2 Phƣơng pháp phân tích hóa học
2.1. Định lƣợng Nitơ tổng số theo phƣơng pháp Kjeldahl
Nguyên lý:
Để xác định đạm trong thực phẩm ngƣời ta dung H2SO4 đậm đặc và chất xúc tác đặc biệt là CuSO4 và K2SO4 theo tỷ lệ 1/10 hoặc 1/3 để vô cơ hóa mục đích để chuyển toàn bộ đạm trong thực phẩm về dạng muối (NH4)2SO4. Sau đó dùng NaOH đẩy NH3 ra, dùng hơi nƣớc lôi cuốn NH3 ra khỏi thiết bị chƣng cất vào cốc hứng chứa H2SO4 0.1N chuẩn độ lại H2SO4 dƣ.
Các phản ứng: (NH4)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O 2NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4 NaOH + H2SO4dƣ Na2SO4 + 2H2O Cách tiến hành NH2 COOH Xt, t°c R1 – CH – CO – NH – CH – R2 + H2SO4 (NH4)2SO4 + CO2 + H2S + SO2
- lấy chính xác 1g mẫu cho cẩn thận vào bình kjeldahl, thêm 2g hỗn hợp chất xúc tác (CuSO4/ K2SO4) và 10ml H2SO4 đậm đặc để nghiêng trên bếp đun từ từ. Trong quá trình vô cơ hóa màu sắc của mẫu chuyển từ màu nâu đen sang màu vàng rồi xanh trong hoặc không màu là đƣợc.
- Rửa thiết bị chƣng cất: Tiến hành sục rửa thiết bị chƣng cất và kiểm tra các khớp nối phải đảm bảo độ kín.
- Chuẩn bị cốc hứng: Cho vào cốc hứng 10ml dung dịch H2SO4 0.1N và vài giọt metyl đỏ, đặt cốc hứng ngập dƣới đầu ống sinh hàn của thiết bị chƣng cất. Sau đó cho mẫu đã vô cơ hóa vào bình cầu chứa mẫu, thêm vài giọt phenolphtalein và cho từ từ dung dịch NaOH 40% cho tới khi có màu hồng đậy kín các khớp nối và tiến hành chƣng cất lôi cuốn hơi nƣớc. Định lƣợng trực tiếp NH3 bay ra bằng H2SO4 0.1N dƣ có trong cốc hứng dùng NaOH 0.1N chuẩn độ lại lƣợng H2SO4 dƣ đó
Tính kết quả:
Hàm lƣợng đạm toàn phần theo phần trăm:
tp
Trong đó:
A: là số ml d2
H2SO4 0.1N dùng trong cốc hứng. B: là số ml d2 NaOH 0.1N dùng trong chuẩn độ. P: là trọng lượng mẫu
0.0014: là số gam Nitơ tương ứng với 1ml d2 H2SO4 0.1N