II. Các vector sử dụng để chuyển gen vào thực vật
1.Các vector biến nạp vào tế bào thực vật sử dụng
ra một loại dinh dưỡng đặc biệt giúp cho vi khuẩn phát triển.
Hình 3.1: Bệnh khối u hình chóp ở cây Hình 3.2: Khối u hình chóp ở cành táo.
mâm xôi do A.tumefaciens gây ra.
Vi khuẩn Agrobacterium là sinh sản trong đất, gram âm, cùng họ với
Rhizobium. Agrobacterium tumefaciens tạo ra khối u trong tế bào chưa được phân hóa và chưa được tổ chức. Một vài dòng của Agrobacterium tumefaciens không tạo khối u nhưng kích thích sự tăng trưởng của teratomas (thể dị thường, khác thường).Tuy nhiên thực vật thuộc đơn tử diệp tỏ ra kháng đối với Agrobacterium, chỉ trừ một vài loài của Asparagus.
Hình 3.3. Vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens.
a: Dưới kính hiển vi điện tử.
GVHD : Cô Lê Thị Thủy Tiên. 29
Đặc điểm quan trọng của tế bào khối u là tăng trưởng không cần chất điều hòa sinh trưởng thực vật trong môi trường nuôi cấy mô. Điều này ngược lại với tế bào cây bình thường là cần phải bổ sung auxin, cytokinin để duy trì sự tăng trưởng và sự sống trong nuôi cấy. Những khối u này là không gian sống của vi khuẩn, một số chất dinh dưỡng (opine) có lợi cho vi khuẩn được tạo ra, đây cũng chính là đặc tính của tế bào khối u. Trong mô bình thường không có hình thành nhóm hóa học này. Những opine phổ biến là nopalin và octopin. Nopalin được tạo nên từ arginine và - ketoglutaraldehyd, còn octopin được tạo nên từ amino acid là arginine và pyruvate.
GVHD : Cô Lê Thị Thủy Tiên. 30
Khả năng chuyển DNA của Agrobacterium tumefaciens được sử dụng trong công nghệ gen hiện đại. Để được quá trình này điều cần thiết là phải làm rõ sự tương tác giữa Agrobacterium với thực vật.
Hình 3.5: Sơ đồ cấu trúc tế bào vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens