Đang tải... (xem toàn văn)
42 4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4 1 Kết luận Trong đề tài này đã định danh được hai chủng vi khuẩn Bacillus có trong chế phẩm và tìm ra được môi trường nuôi cấy thích hợp cho khả năng sinh bacteriocin từ B subtilis NN cụ thể các yếu tố thích hợp là tại thời điểm 18 giờ nuôi cấy ở 33 37°C, pH môi trường ban đầu 6 0 với 1% nguồn nitrogen là peptone hoặc yeast extract và 1% nguồn carbon là glucose Môi trường nuôi cấy thích hợp cho khả năng sinh bacteriocin từ B licheniformis KN cụ thể ở nhiệt độ nuôi ủ.
4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Trong đề tài định danh hai chủng vi khuẩn Bacillus có chế phẩm tìm mơi trường ni cấy thích hợp cho khả sinh bacteriocin từ B subtilis NN cụ thể yếu tố thích hợp thời điểm 18 ni cấy 33-37°C, pH môi trường ban đầu 6.0 với 1% nguồn nitrogen peptone yeast extract 1% nguồn carbon glucose Mơi trường ni cấy thích hợp cho khả sinh bacteriocin từ B licheniformis KN cụ thể nhiệt độ nuôi ủ 37°C thời gian nuôi cấy 15 với giá trị pH ban đầu môi trường 7.0 môi trường LB bổ sung 1.0-1.5% NaCl thu hợp chất có hoạt tính kháng vi sinh vật cao Ngồi đề tài khảo sát nhiệt độ bảo quản thích hợp cho dịch bacteriocin thơ từ B subtilis NN B lichenifofmis KN nhiệt độ -20°C -60°C Tuy đề tài chưa thể xác định cụ thể loại bacteriocin có dịch ni cấy Bacillus subtilis NN B licheniformis KN tiền đề cho nghiên cứu hợp chất cụ thể có dịch ni cấy 4.2 Kiến nghị Bên cạnh việc tìm yếu tố mơi trường thích hợp cho trình sinh tổng hợp bacteriocin từ Bacillus subtilis NN B licheniformis KN, kiến nghị nên có nghiên cứu tối ưu hóa mơi trường với nhiều yếu tố khác chẳng hạn như: ảnh hưởng ion kim loại, ảnh hưởng nguồn vitamin, … để thu hợp chất kháng VSV có hoạt tính cao nhất; kéo dài thêm thời gian bảo quản dịch bacteriocin Ngồi cần có nghiên cứu phân tích SDS-PAGE, HPLC MALDI-TOF nhằm mục đích xác định rõ loại bacteriocin có dịch ni cấy từ có ứng dụng cụ thể tương lai 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] “Kháng Kháng Sinh Việt Nam.” https://www.who.int/vietnam/vi/healthtopics/antimicrobial-resistance [2] N Kiên, “Vi khuẩn kháng thuốc, nước đến chân!,” 2016 http://amr.moh.gov.vn/vikhuan-khang-thuoc-nuoc-da-den-chan/ [3] H T B Ngọc, N T Hằng, T Đức, H Q Cường, and L T Quỳnh, “Tình hình kháng kháng sinh vi khuẩn Gram âm thường gặp phân lập từ bệnh nhân điều trị bệnh viện Hữu Nghị Việt Tiệp, Hải Phịng,” TẠP CHÍ Y HỌC DỰ PHỊNG, vol 29, no 11, p 131, 2019, [Online] Available: http://www.tapchiyhocduphong.vn/tap-chi-y-hocdu-phong/2019/11/tinh-hinh-khang-khang-sinh-cua-vi-khuan-gram-am-thuong-gapphan-lap-tu-benh-nhan-o81E2086D.html [4] B P Willing, S L Russell, and B B Finlay, “Shifting the balance : antibiotic effects on host-microbiota munualism,” Nat Publ Gr., vol 9, no 4, pp 233–243, 2011, doi: 10.1038/nrmicro2536 [5] A D Discovery, “Effective antibacterials: at what cost? The economics of antibacterial resistance and its control,” no June, pp 1948–1953, 2011, doi: 10.1093/jac/dkr260 [6] S C Yang, C H Lin, C T Sung, and J Y Fang, “Antibacterial activities of bacteriocins: Application in foods and pharmaceuticals,” Front Microbiol., vol 5, no MAY, pp 1–10, 2014, doi: 10.3389/fmicb.2014.00241 [7] Đ S Mai, T N Nam, and B H Quân, THỰC HÀNH VI SINH VẬT HỌC [8] E Yang, L Fan, Y Jiang, C Doucette, and S Fillmore, “Antimicrobial activity of bacteriocin-producing