1.2.T ối ưu hóa các phương pháp xử lý và phân tích mẫu
1.3.1.2.Hệ glycoprotein
Các hình ảnh điện di 2DE hệ glycoprotein ở 3 giai đoạn bệnh sớm, nhẹ và nặng được thể hiện tương ứng trên Hình 27, Hình 28 và Hình 29. Quan sát trên cả 3 Hình ở 3 mức độ bệnh khác nhau có thể nhận thấy khi so sánh với hệ protein bền nhiệt thì trên hình ảnh điện di 2DE glycoprotein ngoài một số protein có biến đổi giống như trên hệ bền nhiệt như Haptoglobin beta chain, Chuỗi haptoglobin cleaven-β, Apolypoprotein A1, Haptoglobin alpha 2 chain, Haptoglobin alpha 1 chain còn có thêm một protein nữa có mức độ biểu hiện tăng ở giai đoạn sớm và nhẹ là Fibrinogen. Như vậy có thể thấy các biến đổi về mức độ biểu hiện của các protein trong phân đoạn bền nhiệt và glycoprotein đối với các mẫu huyết
50 thanh bệnh nhân ĐTĐT2 khá giống nhau. Đối với Fibrinogen chúng tôi cũng đang tiếp tục nghiên cứu thêm để có thể xác định có thể sử dụng protein này trong phát hiện chẩn đoán bệnh được không.
Trên thế giới có một số nghiên cứu đã được công bố liên quan đến Haptoglobin đối với bệnh ĐTĐT2 ở mức độ gen và protein. Chandra T cùng cộng sự khi nghiên cứu trên 81 bệnh nhân ĐTĐ với 122 bệnh nhân ĐTĐ mắc bệnh võng mạc và 180 cá thể bình thường khoẻ mạnh đã chứng minh có sự liên quan giữa kiểu hình Hp với nguyên nhân gây ra ĐTĐ và ĐTĐ mắc bệnh võng mạc (Chandra T et al, 1991). Nakhoul FM cùng cộng sự cũng bước đầu chứng minh alen Hp2 làm tăng nhanh sự phát triển của bệnh ĐTĐT2(Nakhoul FM et al, 2001). Ngoài ra, khi nghiên cứu vai trò của đa hình gen Hp ở 129 bệnh nhân ĐTĐT2 và 87 cá thể bình thường, Quaye IK cùng cộng sựđã chứng minh alen Hp2 là một chỉ thị cho ĐTĐT2 trong khi Hp1 âm tính với bệnh này (Quaye IK et al, (2006). Đồng thời cũng có rất nhiều nghiên cứu khác của Wobeto VP et al, Bessa SS et al, Awadallah SM et al, cũng đã khẳng định được mức độ tương quan của đa hình gen Hp với tiến trình phát triển của bệnh ĐTĐT2 cũng như các biến chứng kèm theo như: bệnh thận, bệnh võng mạc (Wobeto VP et al, 2009; Wobeto VP et al, 2007; Awadallah SM et al, 2008; Bessa SS et al, 2007). Những nghiên cứu này mở ra triển vọng cho các nhà khoa học trong việc kiểm tra cơ chế gây bệnh và khả năng chỉ thị của gen này trong việc chẩn đoán bệnh ĐTĐT2. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cũng có sự tương đồng với nhiều nghiên cứu của các tác giả khác trên thế giới. Năm 1996, Rema cùng cộng sự đã chứng minh được mức độ biểu hiện của Haptoglobin tăng ở bệnh ĐTĐT2 (Rema M et al, 1996). Năm 2004, Zhang và cộng sự bằng cách sử dụng 2DE kết hợp khối phổ cũng chỉ ra mức độ biểu hiện của haptoglobin có sự thay đổi ở bệnh nhân ĐTĐT2 (Zhang R et al, 2004).
