl 0.9% [8] Ủ đĩa nhiệt độ phòng đọc kết sau 12 Khả kháng khuẩn dịch nuôi cấy xác định diện vịng kháng khuẩn xung quanh giếng, đường kính vịng kháng khuẩn tính cơng thức: [8] [9] H= D-d Trong H: Độ lớn vùng kháng khuẩn (mm) D: Đường kính vịng ức chế (mm) d: Đường kính giếng (mm) 3.6 Phương pháp chuẩn bị giống Bacillus từ eppendorf giống hoạt hóa đĩa mơi trường LB agar ủ 37°C 24 Sau thời gian ủ, dùng que cấy tròn lấy khuẩn lạc cho vào bình chứa ml mơi trường LB broth ni lắc 150 vịng/phút, 37°C, qua đêm Tiếp theo dùng micropipette hút 10% giống cho vào bình 20 ml môi trường LB broth tiếp tục nuôi cấy lắc 150 vịng/phút 37°C 12-15 Dịch ni cấy sử dụng làm giống cho thí nghiệm 3.7 Phương pháp khảo sát nhiệt độ thời gian ni cấy thích hợp cho khả sinh bacterocin từ Bacillus Tiến hành môi trường LB broth, dùng micropiptette hút ml dịch vi khuẩn chuẩn bị cho vào bình chứa 20 ml mơi trường ni cấy lắc 150 vịng/phút nhiệt độ khác nhau: 25°C, 28°C, 33°C, 37°C, 45°C Sau nuôi cấy, tiến hành thu dịch xử lí, đánh giá khả kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán giếng để lựa chọn nhiệt độ thời gian mà dịch ni cấy có khả kháng khuẩn mạnh Giá trị nhiệt độ thời gian nuôi cấy sử dụng cho thí nghiệm [9] [10] 3.8 Phương pháp khảo sát giá trị pH thích hợp cho khả sinh bacterocin từ Bacillus Tiến hành môi trường LB broth, dùng micropiptette hút ml dịch nuôi cấy chuẩn bị cho vào bình chứa 20 ml môi trường điều chỉnh với giá trị pH khác nhau: 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0 Các bình ni cấy lắc 150 vịng/phút, nhiệt độ thời gian lựa chọn thí nghiệm trước Sau thời gian nuôi cấy, tiến hành thu dịch đánh giá khả kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán giếng thạch để lựa chọn giá trị pH thích hợp [9] [11] 3.9 Phương pháp khảo sát nguồn nitrogen thích hợp cho khả sinh bacterocin từ Bacillus Tiến hành môi trường MTCB (0.5 g MgSO4.7H2O, g NaH2PO4.2H2O, g Na2HPO4.12H2O) có bổ sung 1% glucose, dùng hút ml dịch nuôi cấy chuẩn bị cho vào bình chứa 20 ml mơi trường với 1% nguồn nitrogen khác (NH4Cl, NH4NO3, NaNO3, peptone, yeast extract, urea) Các bình ni cấy lắc 150 vòng/phút với giá trị pH 7.0, nhiệt độ, thời gian lựa chọn từ thí nghiệm trước Sau thời gian nuôi cấy, tiến hành thu dịch đánh giá khả kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán giếng thạch để lựa chọn nguồn nitrogen thích [9] [11] [12] 3.10 Phương pháp khảo sát nồng độ NaCl thích hợp cho khả sinh bacterocin từ Bacillus Tiến hành môi trường LB broth môi trường (MTCB) (0.5 g MgSO4.7H2O, 3g NaH2PO4.2H2O, g Na2HPO4.12H2O) Dùng micropiptette hút ml dịch ni cấy chuẩn bị cho vào bình chứa 20 ml mơi trường có bổ sung nồng độ NaCl khác (0%, 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0%) Các bình ni cấy lắc 150 vịng/phút với giá trị pH, nhiệt độ, thời gian lựa chọn từ thí nghiệm trước Sau thời gian ni cấy, tiến hành thu dịch đánh giá khả kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán giếng thạch để lựa chọn nồng độ thích hợp [13] 3.11 Phương pháp khảo sát nhiệt độ thời gian bảo quản dịch bacteriocin thô từ chủng Bacillus Dịch bacteriocin thô sau thu nhận bảo quản nhiệt độ khác (-60℃, -20℃, 5℃, nhiệt độ phịng) Hoạt tính kiểm tra phương pháp khuếch tán giếng thạch sau 10 ngày 30 ngày [14] Tổng kết kết nghiên cứu Đề tài nghiên cứu đã: - Phân lập định danh chủng Bacillus từ chế phẩm sinh học - Xác định khả kháng khuẩn, kháng mốc chủng - Xác định điều kiện ni cấy thích hợp cho khả sinh bacteriocin thô chủng Bacillus: thời gian nhiệt độ nuôi cấy, giá trị pH môi trường ban đầu, nguồn nitrogen, nồng độ NaCl - Xác định nhiệt độ thời gian thích hợp để bảo quản bacterioin thô thời gian ngắn Đánh giá kết đạt kết luận Đề tài hoàn thành tốt tất nội dung nghiên cứu đáp ứng mục tiêu nghiên cứu đề Các kết đạt từ đề tài tiền đề có giá trị tham khảo cao cho nghiên cứu sản xuất sau ứng dụng lĩnh vực chăn nuôi, dược phẩm, thực phẩm… Tóm tắt kết (tiếng Việt tiếng Anh) Chi Bacillus vi khuẩn có khả sản sinh nhiều hợp chất kháng khuẩn kháng mốc, có tiềm ứng dụng y học, chăn nuôi thực phẩm Chúng phân lập định danh chủng Bacillus từ chế phẩm sinh học B subtilis NN B lichenifomis KN, có nhiều tiềm ứng dụng tương lai Bằng phương pháp khuếch tán giếng thạch, B subtilis NN chứng minh có khả ức