lactic acid bacteria isolated from cheeses and yogurts,” AMB Express, vol 2, no pp 1–12, 2012, doi: 10.1186/2191-0855-2-48 [9] Đ T Hiền, “Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp bacteriocin vi khuẩn Bacillus subtilis thử nghiệm khả đối kháng chủng Vibrio spp.,” Tạp chí khoa học đại học Thủ Dầu Một, vol 2, no 37, 2018 [10] C Corvey, T Stein, S Düsterhus, M Karas, and K D Entian, “Activation of subtilin precursors by Bacillus subtilis extracellular serine proteases subtilisin (AprE), WprA, 43 and Vpr,” Biochemical and Biophysical Research Communications, vol 304, no pp 48–54, 2003, doi: 10.1016/S0006-291X(03)00529-1 [11] P T Hương and vũ văn Hạnh, “Lựa chọn điều kiện lên men cho sinh trưởng chủng Bacillus subtilis BSVN15 ứng dụng sản xuất chế phẩm probiotic chăn ni,” Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, vol 16, no 1, pp 167–172, 2018 [12] V K Dung, H T Thủy, and N T Nhân, “Nghiên cứu sản xuất levan từ Bacillus subtilis natto D,” Tạp chí khoa học công nghệ lâm nghiệp, pp 11–18, 2017 [13] E V Pingitore, E M Hebert, F Sesma, and M E Nader-Macías, “Influence of vitamins and osmolites on growth and bacteriocin production by Lactobacillus salivarius CRL 1328 in a chemically defined medium,” Can J Microbiol., vol 55, no 3, pp 304–310, 2009, doi: 10.1139/W08-092 [14] N L Md Sidek, M Halim, J S Tan, S Abbasiliasi, S Mustafa, and A B Ariff, “Stability of bacteriocin-like inhibitory substance (BLIS) produced by pediococcus acidilactici kp10 at different extreme conditions,” Biomed Res Int., vol 2018, 2018, doi: 10.1155/2018/5973484 [15] W L Nicholson, “Roles of Bacillus endospores in the environment,” Cell Mol Life Sci., vol 59, no 3, pp 410–416, 2002, doi: 10.1007/s00018-002-8433-7 [16] J Errington, “Regulation of endospore formation in Bacillus subtilis,” Nat Rev Microbiol., vol 1, no 2, pp 117–126, 2003, doi: 10.1038/nrmicro750 [17] M E Sanders, L Morelli, and T A Tompkins, “Sporeformers as Human Probiotics: Bacillus, Sporolactobacillus, and Brevibacillus,” Compr Rev Food Sci Food Saf., vol 2, no 3, pp 101–110, 2003, doi: 10.1111/j.1541-4337.2003.tb00017.x [18] M A Riley and J E Wertz, “Bacteriocins: Evolution, Ecology, and Application,” Annu Rev Microbiol., vol 56, no 1, pp 117–137, 2002, doi: 10.1146/annurev.micro.56.012302.161024 [19] kenji sonomoto Mami nishie, Jun-ichi nagao, “Antibacterial Peptides ‘Bacteriocin’: An overview of their diverse characteristics and applications,” Biocontrol Sci., vol 17, no 1, pp 1–16, 2012 44 [20] N C K Heng, P A Wescombe, J P Burton, R W Jack, and J R Tagg, “The Diversity of Bacteriocins in Gram-Positive Bacteria,” Bacteriocins, pp 45–92, 2007, doi: 10.1007/978-3-540-36604-1_4 [21] G Bierbaum and H.-G Sahl, “Lantibiotics: Mode of Action, Biosynthesis and Bioengineering,” Curr Pharm Biotechnol., vol 10, no 1, pp 2–18, 2009, doi: 10.2174/138920109787048616 [22] J Nissen-Meyer, P Rogne, C Oppegard, H Haugen, and P Kristiansen, “StructureFunction Relationships of the Non-Lanthionine-Containing Peptide (class II) Bacteriocins Produced by Gram-Positive Bacteria,” Curr Pharm Biotechnol., vol 10, no 1, pp 19–37, 2009, doi: 10.2174/138920109787048661 [23] T Stein, “Bacillus subtilis antibiotics: Structures, syntheses and specific functions,” Mol Microbiol., vol 56, no 4, pp 845–857, 2005, doi: 10.1111/j.13652958.2005.04587.x [24] J Biochem, K Babasaki, T Takao, and Y Shimonishi, “Babasaki K 1985 Subtilosin A.pdf,” vol 98, no 3, pp 585–603, 1985 [25] T S B Clarisse S Compaoré, Dennis S Nielsen, Labia I I Ouoba, “Co-production of surfactin and a novel bacteriocin by Bacillus subtilis subsp subtilis H4 isolated from Bikalga, an African alkaline Hibiscus sabdariffa seeds fermented condiment.” 