3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.10. Phương pháp phân tắch
3.3.10.1. Phương pháp xác ựịnh ựộ ẩm
độ ẩm ựược xác ựịnh theo TCVN 4326-2001 về thức ăn chăn nuôi - Xác ựịnh ựộ ẩm và hàm lượng chất bay hơi khác do Bộ Khoa học Công nghệ và Môi trường ban hành [4].
Nội dung: độ ẩm ựược xác ựịnh trên cơ sở khối lượng nước mất ựi trong quá trình sấy và ựược biểu thị bằng phần trăm khối lượng mẫu khi ựưa vào thử.
Tiến hành: (ựối với thức ăn dạng bột ,ngũ cốc, các loại hạt)
- Mẫu lấy về trộn ựều và nghiền nhỏ. Lấy hộp lồng cho vào tủ sấy, sấy khô rồi cân chắnh xác ựến 0,5mg, cân 2-5g mẫu ựã nghiền nhỏ vào hộp lồng với ựộ chắnh xác 1mg. đặt hộp chứa mẫu ựã cân vào tủ sấy ựã ổn ựịnh nhiệt ở 1030C sấy khô trong 2-5h kể từ lúc nhiệt ựộ của tủ ựạt 1030C, ựậy nắp hộp lồng lại lấy ra khỏi tủ, ựể nguội trong bình hút ẩm ựến nhiệt ựộ phòng trong khoảng 15- 20 phút rồi cân hộp lồng với ựộ chắnh xác ựến 1mg. Làm khô mẫu thử them 30 phút trong tủ sấy ựã ổn ựịnh nhiệt ở 1030C ựể nguội ựến nhiệt ựộ phòng và cân khối lượng. Chênh lệch giữa 2 lần cân không quá 5mg là ựược.
- Thức tắnh kết quả:
M Ờ m X(%) =
M x100
Trong ựó:
M: khối lượng ban ựầu. m: khối lượng mẫu sau sấy X: ựộ ẩm
3.3.10.2. Phương pháp xác ựịnh hàm lượng protein thô
Hàm lượng protein thô ựược xác ựịnh theo TCVN 4328:2001(ISO 6496:1999) Thức ăn chăn nuôi - Xác ựịnh hàm lượng nitơ và tắnh hàm lượng protein thô- Phương pháp Kjeldahl [5].
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 35
Nội dung: Vô cơ hóa chất hữu cơ bằng axit sunfuric với sự có mặt của chất xúc tác tạo thành ammonium sulphat theo phản ứng:
Protein + H2SO4 →( NH4)2SO4
Tiến hành:
+ Pha hóa chất :
- Cân 400g NaOH pha thành 1lắt ựược dung dịch NaOH 40%.
- Cân 400g axit boric 4% pha 6l nước, ựun nóng cho tan hoàn toàn, sau ựó ựể nguội, thêm 70ml methyl red 0.1N và 100ml bromocresol green 0.1N, thêm nước cất ựể vừa ựủ 10 l
-Công thức:
Trong ựó: V1: Thể tắch HCl 0,1N dùng ựể chuẩn ựộ mẫu trắng làm ựược(ml) : thể tắch HCl 0,1N dùng ựể chuẩn ựộ mẫu trắng(ml)
M: khối lượng mẫu(g)
3.3.10.3. Phương pháp xác ựịnh hàm lượng chất béo thô
Hàm lượng chất béo thô ựược xá ựịnh theo TCVN 4331:2001 (ISO 6492:1999) Thức ăn chăn nuôi. Xác ựịnh hàm lượng chất béo [6].
Nội dung của phương pháp :
Tiêu chuẩn này áp dụng cho tất cả các loại thức ăn chăn nuôi và nguyên liệu sản xuất thức ăn chăn nuôi.
Chất béo thô bao gồm những chất tan ựược trong dung môi hữu cơ như: các chất béo, các phophatit, sterit, tinh dầu, các sắc tố.
Dùng dung môi hữu cơ chiết rút chất béo trong mẫu thử sau ựó xác ựịnh khối lượng của chất béo.
*Chuẩn bị mẫu:
Mẫu ựược nghiền nhỏ qua sàng 1mm bằng máy nghiền. Trộn ựều mẫu trước khi phân tắch.
*Cân mẫu: Cân 1g mẫu (W0) vào ống thimble bằng cân phân tắch và ựưa ống vào máy.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 36
*Chuẩn bị cốc chiết: cốc ựược ựánh dấu từ 1-6. Sấy khô trong tủ sấy và cho vào bình hút ẩm. để nguội rồi cân khối lượng cốc (W1).
*Chiết
Cho cốc vào máy chiết mẫu theo ba bước sau:
1. Imersion: nhúng mẫu vào dung dịch Ete petroleum 30-60. đặt thời gian chiết là 30 phút.
2. Washing: Nhấc mẫu lên khỏi dung dịch ete, ựặt thời gian rửa là 60 phút. 3. Recover: ựặt thời gian là 15 phút ựể thu hồi toàn bộ dung dịch ete trong cốc.
*Sấy
Cho cốc vào tủ sấy ở nhiệt ựộ 100oC trong 1.5 giờ.Chuyển vào bình hút ẩm, ựể nguội, cân khối lượng cốc (W2)
Tắnh kết quả:
(W2- W1)*100 %Béo =
W0
3.3.10.4. Phương pháp xác ựịnh Aflatoxin B1
Hàm lượng afltoxin B1 ựược xác ựịnh theo TCVN 6953:2001. Thức ăn chăn nuôi Ờ Xác ựịnh hàm lượng aflatoxin B1 trong thức ăn hỗn hợp Ờ Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao [7].
Aflatoxin là ựộc tố vi nấm sản sinh tự nhiên bởi một số loài Aspergillus, là
một loại nấm mốc,ựáng chú ý nhất là Aspergillus flavus và Aspergillus parasiticus. Aflatoxin là ựộc tố và là tác nhân gây ung thư. Sau khi thâm nhập vào cơ thể, các aflatoxin có thể ựược gan chuyển hóa thành dạng trung gian epoxit hoạt hóa hoặc ựược thuỷ phân và trở thành M1 ắt ựộc hơn.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 37
Nguyên tắc:
Mẫu thử ựược chiết bằng hỗn hợp acetonitril và nước.Mẫu chiết ựược lọc qua Multisept column 226 các aflatoxin ựược tách, làm sạch và cô ựặc. Các aflatoxin trong mẫu phân chia và ựược ựịnh lượng bằng hệ thống HPLC, với ựầu dò Detector huỳnh quang (FLD).