3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.3. Phương pháp phân lập nấm
Các loại nấm quan trọng sẽ ựược phân lập thuần nhằm ựánh giá ựặc ựiểm hình thái và làm nguồn cho các thắ nghiệm phòng trừ.
Mẫu nấm ựược phân lập từ TACN D42 sử dụng môi trường WA (water agar) và PDA (Potato dextrose agar).
+ Cách chế tạo môi trường WA (Agar: 20 g và Nước: 1000 ml). đun tan agar trong 800 mL nước. Bổ xung nước cho ựủ 1000 ml. Hấp khử trùng ở 121oC /20 phút. để nguội 50-55 0C trước khi rót ra ựĩa petri.
+ Cách chế tạo môi trường PDA (Khoai tây: 200g, Dextrose (D-glucose): 20g, Agar: 20g và Nước: 1000ml). Khoai tây rửa sạch, cắt lát, ựun trong nước 1 giờ. Lọc qua vải lọc, bổ sung agar vào dịch lọc, ựun cho tan agar. Bổ xung nước cho ựủ 1000 ml. Hấp khử trùng ở 1210C /20 phút. để nguội 50-550C trước khi rót ra ựĩa petri.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 23
Trình tự phân lập nấm
Chuẩn bị:
* Dao mổ, kéo, panh, que cấy nấm
* đèn cồn, giấy thấy thấm vô trùng, ựĩa môi trường * Hoá chất khử trùng: Cồn (ethanol) 70%.
Tiến hành:
*Khử trùng bề mặt cám trong dung dịch khử trùng bề mặt bằng Ethanol 700, NaOCl hoặc Ca(OCl)2 1-2 %.
* Rửa lại nhanh bằng nước cất vô trùng
* Thấm khô viên cám bằng giấy thấm vô trùng
Dùng panh vô trùng ựặt các viên cám có nhiễm nấm vào môi trường thạch WA (5 Ờ 10 viên / ựĩa). Phân phối cho các viên thức ăn cách ựều nhau. để mẫu trong ựiều kiện nhiệt ựộ ( 25- 300C), ánh sáng thắch hợp. Theo dõi sự phát triển của sợi nấm mọc ra từ mô bệnh. Khi nấm ựã phát triển từ mô bệnh ra môi trường, lấy phần ựỉnh sợi nấm chuyển sang môi trường PDA.