2013, doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2013.01.013 FOOD [26] S G Lee and H C Chang, “Purification and characterization of mejucin, a new bacteriocin produced by Bacillus subtilis SN7,” LWT - Food Sci Technol., vol 87, pp 8–15, 2018, doi: 10.1016/j.lwt.2017.08.044 [27] P Pattnaik, J K Kaushik, S Grover, and V K Batish, “Purification and characterization of a bacteriocin-like compound (Lichenin) produced anaerobically by Bacillus licheniformis isolated from water buffalo,” J Appl Microbiol., vol 91, no 4, pp 636–645, 2001, doi: 10.1046/j.1365-2672.2001.01429.x [28] L He, W L Chen, and Y Liu, “Production and partial characterization of bacteriocinlike pepitdes by Bacillus licheniformis ZJU12,” Microbiol Res., vol 161, no 4, pp 321–326, 2006, doi: 10.1016/j.micres.2005.12.002 45 [29] A Ansari, A Aman, N N Siddiqui, S Iqbal, and S A Ul Qader, “Bacteriocin (BACIB17): Screening, isolation and production from Bacillus subtilis KIBGE IB-17,” Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol 25, no pp 195–201, 2012 [30] A Alvarez-Ordóđez M Begley, C Kiera, “Investigation of the Antimicrobial Activity of Bacillus licheniformis Strains Isolated from Retail Powdered Infant Milk Formulae,” Probiotics Antimicrob Proteins, vol 6, no 1, pp 32–40, 2014, doi: 10.1007/s12602013-9151-1 [31] X Liu, J Lee, S Jeong, K Cho, “Properties of a bacteriocin produced by Bacillus subtilis EMD4 isolated from Ganjang (Soy sauce),” J Microbiol Biotechnol., vol 25, no 9, pp 1497–1505, 2015, doi: 10.4014/jmb.1502.02037 [32] N Khochamit, S Siripornadulsil, P Sukon, and W Siripornadulsil, “Ac ce p te d t,” Microbiol Res., 2014, doi: 10.1016/j.micres.2014.09.004 [33] A M Asaturova, A I Homyak, N S Tomashevich, “Conditions for the cultivation of new bacillus bacteria being micro bioproduct producers,” J Pure Appl Microbiol., vol 9, no 4, pp 1–8, 2015 [34] K.-H S and W B W Paul De Vos, George M Garrity, Dorothy Jones, Noel R Krieg, Wolfgang Ludwig, Fred A Rainey, Ed., BERGEY’S MANUAL OF Systematic Bacteriology, vol 2009 [35] “Taxomony Browser (Bacillus subtilis group).” https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?id=653685 [36] M S Salkinoja-Salonen, R Vuorio, M A Andersson, “Toxigenic strains of Bacillus licheniformis related to food poisoning,” Appl Environ Microbiol., vol 65, no 10, pp 4637–4645, 1999, doi: 10.1128/AEM.65.10.4637-4645.1999 [37] L Martirani, M Varcamonti, G Naclerio, and M De Felice, “Purification and partial characterization of bacillocin 490, a novel bacteriocin produced by a thermophilic strain of Bacillus licheniformis,” Microb Cell Fact., vol 1, pp 1–5, 2002, doi: 10.1186/14752859-1-1 [38] N Kayalvizhi and P Gunasekaran, “Production and characterization of a low46 molecular-weight bacteriocin from Bacillus licheniformis MKU3,” Lett Appl Microbiol., vol 47, no 6, pp 600–607, 2008, doi: 10.1111/j.1472-765X.2008.02473.x [39] F Cladera-Olivera, G R Caron, and A Brandelli, “Bacteriocin-like substance production by Bacillus licheniformis strain P40,” Lett Appl Microbiol., vol 38, no 4, pp 251–256, 2004, doi: 10.1111/j.1472-765X.2004.01478.x [40] T Anthony, T Rajesh, N Kayalvizhi, and P Gunasekaran, “Influence of medium components and fermentation conditions on the production of bacteriocin(s) by Bacillus licheniformis AnBa9,” Bioresour Technol., vol 100, no 2, pp 872–877, 2009, doi: 10.1016/j.biortech.2008.07.027 [41] D.