Mẫu dịch sinh học là đối tƣợng mẫu phức tạp, cần phải xử lý mẫu trƣớc khi định lƣợng. Thông thƣờng có 3 phƣơng pháp xử lý mẫu dịch sinh học đó là phƣơng pháp tạo kết tủa, phƣơng pháp chiết lỏng - lỏng và phƣơng pháp chiết pha rắn (lỏng - rắn). Tùy thuộc vào đối tƣợng nghiên cứu, điều kiện phòng thí nghiệm mà lựa chọn cách xử lý mẫu cho phù hợp [14, 62].
24
Qua tổng quan tài liệu [75], nicardipin là thuốc điều chỉnh huyết áp, có công thức cấu tạo tƣơng tự nhƣ nifedipin, ngƣời ta đã xác định nicardipin trong mẫu nƣớc tiểu bằng phƣơng pháp AdSV, trƣớc khi cho vào đo, mẫu nƣớc tiểu đƣợc xử lý bằng phƣơng pháp kết tủa bởi ZnSO4 trong môi trƣờng kiềm.
Nhóm tác giả Ozatin, Yardimci, Ceren [79] đã xử lý mẫu huyết tƣơng để xác định nifedipin theo quy trình: Bơm nifedipin chuẩn vào 1ml mẫu huyết tƣơng của ngƣời không uống thuốc (không có nifedipin) thêm 0,1ml Na2S2O5và 0,2 ml NaOH 1M vào hỗn hợp dung dịch, lắc 30s. Thêm 5ml n-hexan - diclometan (7/3: v/v), lắc 1 phút, sau đó li tâm 10 phút với tốc độ 3000rpm, lớp hữu cơ đƣợc chuyển vào ống và làm bay hơi dƣới dòng nitơ, sau đó phần còn lại đƣợc hòa tan bằng 0,5ml metanol: nƣớc (1:2), thêm chất điện li, định mức dung dịch và cho vào bình điện phân và tiến hành đo bằng phƣơng pháp von-ampe hòa tan. Hiệu suất thu hồi khi bơm nifedipin vào trong mẫu huyết tƣơng đạt từ 96,26 % đến 99,49%.
Hiện nay, kỹ thuật chiết pha rắn (SPE) hay đƣợc sử dụng để tách và làm giàu chất phân tích [12, 102, 111]. Đối với mẫu sinh hóa nhƣ mẫu nƣớc tiểu và mẫu huyết tƣơng thì cột chiết đƣợc sử dụng trong quá trình tách thƣờng là cột C-18 (pha tĩnh) [52], pha động thƣờng là các dung môi hữu cơ nhƣ metanol, acetonitril - metanol, aceton. Theo tài liệu [16, 33, 71], nifedipin sau khi đi qua cột C-18 đƣợc rửa giải bằng aceton, loại aceton bằng dòng khí nitơ.
Qua tham khảo tài liệu chƣa tìm thấy quy trình xử lý mẫu nƣớc tiểu để xác định amlodipin besylat và cephalexin bằng phƣơng pháp von-ampe hòa tan hấp phụ. Tuy nhiên, dựa vào các tài liệu về sắc ký thấy rằng cephalexin đƣợc tách trong cột sắc ký C-18 với thành phần pha động là acetonitril - metanol - đệm acetat hoặc acetonitril - metanol - dung dịch kalidyhidrophotphat - nƣớc. Đây là cơ sở để tiến hành khảo sát các điều kiện khi xử lý mẫu theo phƣơng pháp chiết pha rắn.
Một số kết luận rút ra từ phần tổng quan:
Hai dòng thuốc tim mạch (nifedipin, amlodipin besylat) và kháng sinh họ cephalosporin (cephalexin thế hệ 1) là những thuốc đƣợc sử dụng khá phổ biến ở nƣớc ta. Các phƣơng pháp đƣợc sử dụng để định lƣợng chúng có thể đƣợc áp dụng
25
là nhóm phƣơng pháp sắc ký, phƣơng pháp trắc quang và phƣơng pháp điện hóa (phƣơng pháp cực phổ, phƣơng pháp von-ampe hòa tan). Phƣơng pháp thƣờng quy đƣợc đề cập trong dƣợc điển để định lƣợng các hoạt chất trên là sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), riêng nifedipin khi định lƣợng thuốc dạng bào chế có thể sử dụng phƣơng pháp chuẩn độ. Tuy nhiên, đối với mẫu dịch sinh học, hàm lƣợng thuốc trong đó là rất nhỏ thì phƣơng pháp chuẩn độ và phƣơng pháp trắc quang không thể áp dụng đƣợc, trong khi đó phƣơng pháp HPLC thì cần thiết bị tƣơng đối đắt tiền, chi phí cho quá trình phân tích cao. Vì vậy, việc nghiên cứu các điều kiện điện hóa để định lƣợng chúng bằng phƣơng pháp von-ampe hòa tan có ý nghĩa khoa học và thực tiễn góp phần đa dạng hóa phƣơng pháp, có thể kiểm tra song hành với phƣơng pháp thƣờng quy trong dƣợc điển.
Trên thế giới, các thuốc trên đã đƣợc nghiên cứu và xác định bằng phƣơng pháp cực phổ, phƣơng pháp von-ampe hòa tan, tuy nhiên các đặc tính hấp phụ chƣa đƣợc lý giải, đối tƣợng áp dụng chủ yếu là mẫu thuốc dạng bào chế hay dạng viên nén. Ở Việt nam, chƣa có công trình nào nghiên cứu tính chất điện hóa của ba hoạt chất trên bằng phƣơng pháp von-ampe hòa tan hấp phụ. Chính vì vậy, việc nghiên cứu tính chất điện hóa và ứng dụng trong phân tích là cần thiết và có ý nghĩa.
26
CHƢƠNG 2: NÔI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU