3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.6. Phương pháp bố trắ thắ nghiệm ựánh giá hiệu quả sử dụng chế
Moldtex trong phòng chống nấm trên môi trường PDA và trên TACN D42
3.3.6.1. Khảo sát hiệu quả của chế phẩm Moldtex ựến sự phát triển của nấm Aspergillus flavus trên môi trường PDA
Loài nấm phân lập ựược từ mẫu TACN lợn D42 bị nhiễm nấm có tần suất nhiễm cao nhất ựược sử dụng ựể ựánh giá hiệu quả của chế phẩm Moldtex ựến sự phát triển của nấm trên môi trường PDA.
Thắ nghiệm sử dụng chế phẩm Moldtex (sản phẩm của công ty TNHH Linqtex) có nồng ựộ khuyến cáo là 500 Ờ 1000 ppb. Sử dụng 5 công thức ựể nghiên cứu, mỗi công thức ựược tương ứng với các nồng ựộ Moldtex là:
- CT1: 0 ppm (công thức ựối chứng) - CT2: 2000 ppm
- CT3: 3000 ppm - CT4: 4000 ppm - CT5: 5000 ppm
Chuẩn bị môi trường PDA (Khoai tây: 200g, Dextrose (D-glucose): Khoai tây rửa sạch, cắt hạt lựu, ựun trong nước 1giờ. Lọc qua vải lọc, bổ sung agar vào dịch lọc, ựun cho tan agar. Bổ sung nước cho ựủ 1000 ml. Hấp khử trùng ở 1210C /20 phút. Trong thời gian thanh trùng, ta chuẩn bị chế phẩm Moldtex với các nồng ựộ khác nhau ựể cho vào môi trường.
Khi nhiệt ựộ của môi trường ựạt 50-550C thì ta bổ sung chế phẩm Moldtex với các nồng ựộ (theo các công thức trên) vào, khuấy ựều ựể cho chế phẩm tan hết trong môi trường. Sau ựó ựổ môi trường ra ựĩa petri và ựậy nắp lại. Khi môi trường ựã nguội, ta lấy nguồn nấm thuần Aspergillus flavus cấy trên môi trường PDA ựã
pha chế phẩm. Mỗi thắ nghiệm làm lại 3 lần, mỗi lần làm 3 ựĩa petri. Còn mẫu ựối chứng ta cấy nấm thuần trên môi trường PDA không xử lý chế phẩm.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 28
Dùng que cấy sau khi ựã khử trùng trên ngọn lửa ựèn cồn, lấy nguồn nấm thuần tại mép tản nấm ựang phát triển (khoảng 2 - 3 ngày), ựặt vào giữa ựĩa môi trường có chứa thuốc. Các ựĩa môi trường ựể trong tủ ấm ở nhiệt ựộ, ánh sáng thắch hợp. Theo dõi mỗi ngày bằng cách ựo 2 ựường kắnh tản nấm (vuông góc với nhau) của mỗi ựĩa.
-Chỉ tiêu theo dõi: Khả năng phòng trừ nấm hại của chế phẩm Moldtex ựược ựánh giá sau 4 ngày nuôi cấy :
+ Màu sắc của tản nấm trên môi trường. + Kắch thước của tản nấm trên môi trường
+ Số lượng tản nấm trên môi trường ựã xử lý hóa chất
3.4.6.2. Khảo sát hiệu quả của chế phẩm Moldtex ựến sự phát triển của nấm Aspergillus flavus trên TACN lợn D42.
để nghiên cứu ựánh giá hiệu quả của chế phẩm Moldtex trong phòng chống nấm trên TACN lợn D42, các thắ nghiệm cụ thể ựược bố trắ tương ứng như sau: xử lý chế phẩm vào TACN, xử lý chế phẩm ựối với TACN sau khi nhiễm bào tử nấm
Aspergillus flavus, xử lý chế phẩm ựối với TACN trước khi nhiễm bào tử nấm
Aspergillus flavus.
* TN1: Xử lý chế phẩm vào TACN (không lây nhiễm nấm Aspergillus flavus)
Thức ăn chăn nuôi sau khi sản xuất
Theo dõi sau 7 ngày Thức ăn ựã xử lý
(15- 20s)
Nhận xét, ựánh giá Chế phẩm Moldtex
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 29
Thức ăn chăn nuôi sau khi sản xuất xong ựược xử lý chế phẩm theo các nồng ựộ khác nhau. Thắ nghiệm ựược bố trắ theo các công thức như sau:
- CT6: 0 ppm (công thức ựối chứng, không xử lý chế phẩm) - CT7: 500 ppm
- CT8: 750 ppm - CT9: 1000 ppm
TACN D42 ựược xử lý chế phẩm với các nồng ựộ ở các công thức là khác nhau (15- 20s). đảm bảo cho TACN không bị tan, sau khi xử lý các viên TACN ựược vớt ra và ựể khô tự nhiên ở nhiệt ựộ phòng. Khi các viên TACN ựã ựược phơi khô. Tiếp theo, TACN ựược sấy hoặc phơi khô ựảm bảo ựộ ẩm tiêu chuẩn 13%. Sau khi xử lý chế phẩm và làm khô, tất cả các viên TACN ựược kiểm tra nấm bệnh theo phương pháp giấy thấm. Mỗi công thức gồm 100 viên ựược nhắc lại 3 lần.
