3 chủng Salmonella đ8 chọn đ−ợc cấy trên môi tr−ờng thạch máu đĩa và thạch MacConkey để giữ giống.
- Giống nhỏ:
Chọn khuẩn lạc điển hình trên thạch đĩa cấy vào môi tr−ờng tripton photphat broth hay BHI lỏng: sau khi bồi d−ỡng 37oC/24 giờ kiểm tra trực tiếp bằng phết kính nhuộm Gram, kiểm tra thuần trên kính hiển vi, ria trên thạch máu, thạch MacConkey. Thạch máu để kiểm tra khuẩn lạc.
- Giống sản xuất:
- Các chủng Salmonella đ−ợc nuôi riêng rẽ trong các bình khác nhau, mỗi bình có 300 ml môi tr−ờng Tripton – photphat - broth hay môi tr−ờng BHI - broth. Sau 14 - 16 giờ nuôi cấy lắc (300 - 500 vòng/phút), đ−ợc tiến hành lấy mẫu để kiểm tra thuần khiết nh− với giống nhỏ.
- Sản xuất bằng bình lên men sục khí:
+ Dùng môi tr−ờng tripton – photphat - broth hay môi tr−ờng BHI - broth: 6 lít, hấp vô trùng, bổ sung huyết thanh ngựa, men thịt và điều chỉnh:
- pH môi tr−ờng: 7,2 - 7,4.
- Tốc độ máy khuấy: 800 – 1000 vòng/phút. - Thời gian nuôi cấy: 8 – 10 giờ.
Kiểm tra: sau 8- 10 giờ lên men, sục khí, lấy mẫu, kiểm tra thuần khiết bằng nhuộm Gram và kiểm tra đậm độ vi khuẩn trong 1 ml canh trùng bằng ph−ơng pháp đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa thạch: canh trùng phải đạt từ 1,8 x
10
10P P/ml (trên 18 tỷ vi khuẩn/1ml canh trùng).
0
Diệt vi khuẩn bằng Formol với tỷ lệ 0,5% vì lên men sục khí số l−ợng vi khuẩn trong 1ml canh trùng trên 18 tỷ vi khuẩn. Để tủ ấm 37P PC trong 24 giờ.
Kiểm tra vô trùng sau khi diệt formol trên các loại môi tr−ờng: n−ớc thịt th−ờng, thạch máu ống, môi tr−ờng yếm khí, môi tr−ờng thạch nấm.