-H P and D.-O K Sung-Sub Jung1, Jung-I Choi1, Woo-Hong Joo2, Hyun-Hyo Suh3, Ae-Sil Na, Yong-Kweon Cho, Ja-Young Moon, Kwon-Chul Ha, “간장에서 분리한 Bacillus licheniformis가 생산하는 박테리오신의 특성 및 정제,” J Life Sci., vol 19, no 7, pp 994–1002, 2009 47 PHỤ LỤC Phụ lục A Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian nuôi cấy đến khả sinh bacteriocin Bacillus subtilis NN 48 Phụ lục B Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian nuôi cấy đến khả sinh bacteriocin Bacillus licheniformis KN Phụ lục C Ảnh hưởng giá trị pH nuôi cấy đến khả sinh bacteriocin B subtilis NN 49 Phụ lục D Ảnh hưởng giá trị pH nuôi cấy đến khả sinh bacteriocin B licheniformis KN Phụ lục E Ảnh hưởng nguồn nitrogen đến khả sinh bacteriocin B subtilis NN Phụ lục F Ảnh hưởng nguồn nitrogen đến khả sinh bacteriocin B licheniformi KN 50 Phụ lục G Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến khả sinh bacteriocin B subtilis NN Phụ lục H Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến khả sinh bacteriocin B licheniformis KN Phụ lục I Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian bảo quản bacteriocin từ B subtilis NN 51 Phụ lục K Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian bảo quản bacteriocin từ B licheniformis KN 52 PHẦN III PHỤ LỤC ĐÍNH KÈM Hợp đồng thực đề tài nghiên cứu khoa học Thuyết minh đề tài phê duyệt Quyết định nghiệm thu Hồ sơ nghiệm thu (biên họp, phiếu đánh giá, bảng tổng hợp điểm, giải trình, phiếu phản biện) Sản phẩm nghiên cứu (bài báo, vẽ, mơ Hình .) 53 Sản phẩm nghiên cứu Sản phẩm dạng I: Giống vi sinh vật Giống B subtilis NN B licheniformis KN lưu trữ eppendorf chứa glycerol 50% -60C phòng T3.08 54 Sản phẩm II: Quy trình ni cấy thu nhận bacteriocin từ chủng B subtilis (B subtilis NN B licheniformis KN) Thuyết minh quy trình Hoạt hóa giống: giống vi khuẩn hoạt hóa mơi trường LB agar, nuôi ủ 37°C 24 h Kiểm tra độ chủng, sử dụng khuẩn lạc đặc trưng nuôi cấy môi trường LB broth 37°C với tốc độ 150v/p 24 h Nuôi ủ: bổ sung 10% giống vào mơi trường với thành phần thích hợp cho lồi vi khuẩn, ni ủ 33°C (B licheniformis) 37°C (B subtilis) với tốc độ 150v/p 15 h (B licheniformis) 18 h (B subtilis) Thu dịch bacteriocin thô: sau thời gian nuôi ủ, dịch nuôi cấy chia nhỏ vào enppendorf, sau ly tâm 4°C, 13000 v/p 20 phút Phần dịch chia vào eppendorf khác Bảo quản: eppendorf chứa phần dịch bảo quản -20°C -60°C 55 ... đến khả sinh bacteriocin Bacillus subtilis NN 48 Phụ lục B Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian nuôi cấy đến khả sinh bacteriocin Bacillus licheniformis KN Phụ lục C Ảnh hưởng giá trị pH nuôi cấy đến khả. .. vol 56 , no 4, pp 8 45? ?? 857 , 20 05, doi: 10.1111/j.13 652 958 .20 05. 0 458 7.x [24] J Biochem, K Babasaki, T Takao, and Y Shimonishi, “Babasaki K 19 85 Subtilosin A.pdf,” vol 98, no 3, pp 58 5–603, 19 85 [ 25] ... 10.1016/S0006-291X(03)0 052 9-1 [11] P T Hương and vũ văn Hạnh, “Lựa chọn điều kiện lên men cho sinh trưởng chủng Bacillus subtilis BSVN 15 ứng dụng sản xuất chế phẩm probiotic chăn ni,” Tạp chí Cơng nghệ Sinh học,