chế Bacillus cereus, Salmonella enteritica subsp enteritica, Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, Penicilium chermesinum, tương tự B licheniformis KN ức chế phát triển B cereus, Salmonella enteritica subsp Enteritica, F oxysporum F equiseti Điều kiện ni cấy thích hợp cho sản sinh bacteriocin thô B subtilis NN 18 nuôi cấy 37℃ môi trường (0.5 g MgSO4.7H2O, g NaH2PO4.2H2O, g Na2HPO4.12H2O) có pH ban đầu 6.0, bổ sung 1% glucose với 1% yeast extract 1% peptone Đối với B licheniformis KN, mơi trường thích hợp LB (5 g/l yeast extract, 10 g/l peptone, 10-15 g/l NaCl) với pH ban đầu 7.0 37C 15 Dịch bacteriocin thu nhận từ B subtilis NN hoạt tính ổn định bảo quản nhiệt độ -20C -60C thời gian 30 ngày, dịch thu nhận từ B licheniformis KN có hoạt tính ổn định bảo quản -20C -60C 10 ngày The Bacillus genus is well-known for the ability of producing antibacterial and antifungal compounds, with applied potential in medical, animal husbandry, aquaculture and food technology In this study, we have successfully isolated and identified two Bacillus strains B subtilis NN and B lichenifomis KN, and shown that these two strains have high potential applications The agar diffusion bioassay was carried out and we have proved that B subtilis NN strain is able to inhibit Bacillus cereus, Salmonella enteritica subsp enteritica, Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, and Penicilium chermesinum while B licheniformis KN is able to inhibit B cereus, Salmonella enteritica subsp Enteritica, F oxysporum and F equiseti Suitable growth condition for bacteriocin production from B subtilis NN was determined at 37C in the medium containing 0.5 g MgSO4.7H2O, g NaH2PO4.2H2O, g Na2HPO4.12H2O supplemented with 1% glucose, 1% yeast extract or 1% peptone, pH 6.0 for 18 hours In the case of B licheniformis KN growth condition was determined at 37C in the medium containing g yeast extract, 10 g peptone, 10-15 g NaCl, pH 7.0 for 15 hours Raw bacteriocin from B subtilis NN is stable at -20C or -60C for at least 30 days, and at least 10 days in the case of B licheniformis KN 10 III Sản phẩm đề tài, công bố kết đào tạo 3.1 Kết nghiên cứu (sản phẩm dạng 1,2,3) TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Đăng ký Đạt Giống vi sinh vật 2 Quy trình ni cấy thu nhận bacteriocin 2 3.2 Kết đào tạo Thời gian TT Họ tên thực đề tài Tên đề tài Tên chuyên đề NCS Tên luận văn Cao học Đã bảo vệ Nghiên cứu sinh Học viên cao học Sinh viên Đại học IV Tình Hình sử dụng kinh phí T T A B Nội dung chi Kinh phí duyệt (triệu đồng) Kinh phí thực (triệu đồng) Ghi Chi phí trực tiếp Th khốn chun mơn Ngun, nhiên vật liệu, Thiết bị, dụng cụ Cơng tác phí Dịch vụ thuê Hội nghị, hội thảo,thù lao nghiệm thu kỳ In ấn, Văn phịng phẩm Chi phí khác Chi phí gián tiếp Quản lý phí Chi phí điện, nước Tổng số 11 V Kiến nghị Bên cạnh việc tìm yếu tố mơi trường thích hợp cho q trình sinh tổng hợp bacteriocin thơ từ B subtilis B licheniformis, chúng tơi có kiến nghị:  Nghiên cứu thêm yếu tố môi trường nuôi cấy thích hợp cho sinh tổng hợp bacteriocin từ chủng nguồn chất khoáng nguồn vitamin  Nghiên cứu phân tích nhằm xác định thành phần hóa học tính chất loại bacteriocin sinh tổng hợp từ chủng Bacillus phương pháp đại SDS-PAGE, HPLC MALDI-TOF từ có ứng dụng cụ thể tương lai VI Phụ lục sản phẩm  Sản phẩm dạng I: Giống vi sinh vật Giống B subtilis NN B licheniformis KN lưu trữ eppendorf chứa glycerol 50% -60C phòng T3.08 12  Sản phẩm II: Quy trình ni cấy thu nhận bacteriocin từ chủng B subtilis (B subtilis NN B licheniformis KN) Chủ nhiệm đề tài Tp HCM, ngày tháng năm (ĐƠN VỊ) Phòng QLKH&HTQT Trưởng (đơn vị) (Họ tên, chữ ký) 13 ... CHUNG I Thơng tin tổng quát 1.1 Tên đề tài: Tuyển chọn xác định điều kiện ni cấy thích hợp cho chủng Bacillus subtilis có khả sản sinh bacteriocin hoạt tính cao 1.2 Mã số: 19.2TP05SV 1.3 Danh sách... kiện ni cấy thích hợp cho sản sinh bacteriocin từ chủng vi khuẩn Mục tiêu Xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sản sinh bacteriocin từ chủng Bacillus Với mục tiêu đề tài gồm có nội dung nghiên... đã: - Phân lập định danh chủng Bacillus từ chế phẩm sinh học - Xác định khả kháng khuẩn, kháng mốc chủng - Xác định điều kiện ni cấy thích hợp cho khả sinh bacteriocin thô chủng Bacillus: thời