Gene ACE nằm trên nhiễm sắc thể 17, gene này có 20546 bp và gồm 25 exon. Sau quá trình phiên mã và thành thục mRNA, mRNA của ACE có 4195 base và
trực tiếp tổng hợp protein chứa 1306 axit amin. Tính đa hình của ACE I/D thể hiện ở sự có mặt (I – Insertion) hoặc vắng mặt (D – Deletion) của một trình tự lặp lại dài 287 bp trong intron 16. Ngƣời có kiểu gene đồng hợp tử DD có mức độ gene ACE hoạt động cao nhất và thấp nhất là ngƣời có kiểu gene đồng hợp II. Phần lớn các nghiên cứu đều cho thấy gene ACE có ảnh hƣởng tới sức bền và tốc độ của các VĐV. Trong đó alen I đƣợc coi nhƣ là alen có lợi đối với các VĐV thi đấu ở các nội dung đòi hỏi sức bền, còn alen D là alen có lợi cho các VĐV thi đấu ở các môn đòi hỏi tốc độ (Ian, 2006). Để phân biệt alen I và alen D chúng tôi đã đƣa ra phƣơng án thiết kế các cặp mồi cho phản ứng PCR theo các yêu cầu sau: (1) đoạn khuếch đại có chứa vùng trình tự lặp lại dài 287 bp nằm trong intron 16; (2) kích thƣớc sản phẩm PCR phù hợp cho việc xác định 2 alen bằng điện di trên gel agarose; (3) hiệu suất của phản ứng PCR cao; (4) sản phẩm PCR khuếch đại đƣợc là sản phẩm đặc hiệu. Theo những tiêu chí trên và dựa vào dữ liệu đã đƣợc công bố
54 trên ngân hàng gene quốc tế (NC_000017, GeneBank), chúng tôi đã thiết kế một số cặp mồi nhƣ đƣợc trình bày tại bảng 2.1.
Qua các thí nghiệm tối ƣu, chúng tôi lựa chọn đƣợc cặp mồi phù hợp nhất cho mục đích nghiên cứu của đề tài là cặp mồi ACE-F và ACE-R2. Theo đó, với việc sử dụng cặp mồi này, chúng tôi sẽ khuếch đại đƣợc một đoạn trình tự dài 253 bp đối với alen D và 522 bp với alen I. Từ đó sẽ dễ dàng phân biệt đƣợc 3 kiểu gene ACE I/D là II; ID và DD bằng điện di trên gel agarose: (1) kiểu gene II, điện di trên gel agarose sẽ cho 1 băng, có kích thƣớc 522 bp; (2) kiểu gene ID, cho 2 băng, với kích thƣớc tƣơng ứng của alen I và alen D là 522 và 253 bp; (3) kiểu gene DD, cho 1 băng, kích thƣớc 253 bp. Dƣới đây là một số kết quả khuếch đại gene ACE bằng cặp mồi ACE-F và ACE-R2 mà chúng tôi đã thu đƣợc (Hình 3.3).
(Giếng M: Marker 1kb; Giếng ký hiệu K: mẫu vận động viên bộ môn chạy; Giếng ký hiệu B: mẫu vận động viên bộ môn bơi lội. Giếng (-): đối chứng âm)
Phân tích kết quả điện di hình 3.3 cho thấy đoạn DNA đƣợc khuếch đại có kích thƣớc tƣơng ứng với tính toán lý thuyết khi sử dụng cặp mồi ACE-F và ACE-R2. Các băng điện di rõ nét, không xuất hiện các sản phẩm phụ, khoảng cách giữa 2 băng đủ lớn, do vậy các kiểu gene II, ID và DD dễ dàng đƣợc phân biệt nhờ vào số lƣợng băng điện di xuất hiện và kích thƣớc của băng điện di. Nhƣ vậy, chúng tôi đã thiết kế đƣợc cặp mồi và tối ƣu hóa thành công phản ứng PCR để khuếch đại đoạn gene ACE I/D.
