Các phương pháp thu nhận lectin

Một phần của tài liệu Nghiên cứu tính chất hóa lý và đặc tính sinh học của lectin chiết từ lá tỏi (Allium sativum L.) (Trang 30)

Lectin có bản chất là protein hay glycoprotein dễ tan trong nước nên việc chiết xuất lectin ra khỏi các mô động vật, thực vật hay vi sinh vật có thể thực hiện dễ dàng bằng cách dùng các dung dịch muối loãng hoặc các dung dịch đệm chứa muối làm dung môi chiết xuất. Tùy theo tính chất của mỗi loại lectin người ta có thể sử dụng các dung môi chiết xuất khác nhau như dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,9%; CaCl2 0,1 M; dung dịch đệm PBS, đệm Tris-HCl, ethanol…[11], [25].

 Kỹ thuật kết tủa bằng muối trung tính

Phần lớn lectin bị kết tủa bởi một số muối trung tính ở nồng độ cao và có thể được hòa tan trở lại. Các muối thường dùng để kết tủa protein là muối cation hóa trị I, anion đa hóa trị như: (NH4)2SO4, Na2SO4… Các protein khác nhau được kết tủa ở những nồng độ bão hòa khác nhau. Người ta sử dụng phương pháp này trong các quy trình chiết xuất lectin để cô đặc dung dịch protein cần tách.

Độ hòa tan của protein trong các dung môi khác nhau phụ thuộc vào sự tương tác của các nhóm tích điện trong phân tử protein với các phân tử nước (sự phân bố các gốc có tính ưa nước kỵ nước trên bề mặt phân tử protein).

Bản chất của kết tủa protein bằng muối là tạo tủa protein nhờ bổ sung vào dung dịch protein muối trung hòa ở nồng độ cao.

Kết tủa protein bằng muối phụ thuộc vào nhiều nhân tố như: nhiệt độ, nồng độ protein, pH và loại muối sử dụng.

Các loại muối trung tính thường sử dụng là muối citrate, phophate, sunfate và cloride tác dụng tủa protein của các ion hóa trị I có thể sắp xếp theo thứ tự sau: NH4+ > K+ > Na+.

 Kết tủa phân đoạn bằng dung môi

Một số dung môi hữu cơ có thể dễ hòa tan trong nước như axetone, polyetylenglycol, ethanol… làm giảm độ hòa tan trong nước của protein đến mức chúng có thể bị kết tủa nhanh chóng. Nhược điểm chủ yếu của phương pháp này là rất dễ gây biến tính protein, vì vậy việc sử dụng dung môi để kết tủa lectin cần phải được tiến hành ở nhiệt độ thấp.

 Thẩm tích

Phương pháp thẩm tích được tiến hành dựa trên nguyên lý sử dụng màng bán thấm với đặc tính cho qua những phần tử nhỏ hòa tan và giữ lại những phần tử lớn hơn kích thước màng. Trong phương pháp này, màng bán thấm ở dạng túi chứa chất cần thẩm tích đặt trong môi trường có pH nhất định, các phân tử nhỏ trong túi sẽ khuếch tán ra môi trường ngoài nhờ tác động của máy khuấy từ. Thẩm tích thường dùng để loại muối và những chất phân tử nhỏ không phải protein ra khỏi dung dịch chưa lectin cần thẩm tích.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu tính chất hóa lý và đặc tính sinh học của lectin chiết từ lá tỏi (Allium sativum L.) (Trang 30)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(95 trang)