Tách chiết plasmid từ vi khuẩn

Một phần của tài liệu Tạo bào tử Bacillus Subtilis biểu hiện Streptavidin gắn kháng thể Biotinyl hóa kháng virus gây bệnh đốm trắng ở tôm (Trang 32)

Quy trình tách plasmid bằng kit tinh sạch plasmid của hãng Bioneer được tiến hành gồm các bước sau:

5-10 ml dịch nuôi cấy đƣợc ly tâm ở 8000 vòng/phút trong 10 phút ở 40C để loại bỏ hoàn toàn dịch nổi và thu lấy tủ a tế bào . Tiếp đó, 250 μl đệm RS đƣợc bổ sung để hòa tủa. Hỗn hợp đƣợc tiếp tục bổ sung 250 μl đệm BL rồi trô ̣n đều bằng cách đảo ống nhẹ nhàng 3-4 lần. Hỗn hợp phản ứng đƣợc ủ ở nhiệt độ phòng cho tới khi di ̣ch trở nên trong . Ở bƣớc tiếp theo, 350 μl đệm NE đƣợc thêm vào, ống đƣợc đảo nhẹ nhàng ngay sau đó 3-4 lần. Ống tiếp tục đƣợc ly tâm ở 40

13000 vòng/phút trong 10 phút. Dịch trong thu đƣợc đƣợc chuyển lên cột gắn ADN và ly tâm trong 1 phút với tốc độ 13000 vòng/phút. Dịch qua cột đƣợc loại bỏ rồi thêm tiếp 500 μl đệm DE vào cột và ủ 5 phút ở nhiệt độ phòng. Cột sau đó đƣợc đem ly tâm trong 1 phút ở 13000 vòng/phút để loại bỏ dịch qua cột. Tiếp đó, 700 μl đệm WP đƣợc bổ sung vào cột rồi đem ly tâm với tốc độ 13000 vòng/phút ở 40C trong 1 phút. Dịch qua đƣợc loại bỏ và tiếp tục ly tâm với tốc độ trên trong 1 phút để loại đệm hoàn toàn. Cuối cùng, cột đƣợc chuyển sang một ống 1,5 ml mới và bổ sung 50-100 μl đệm EL vào. Cột đƣợc đem ly tâm với tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút để thu lấy dịch qua cột chứa plasmid. Dịch thu đƣợc đƣợc bảo quản ở -200C.

Một phần của tài liệu Tạo bào tử Bacillus Subtilis biểu hiện Streptavidin gắn kháng thể Biotinyl hóa kháng virus gây bệnh đốm trắng ở tôm (Trang 32)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(72 trang)