55 Quy trình thí nghiệm này đƣợc chúng tôi thực hiện lần lƣợt để xác định kiểu gene ACE I/D cho tất cả các mẫu của các đối tƣợng nghiên cứu mà chúng tôi đã thu thập, kết quả thu đƣợc đƣợc trình bày tại bảng sau (Bảng 3.1, 3.2 và 3.3):
Bảng 3. 1. Kết quả xác định kiểu gene ACE I/D của các VĐV điền kinh
STT Ký hiệu mẫu
Họ và tên VĐV Nội dung thi đấu của VĐV Kiểu gene
1 K1 Đỗ Thị Thảo 800 m; 1500 m II
2 K2 Dƣơng Văn Thái 800 m; 1500 m ID
3 K3 Ngô Đăng Thanh 800 m; 1500 m DD
4 K4 Vũ Thị Ly 800 m; 1500 m II
5 K5 Nguyễn Văn Lý 1500 m; 3000 m ID
6 K6 Phạm Tiến Sản 1500 m; 3000 m ID
7 K7 Trƣơng Thanh Hằng 800 m; 1500 m ID
8 K8 Nguyễn Đặng Thanh Thúy 3000 m; 5000 m; 10000 m ID 9 K9 Phạm Thị Bình 10000 m; 21000 m; 42195m ID 10 K10 Nguyễn Thị Thanh Phúc 5000 m; 10000 m; 20000 m II 11 K11 Phan Thị Bích Hà 10000 m; 20000 m ID 12 K12 Nguyễn Thành Ngƣng 10000 m; 20000 m DD 13 K13 Võ Xuân Vĩnh 10000 m; 20000 m II 14 K14 Nguyễn Văn Đức 800 m; 1500 m II 15 K15 Hoàng Văn Dũng 1000 m; 1500 m II 16 K16 Lê Viết An 1000 m; 1500 m II 17 K17 Nguyễn Hoa Ri 800 m; 1500 m II
18 K18 Trƣơng Thị Thúy Kiều 800 m; 1500 m; 3000 m; 5000 m ID 19 K19 Trần Thị Thắm 800 m; 1500 m; 5000 m II 20 K20 Nguyễn Tuấn Trị 800 m; 1500 m; 3000 m II 21 K21 Quách Thị Lan 400 m; 400 m rào; 200 m ID
22 K22 Phạm Thị Diễm Nhảy cao DD
23 K23 Quách Công Lịch 400 m ID
24 K24 Lê Trọng Hinh 100 m; 400 m ID
25 K25 Nguyễn Văn Công Nhảy xa; 200 m II
26 K26 Nguyễn Văn Lai 5000 m, 10000 m DD
27 K27 Nguyễn Thị Oanh 100 m; 400 m; 400 m rào DD 28 K28 Nguyễn Thị Oanh 1500 m; 2000 m CNV; 3000 m
56
29 K29 Lê Trọng Giang 3000 m CNV; 5000 m II
30 K30 Nguyễn văn Mùa Nhảy xa II
31 K31 Nguyễn Thị Huyền 400 m rào DD
32 K32 Vũ Thùy Trang 400 m; 200 m II
33 K33 Đào Xuân Cƣờng 400 m rào; 4x400 m II (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
34 K34 NguyễnThịThúy 100 m; 200 m; 400 m II
35 K35 Đào Văn Thủy Nhảy cao DD
36 K36 Nguyễn Anh Tú 400 m rào; Tiếp sức 400 m II
37 K37 Nguyễn Ngọc Quang 100 m rào ID
38 K38 Trần Thị Mai 1000 m; 1500 m; 3000 m DD 39 K39 Lê Văn Thao 1500 m; 5000 m; 10000 m II
40 K40 Nguyễn Thị Hằng 400 m; 400 m rào ID
41 K41 Bùi Văn Đông Nhảy xa; Nhảy 3 bƣớc; 100 m ID
42 K42 Hoàng Văn Duy 400 m DD
43 K43 Hồ Xuân Tâm 400 m; 4x400 m tiếp sức II
44 K44 Đinh Văn Tùng 400 m II
45 K45 Trần Thanh Bình Nhảy cao II
46 K46 Nguyễn Thị Quỳnh Nhảy cao ID
47 K47 Vũ Thị Mến Nhảy xa; Chạy tiếp sức 4x100 m DD
48 K48 ĐàoThị Kim Oanh Nhảy xa; Nhảy cao ID
49 K49 Nguyễn Thị Mộng Mơ Nhảy xa; Nhảy cao ID 50 K50 Nguyễn Trƣờng Giang Điền kinh; ném lao II 51 K51 Dƣơng Thị Việt Anh Điền kinh; nhảy cao II 52 K52 Vũ Thị Hƣơng Điền kinh 100 m; 200 m II 53 K53 Nguyễn Thị Ngọc Thắm Điền kinh 4*100 m; 100 m II
54 K54 Trần Huệ Hoa Nhảy 3 bƣớc ID
Bảng 3. 2. Kết quả xác định kiểu gene ACE I/D của các VĐV Bơi lội
STT
Ký hiệu mẫu
Họ và tên VĐV Nội dung thi đấu của VĐV Kiểu gene
1 B1 Hoàng Quý Phƣớc 100 m E; 100 m TD II