Mức ựộ nhiễm bệnh trên TACN D42 ựược ựánh giá gồm: + Số tản nấm Aspergillus flavus
+ Kắch thước tản nấm + Loại nấm
Tổng số hạt cần thắ nghiệm :
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 30
* TN2: Xử lý chế phẩm ựối với TACN sau khi nhiễm bào tử nấm Aspergillus flavus (hiệu quả chống nấm)
TACN sau khi sản xuất ựược lây nhiễm nhân tạo với nấm Aspergillus flavus
Các viên TACN ở tất cả các công thức ựược lây nhiễm bằng cách nhúng vào dung dịch bào tử nấm (nồng ựộ 108CFU/ml). Sau khi nhúng, vớt các viên TACN ra ngoài và ựể khô ở nhiệt ựộ phòng .Tiếp theo, ta xử lý bằng chế phẩm Moldtex theo các công thức với các nồng ựộ khác nhau (15- 20s).
- CT10: 0 ppm (công thức ựối chứng, không xử lý hóa chất) - CT11: 500 ppm
- CT12: 750 ppm - CT13: 1000ppm
đảm bảo cho TACN không bị tan, các viên TACN ựược vớt ra và ựể khô tự nhiên ở nhiệt ựộ phòng. Tiếp theo, TACN ựược sấy hoặc phơi khô ựảm bảo ựộ ẩm tiêu chuẩn 13%. Sau khi xử lý chế phẩm và làm khô, tất cả các viên TACN ựược
Thức ăn chăn nuôi
Thức ăn ựã xử lý (15- 20s) đặt ẩm trên giấy thấm Bảo quản Nhận xét, ựánh giá Thức ăn bị nhiễm nấm Bào tử nấm Aspergillusflavus Chế phẩm Moldtex
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 31
kiểm tra nấm bệnh theo phương pháp giấy thấm. Mỗi công thức gồm 100 viên ựược nhắc lại 3 lần.
Mức ựộ nhiễm bệnh trên TACN D42 ựược ựánh giá gồm: + Số tản nấm Aspergillus flavus
+ Kắch thước tản nấm + Loại nấm
Tổng số hạt cần thắ nghiệm :
100 hạt x 4CT x 3 lần nhắc lại = 1200 viên
* TN3: Xử lý chế phẩm ựối với TACN trước khi nhiễm bào tử nấm Aspergillus flavus (hiệu quả phòng nấm)
TACN D42 sau khi sản xuất xong ựược xử lý chế phẩm Moldtex với các nồng ựộ khác nhau ở các công thức như sau:
- CT14: 0 ppm (Công thức ựối chứng , không xử lý chế phẩm) - CT15: 500 ppm
- CT16: 750 ppm
Thức ăn chăn nuôi
Theo dõi sau 7 ngày Thức ăn ựã xử lý (15- 20s) Nhận xét, ựánh giá Chế phẩm Moldtex Bào tử nấm Aspergillusflavus
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 32
- CT17: 1000 ppm
TACN ựược xử lý chế phẩm với các nồng ựộ ở các công thức là khác nhau (15- 20s). đảm bảo cho viên TACN không bị tan, sau khi xử lý các viên TACN ựược vớt ra và ựể khô tự nhiên ở nhiệt ựộ phòng. Tiếp theo,tất cả các viên TACN ở tất cả các công thức ựược lây nhiễm nhân tạo với nấm Aspergillus flavus. Các viên TACN lây nhiễm bằng cách nhúng vào dung dịch bào tử nấm (nồng ựộ 108CFU/ml). Sau khi nhúng, vớt các viên TACN ra ngoài và ựể khô ở nhiệt ựộ phòng .
Khi các viên TACN ựã ựược phơi khô, ựem sấy hoặc phơi khô ựến ựộ ẩm tiêu chuẩn 13%. Sau khi xử lý chế phẩm và làm khô, tất cả các viên TACN ựược kiểm tra nấm bệnh theo phương pháp giấy thấm. Mỗi công thức gồm 100 viên ựược nhắc lại 3 lần.
Mức ựộ nhiễm bệnh trên TACN D42 ựược ựánh giá gồm: + Số tản nấm Aspergillus flavus
+ Kắch thước tản nấm + Loại nấm
Tổng số hạt cần thắ nghiệm :
100 hạt x 4CT x 3 lần nhắc lại = 1200 viên
Ở tất cả các công thức thắ nghiệm tắnh tỉ lệ nhiễm (TLN) và ựánh giá hiệu quả phòng trừ của hóa chất và chế phẩm vi sinh như sau:
Tổng số viên nhiễm ở mỗi công thức TLN ( %) =
Tổng số viên nhiễm ở mỗi công thức thắ nghiệm x100 Xác ựịnh hiệu quả của chế phẩm vi sinh trong phòng nấm ựược tắnh theo công thức Abbott :
Trong ựó:
Ca : Tỉ lệ hạt nhiễm ở công thức ựối chứng (%) Ta : Tỉ lệ hạt nhiễm ở công thức thắ nghiệm (%)
Ca Ờ Ta HQPT(%) =
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 33