VII. CÁC KỸ THUẬT DI TRUYỀN ĐƯỢC ÁP DỤNG ĐỂ XÁC ĐỊNH CÂY CHUỂN GEN
2.1.3.Các môi trường nuôi cấy mô
Môi trường nuôi cấy mô được sử dụng dựa theo công thức của một số môi trường cơ bản và có bổ sung các chất kích thích sinh trưởng với nồng độ khác nhau tùy vào mục đích thí nghiệm.
• Môi trường tạo callus từ hạt (T)
T1: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 2mg/l 2,4D
T2: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 2mg/l 2,4D + 1mg/l BAP
T3: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 3,0mg/l 2,4D
pH = 5,8
• Môi trường nhân callus (N)
N1: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 1mg/l BAP
N2: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 2mg/l BAP + 1mg/l ABA
N3: N6 + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 560mg/l proline + 300mg/l casein + 2mg/l 2,4D
• Môi trường tái sinh chồi từ callus sau biến nạp (TS)
TS1: MS + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 10% nước dừa + 0,5 mg/l NAA + 1,5 mg/l BAP
TS2: MS + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 10% nước dừa + 0,5 mg/l NAA + 2,0 mg/l BAP
+ 2,5 mg/l BAP
TS4: MS + 30g/l saccarose + 8g/l agar + 10% nước dừa + 0,5 mg/l NAA + 3,0 mg/l BAP
pH = 5,8
• Môi trường nhân chồi (NC)
MS +30g/l saccarose + 8g/l agar + 15% nước dừa + 0,5 mg/l Kinetin + 1 mg/l BAP
• Môi trường tạo rễ (TR)
MS1: 1/2MS + 20g/l saccarose + 8g/l agar + 0,5 mg/l NAA • Môi trườmg nuôi cấy vi khuẩn (LB – Luria Bertani)
Bactotryptone 10g/l Yeast extract 5g/l
NaCl 10g/l pH = 7
Môi trường đặc thêm 15g/l agar