Tiến hành khảo sát khả năng liên kết cacbohydrate của lectin với một số loại đường và glycoprotein dựa theo [30] được liệt kê trong bảng 2.2
Bảng 2.2: Khảo sát khả năng liên kết cacbohydrate của lectin với một số loại đường và glycoprotein Đường (100 mM) Glycoprotein (2000 µg/ml) D- glucose D- mannose Transferrin Fetuin Yeast mannan Bovine thyroglobulin Porcine stomach mucin
Tiến hành
( Yêu cầu: đưa hoạt tính của dịch mẫu về 23)
- Sử dụng khay 96 giếng đáy chữ V. Cho 25 µl NaCl 0,85% vào các giếng. - Cho 25 µl dung dịch đường hoặc glycoprotein vào giếng số 1 và số 2, rồi
pha loãng 2 lần theo từng hàng bắt đầu từ giếng số 2.
- Cho 25 µl dung dịch lectin vào mỗi giếng. Lắc nhẹ và giữ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ.
- Sau 1 giờ, cho 25 µl huyền phù hồng cầu thỏ đã xử lý trypsin vào mỗi giếng. Lắc nhẹ, giữ ở nhiệt độ phòng. Sau 2 giờ, đọc kết quả.
Đọc kết quả
- Nếu hoạt độ NKHC của lectin không thay đổi: lectin không có khả năng liên kết với đường hoặc glycoprotein được kiểm tra.
- Nếu hoạt độ NKHC của lectin giảm: lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein được kiểm tra. Nồng độ nhỏ nhất của đường (mM) hoặc glycoprotein (µg/ml) mà tại đó hiện tượng NKHC do lectin gây ra bị ức chế hoàn toàn (nghĩa là lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein kiểm tra), được tính theo công thức:
Cmin = C/ HI
Trong đó: Cmin: Nồng độ nhỏ nhất của đường (mM) hoặc glycoprotein (µg/ml) mà tại đó hiện tượng NKHC do lecti gây ra bị ức chế hoàn toàn.
C: Nồng độ đường (mM) hoặc glycoprotein (µg/ml).
HI: Giá trị nồng độ pha loãng mà tại đó hoạt độ NKHC vẫn còn bị ức chế, sau khi lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein.