Các phƣơng pháp phát hiện virus gây bệnh đốm trắng ở tôm

Một phần của tài liệu Tạo bào tử Bacillus Subtilis biểu hiện Streptavidin gắn kháng thể Biotinyl hóa kháng virus gây bệnh đốm trắng ở tôm (Trang 26)

1.3.3.1. Phƣơng pháp PCR và Real-time PCR

Hiện nay, trên thị trƣờng có bán khá nhiều các bộ kit xét nghiệm WSSV dựa trên phản ứng PCR có nguồn gốc từ nƣớc ngoài nhƣ Shrimp WSSV Detection Test Kit của hãng Bioo Scientific (Mỹ) hay FAST TARGET™ WSSV Detection Kit System của Malaysia. Tại Việt Nam, bộ kit xét nghiệm WSSV bằng phƣơng pháp PCR đã đƣợc một số đơn vị nghiên cứu thành công nhƣ Trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên – Thành phố Hồ Chí Minh, Viện Công Nghệ Sinh học, Công ty Công nghệ sinh học Nam Khoa. Các bộ hóa chất này đã đƣợc thƣơng mại rộng rãi. Gần đây, Công ty Công nghệ sinh học Nam Khoa còn cho ra đời sản phẩm mới là Real-

time PCR WSSV test, với sản phẩm này kết quả xét nghiệm cho phép tính toán đƣợc lƣợng virus có trong mẫu tôm bệnh.

1.3.3.2. Phƣơng pháp hóa mô miễn dịch IHC

Với phƣơng pháp này, mẫu tôm phải đƣợc cố định ít nhất 48-72 giờ trong các dung dịch hóa chất trƣớc khi đƣợc đúc và cắt mẫu theo phƣơng pháp mô học. Các lát cắt sau đó đƣợc xử lý tiếp và cuối cũng là đƣợc soi dƣới kinh hiển vi quang học để xác định tế bào bị nhiễm WSSV.

1.3.3.3. Que thử nhanh WSSV

Do phƣơng pháp PCR và hóa mô miễn dịch đều là những phƣơng pháp chỉ có thể đƣợc thực hiện trong các phòng thí nghiệm đƣợc trang bị hiện đại và mất nhiều thời gian do phải trải qua nhiều công đoạn nhƣ nghiền, tách ADN từ mẫu, thời gian cho phản ứng PCR (riêng phƣơng pháp hóa mô miễn dịch phải mất tới 3-4 ngày). Do vậy, hai phƣơng pháp xét nghiệm WSSV này chỉ thích hợp dùng trong các đơn vị nhƣ Trung tâm Khuyến Ngƣ và Chi Cục thú y các tỉnh, các phòng thí nghiệm hiện đại mà có rất nhiều bất lợi đối với ngƣời nuôi trồng tôm.

Nhằm khắc phục nhƣợc điểm của hai phƣơng pháp nói trên, những dạng que thử nhanh WSSV theo nguyên lý của phƣơng pháp miễn dịch đã đƣợc ra đời. Với phƣơng pháp mới này, ngƣời nuôi tôm có thể tự thực hiện xét nghiệm mầm bệnh WSSV ngay tại nơi chọn mua con giống hoặc kiểm tra mầm bệnh WSSV tại ao nuôi khi tôm có các dấu hiệu bất thƣờng. Việc xét nghiệm thực hiện đơn giản và không đòi hỏi trang bị bất kỳ một thiết bị nào. Mẫu tôm cần xét nghiệm sẽ đƣợc nghiền trong một ống nhỏ có chứa dung dịch cần thiết, sau đó một ít dịch nghiền đƣợc hút và cho vào một đầu que thử rồi chờ vài phút để xem kết quả. Tuy nhiên, việc sử dụng que thử này gây khá nhiều bất lợi cho ngƣời nuôi tôm, chủ yếu là do giá thành khá cao, khoảng 10 USD/test và kết quả dƣơng tính giả vẫn xảy ra trong nhiều trƣờng hợp.

Một phần của tài liệu Tạo bào tử Bacillus Subtilis biểu hiện Streptavidin gắn kháng thể Biotinyl hóa kháng virus gây bệnh đốm trắng ở tôm (Trang 26)