3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.2. Phương pháp xác ựịnh thành phần nấm hại trên TACN
Giám ựịnh nấm hại TACN theo tài liệu giám ựịnh bệnh hại của Viện nghiên cứu Bệnh hại hạt giống đan Mạch ( Mathur et al., 2001) kiểm tra nấm bệnh tồn tại trên TACN bằng phương pháp giấy thấm.
Phương pháp chia mẫu: Mẫu TACN lấy về ựược trải ựều trên mặt phẳng theo hình vuông. Chia mặt phẳng thành 2 ựường chéo ựều nhau. Lấy mỗi phần một lượng viên nhất ựịnh sau ựó trộn ựều sao cho ựủ lượng mẫu kiểm tra. Lượng mẫu kiểm tra 400 viên.
- Lấy 400 viên/ 1 mẫu, chia thành 40 phần, mỗi phần 10 viên. - Chuẩn bị ựĩa Petri và giấy thấm.
+ đĩa Petri ựã ựược hấp khử trùng mỗi ựĩa ựặt 10 viên. + Giấy thấm trong hộp ựược khử trùng .
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 22
+ Lấy 3 tờ giấy thấm, nhúng vào nước cất sao cho toàn bộ giấy ựược thấm ướt ựều, sau ựó ựặt vào hộp Petri ( 3 tờ / hộp).
Cách ựặt : Khử trùng bề mặt : nhúng viên TACN vào dung dịch NaOCl 1% từ 15-20s, sau nhúng lại bằng nước cất vô trùng. đặt 10 viên/ ựĩa Petri, ựặt thành 2 vòng ngoài cùng 9 viên, 1 viên ở trung tâm của ựĩa. Sau khi ựặt xong phải ghi mã số mẫu, ngày ựặt và ngày kiểm tra trên mặt ựĩa, ựem toàn bộ số ựĩa ựã ựặt TACN ựể trong phòng nuôi cấy ựảm bảo 12 giờ sáng, 12 giờ tối ở nhiệt ựộ 25-300C. Sau 7 ngày kiểm tra mẫu, ựem kiểm tra kỹ từng viên dưới kắnh hiển vi soi nổi, khi phát hiện thấy nấm ở trên ựó tiến hành dùng kim khêu nấm ựặt trên lam kắnh ựể kiểm tra dưới kắnh hiển vi quang học.
Chỉ tiêu theo dõi tắnh tổng số viên TACN bị nhiễm bệnh trên tổng số viên, kiểm tra ựánh giá mức ựộ phổ biến của bệnh theo thang 4 cấp sau:
+ : Tỷ lệ viên nhiễm nấm < 5%
++ : Tỷ lệ viên nhiễm nấm từ 5% - 15% +++ : Tỷ lệ viên nhiễm nấm từ 15 Ờ 25% ++++ : Tỷ lệ viên nhiễm nấm ≥ 30%