2 B2 Nguyễn Văn Đạt 50 m B; 50 m S; 100 m S II
3 B3 Dƣơng Thị Thơm 100 m N ID
4 B4 Lê Thị Việt Trinh 50 m E; 100 m E; 200 m E II 5 B5 Ngân Thị Nhiên 50 m E; 100 m E; 200 m E ID
57
6 B6 Nguyễn Ngọc Triển 100 m N; 200 m N II
7 B7 Nguyễn Duy Thiện 50 m B; 100 m B; 50 m S ID
8 B8 Vũ Tấn Thành 50 m TD; 100 mTD II
9 B9 Lê Thị Hà My 50 m E; 100 m E; 200 m E ID 10 B10 Phạm Thị Yến 50 m N; 100 m N; 200 m N II 11 B11 Nguyễn Thị Kiều Oanh 50 m B; 100 m S DD
12 B12 Nguyễn Thị Hiền 50 m S; 100 m S ID (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
13 B13 Bùi Thị Thùy Dƣơng 50 m E; 100 m E; 200 m E II
14 B14 Phạm Đắc Thiên 50 m TD; 100 m TD II
15 B15 Nguyễn Văn Huỳnh 50 m N; 100 m N; 200 m N ID
16 B16 Trần Đức Tài 50 m E; 100 m E II
17 B17 Trần Văn Triệu 100 m N; 200 m N DD
18 B18 Ngô Thu Hà 100 m B; 100 m S ID
19 B19 Nguyễn Thị Ngọc Yến 100 m N; 200 m N, 50 m TD II
20 B20 Nguyễn Hữu Việt 50 E; 100E; 200E ID
21 B21 Lê Thị Mỹ Thảo 400 TD; 800 TD; 1500 TD; 50 B II 22 B22 Nguyễn Thị Diệu Linh 50 TD; 100 TD II 23 B23 Nguyễn Thị Ngọc Hân 50 E; 100 E; 200 E II
24 B24 Mai Thị Linh 50 E; 100 E; 200 E II
25 B25 Nguyễn Thị Trang 50 E; 100 E; 200 E II 26 B27 Nguyễn ngọc Huynh 50 B; 100 B; 200 B ID 27 B28 Vũ Tấn Thành 50 TD; 100 TD; 200 TD II
28 B29 Lƣơng Văn Triệu 50 N; 100 N DD
29 B30 Trần Tấn Triệu 400 TD; 800 TD; 1500 TD; II
30 B31 Nguyễn Hiếu Nghĩa 400 TD; 1500 TD ID
31 B32 Đỗ Văn Hiếu 50 B; 100 B; 200 B ID
32 B33 Bùi Phƣơng Nam 50 N; 100 N; 200 N ID
33 B34 Nguyễn Huy Hoàng 50 N; 100 N; 200 N ID
34 B35 Mai Thị Phƣợng 100 m; 4*100 m ID
Bảng 3. 3. Kết quả xác định kiểu gene ACE I/D của các mẫu đối chứng
STT mẫu KH Họ và tên Giới tính Kiểu gene STT KH mẫu Họ và tên Giới tính Kiểu gene
1 D1 Trần T. Thu Quỳnh Nữ II 21 D21 Phạm Hoàng Khánh Nam ID 2 D2 Võ Thị Phƣơng Nữ II 22 D22 Nguyễn Thị Thu Thủy Nữ II 3 D3 Kiều Trung Kiên Nam II 23 D23 Phan Quỳnh Lê Nữ ID 4 D4 Nguyễn Khánh Toàn Nam II 24 D24 Nghiêm T. Hồng Ngát Nữ II
58 5 D5 Hà Ngọc Linh Nam II 25 D25 Nguyễn T. Huyền Trang Nữ II 6 D6 Trần Kiều Anh Nữ ID 26 D26 Lê Tuấn Anh Nam ID 7 D7 Nguyễn Văn Hoàn Nam ID 27 D27 Phạm Thị Ngọc Hà Nữ II 8 D8 Dƣơng Văn Cƣờng Nam II 28 D28 Phạm Hồng Quỳnh Anh Nữ ID 9 D9 Ngô Thị Hoa Diệp Nữ II 29 D29 Nguyễn Huy Bồng Nam II 10 D10 Quách Thị Trà My Nữ II 30 D30 Nguyễn Thị Thảo Nữ II 11 D11 Bùi Thị Năm Nữ II 31 D31 Trần Thị Tuyết Mai Nữ ID 12 D12 Trần Duy Thanh Nam ID 32 D32 Tạ Phƣơng Đông Nam II 13 D13 Nguyễn Danh Tuân Nam II 33 D33 Vũ Anh Công Nam DD 14 D14 Lê Trà My Nữ ID 34 D34 Nguyễn Đình Tuấn Nam II 15 D15 Đào Hƣơng Ly Nữ II 35 D35 Ngô Thị Ngọc Nữ ID 16 D16 Nguyễn Thành Luân Nam II 36 D36 Trần Hồng Hoa Nữ ID 17 D17 Đặng T. Hoài Thanh Nữ ID 37 D37 Phạm Thị Nhàn Nữ ID 18 D18 Nguyễn T. P. Anh Nữ ID 38 D38 Nguyễn Thị Thủy Nữ ID 19 D19 Nguyễn Thị Thắm Nữ ID 39 D39 Trần Thị Huyền Nữ ID 20 D20 Nguyễn Việt Dũng Nam ID 40 D40 Nguyễn Thị Quyên Nữ ID