II- TÁCH CHIẾT RUTIN:
IV.1: Khảo sát quá trình tổng hợp Pentaacetyl Quercetin:
Lấy 0,06g Quercetin tinh và V ml pyridin cho vào bình cầu hịa tan, sau đĩ cho vào thêm 0,15 ml anhydric acetic, dung dịch được khuấy trong 2 giờ và tiếp tục để yên trong T (giờ). Lấy dung dịch này đem đổ vào hỗn hợp nước đá cĩ khuấy đều rồi để yên cho sản phẩm kết tinh xuống. Lọc và rửa lại thật sạch với nước lạnh trên phễu lọc Buchner. Sản phẩm thu được đem sấy ở 800C đến khối lượng khơng đổi, thu và cân Pentaacetyl Quercetin thơ.
Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tổng hợp:
- Thời gian phản ứng : 10, 12, 14, 16 và 18 giờ.
- Lượng dung mơi tham gia phản ứng : 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 ml pyridin.
- Nhiệt độ phản ứng : 30, 40, 50, 60, 70oC.
Sau khi khảo sát từng yếu tố, chọn ra thơng số phù hợp nhất.Thơng số đĩ được sử dụng để tiếp tục khảo sát các yếu tố sau.
IV.2: Tinh chế và định lượng Pentaacetyl Quercetin:
IV.2.1: Kết tinh lại trong acetone + ethanol:
Cân 0.5 gam Pentaacetyl Quercetin thơ, hịa tan trong 20 ml acetone. Đun sơi và khuấy nhẹ bằng khuấy từ cho đến khi tan hồn tồn. Lọc nĩng dung dịch bằng giấy lọc. Cho vào một ít ethanol rồi để yên cho tinh thể kết tinh. Lọc áp suất thấp để thu tinh thể Pentaacetyl Quercetin và sấy khơ ở 80oC. Đem cân
IV.2.2: Định lượng Pentaacetyl Quercetin:
Mẫu Pentaacetyl Quercetin được tinh chế nhiều lần bằng cồn được dùng như Pentaacetyl Quercetin chuẩn.
Cân 0,0250 g Pentaacetyl Quercetin chuẩn, pha với methanol thành 25ml (dung dịch C). Dung dịch C cĩ nồng độ 1000 ppm. Từ dung dịch C ta pha thành dung dịch C’ cĩ nồng độ 100 ppm. Từ C’ ta tiếp tục pha các dung dịch cĩ nồng độ 10, 15, 25, 50, 75 để lập đường chuẩn.
Mẫu Pentaacetyl Quercetin thu được ở điều kiện tối ưu và kết tinh lại trong hỗn hợp acetone + ethanol được đem kiểm tra. Cân m(g) Pentaacetyl Quercetin, pha thành 50 ml (M3). Hút 1 ml, pha thành 25 ml (M’3).
Các dung dịch đều được pha chính xác trong bình định mức bằng dung mơi methanol. Các dung dịch để đo đường chuẩn và dung dịch M’3 được đo trên máy UV/Vis Spectrometer V-530 tại Viện Cơng nghệ Hĩa học.