Bên cạnh đó, khi nghiên cứu trên hệ protein nước tiểu của bệnh nhân ĐTĐT2 bằng các phương pháp proteomic, Jain và cs đã tìm thấy sự biểu hiện đặc biệt của protein alpha-1 acid glycoprotein (Jain S et al, 2005). Ngoài ra, nghiên cứu gần đây của một nhóm các nhà khoa học người Ấn Độ trên hệ proteome nước tiểu đã cho thấy Transthyretin giảm 4.3 lần ở bệnh nhân ĐTĐT2 mắc bệnh thận so với bệnh nhân ĐTĐT2 không mắc bệnh thận. Tuy nhiên những nghiên cứu về mức độ biểu hiện của 2 protein này trong huyết thanh bệnh nhân ĐTĐT2 còn chưa nhiều. Những nghiên cứu lâm sàng đã chỉ ra mức độ fibrinogen tăng cao trong huyết thanh bệnh nhân tiểu đường so với nhóm đối chứng (Ganda OP et al, 1992).
Apolipoprotein là một nhóm Apoprotein, phải phụ thuộc vào sự có mặt của các phân tử nhỏ khác hay cofactor để thực hiện chức năng, là protein cấu thành nên các lipoprotein cùng với các phân tử phospholipid, triacylglycerol, cholesterol và các este cholesterol. Có năm loại apolipoprotein: Apo A, Apo B, Apo C, Apo D và Apo E. Năm 1989, Gomez cùng cộng sự cũng bước đầu nghiên cứu vể sự phân bố của các tiểu phần ApoC (Apo CII và CIII) trong bệnh nhân ĐTĐT2 (Gomez et al, 1989). Tuy nhiên, những nghiên cứu về mối
51 liên quan giữa mức độ biểu hiện của Apo CII và CIII, cũng như prolipoprotein trong huyết thanh với bệnh ĐTĐT2 còn chưa nhiều.
Trong nghiên cứu của chúng tôi, mức độ thay đổi biểu hiện của protein Haptoglobin và các đồng phân trong huyết thanh người bệnh ĐTĐT2 có thay đổi đáng kể theo chiều hướng tăng so với người bình thường cảở hệ protein bền nhiệt và hệ glycoprotein.
Hình 27. Ảnh điện di 2DE các mẫu glycoprotein từ mẫu huyết thanh người bệnh ĐTĐT2 giai
đoạn sớm và người bình thường trên thanh trips 7cm, pH 4,7-5,9. A. Mẫu người bình thường (BT64); B. Mẫu ĐTĐT2 (D54-Giai đoạn sớm). 1. Fibrinogen (tăng ở mẫu bệnh); 2. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Chuỗi haptoglobin cleaven-β (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Transthyretin (Tăng ở mẫu bệnh); 5. Apolypoprotein AI (Tăng ở mẫu bệnh); 6. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 7. Haptoglobin alpha 1 chain (Tăng ở mẫu bệnh).
Hình 28. Ảnh điện di 2DE các mẫu glycoprotein từ mẫu huyết thanh người bệnh ĐTĐT2 giai đoạn nhẹ và người bình thường trên thanh trips 7cm, pH 4,7-5,9. A. Mẫu người bình thường (BT64); B. Mẫu ĐTĐT2 (D65-Giai đoạn nhẹ). 1. Fibrinogen (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Chuỗi haptoglobin cleaven-β (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Chuỗi haptoglobin cleaven-β (Tăng ở mẫu bệnh); 5. Apolipoprotein AI (Tăng ở mẫu bệnh); 6. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh)
52
Hình 29. Ảnh điện di 2DE các mẫu glycoprotein từ mẫu huyết thanh người bệnh ĐTĐT2 giai đoạn nặng và người bình thường trên thanh trips 7cm, pH 4-7. A. Mẫu ĐTĐT2 (D03-Giai
đoạn nặng); B. Mẫu người bình thường (BT96). 1. Haptoglobin alpha 1 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Proapolypoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh).