1.2.T ối ưu hóa các phương pháp xử lý và phân tích mẫu
1.3.2.Đối với bệnh leukemia
Tương tự như trường hợp bệnh ĐTĐT2 các mẫu protein huyết thanh (phân đoạn hệ protein bền nhiệt và hệ glycoprotein) bệnh nhân leukemia cũng đã được phân tích bằng hình ảnh điện di 2DE với các dạng bệnh đã lựa chọn nghiên cứu. Các mẫu leukemia đã được chọn lựa bao gồm: (1) Dạng mãn (CML): 8 mẫu (ký hiệu K1, K3, K4, K5, K6, K7, K8, K9); (2)
Dạng cấp: 22 mẫu bao gồm 1 mẫu ALL1 (kí hiệu L1.1); 4 mẫu ALL2 (ký hiệu L2.1; L2.2, L2.4, L2.6); 1 mẫu AML1 (kí hiệu M1.1), 4 mẫu AML2 (kí hiệu M2.1, M2.2, M2.5 và M2.6); 4 mẫu AML3 (M3.2, M3.3, M3.4, M3.5); 6 mẫu AML4 (M4.1, M4.2, M4.6, M4.7), M4.8) và 3 mẫu AML5 (M5.1, M5.2 và M5.6). Các mẫu được phân tích nghiên cứu mức độ thay đổi về hệ protein bền nhiệt và hệ glycoprotein trong huyết thanh của từng thể bệnh. Sau đây là những kết quả chính đã nhận được.
1.3.2.1. Hệ protein bền nhiệt
Dạng Leukemia mãn (CML)
Trên bản gel điện di 2DE (Hình 30) có 7 protein có biểu hiện thay đổi về nồng độở mẫu bệnh, trong đó 5 protein có biểu hiện tăng là Ceruloplasmin; Alpha-2HS-
glycoprotein; Alpha-1-antitrypsin; Leucine-rich alpha-2-glycoprotein;
Haptoglobin alpha 2 chain và 1 protein có biểu hiện giảm là Haptoglobin và 1
protein bị biến mất là Immunoglobulin J chain. Như vậy có thể thấy đối với thể leukemia mãn, Haptoglobin và các đồng phân của nó có biểu hiện khá nhạy cảm trong huyết thanh bệnh nhân, có thể tăng, có thể giảm, không giống như trường hợp bệnh ĐTĐT2 protein này luôn tăng ở các giai đoạn bệnh.
53
Hình 30. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT6) và người bệnh leukemia dạng mãn (mẫu K6). 1. Ceruloplasmin (Tăng ở
mẫu bệnh); 2. Alpha-2HS-glycoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Alpha-1-antitrypsin (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Leucine-rich alpha-2-glycoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 5. Haptoglobin (Giảm ở mẫu bệnh); 6. Immunoglobulin J chain (Biến mất ở mẫu bệnh); 7. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở
mẫu bệnh).
Dạng Leukemia cấp Thể ALL2
Hình ảnh điện di 2DE của mẫu protein bền nhiệt thể ALL2 so với người bình thường (Hình 31) có thể nhận thấy 4 protein có biến đổi về mức độ biểu hiện với 3 protein có biểu hiện tăng là Alpha-2HS-glycoprotein; Clusterin (ApoJ) và Apolipoprotein CII và 1 protein có biểu hiện giảm là Haptoglobin alpha 2 chain. Protein này cũng có biểu hiện giảm ở các mẫu dạng mãn.
Hình 31. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT5) và người bệnh leukemia cấp ALL2 mẫu L2.4). 1.Alpha-2HS-glycoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Clusterin (ApoJ) (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Haptoglobin alpha 2 chain (Giảm
54
Dạng AML
Thể AML1
Trên hình ảnh điện di 2DE các protein bền nhiệt của mẫu người bình thường và dạng leukemia cấp thể AML1 (Hình 32) có 5 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 4 protein có biểu hiện tăng là Ceruloplasmin (Ferroxidase); Alpha-1- antitrypsin; Haptoglobin alpha 2 chain; Haptoglobin beta chain và 1 protein có biểu hiện giảm là Haptoglobin.
Hình 32. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT15) và người bệnh leukemia cấp dòng tuỷ AML1 (mẫu M1.2). 1.
Ceruloplasmin (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Alpha-1-antitrypsin (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Haptoglobin (Giảm ở mẫu bệnh); 4. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 5. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh).
Thể AML2
Hình ảnh điện di 2DE của mẫu AML2 so với người bình thường được thể hiện trên Hình 33. Quan sát trên bản điện di 2DE có 5 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 1 protein có biểu hiện tăng là Alpha-1-antitrypsin và 4 protein có biểu hiện giảm là Alpha-2HS-glycoprotein; Clusterin (ApoJ); Haptoglobin alpha 2 chain; Haptoglobin beta chain.
55
Hình 33. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT55) và người bệnh leukemia cấp dòng tuỷ AML2 (mẫu M2.4). 1. Alpha- 2HS-glycoprotein (Giảm ở mẫu bệnh); 2. Alpha-1-antitrypsin (Tăng ở mẫu bệnh); 3.
Clusterin (ApoJ) (Giảm ở mẫu bệnh); 4. Haptoglobin alpha 2 chain (Giảm ở mẫu bệnh); 5.
Haptoglobin beta chain (Giảm ở mẫu bệnh)
Thể AML3
Trên hình ảnh điện di 2DE các protein bền nhiệt của mẫu người bình thường và dạng leukemia cấp thể AML3 (Hình 34) có 6 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 4 protein có biểu hiện tăng là Alpha-1-antitrypsin; Haptoglobin alpha 2 chain; Transthyretin [fragment]; Haptoglobin beta chain và 2 protein có biểu hiện giảm là Alpha- 2HS-glycoprotein; Apolopoprotein CII.
Hình 34. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT53) và người bệnh leukemia cấp dòng tuỷ AML3 (mẫu M3.4). 1.Alpha-2HS- glycoprotein (Giảm ở mẫu bệnh); 2. Alpha-1-antitrypsin (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Transthyretin [fragment] (Tăng ở mẫu bệnh); 5.
Apolipoprotein CII (Giảm ở mẫu bệnh); 6. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh).
56 Trên hình ảnh điện di 2DE các protein bền nhiệt của mẫu người bình thường và dạng leukemia cấp thể AML4 (Hình 35) có 7 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 4 protein có biểu hiện tăng là Ceruloplasmin (Ferroxidase); Leucine-rich alpha-2-glycoprotein; Haptoglobin alpha 2 chain; Haptoglobin beta chain; 2 protein có biểu hiện giảm là Alpha-2HS-glycoprotein; Transthyretin [fragment] và 1 protein bị biến mất là Clusterin (ApoJ).
Hình 35. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT48) và người bệnh leukemia cấp dòng tuỷ AML4 (mẫu M4.1). 1.
Ceruloplasmin (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Alpha-2HS-glycoprotein (Giảm ở mẫu bệnh); 3.
Leucine-rich alpha-2-glycoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Clusterin (ApoJ) (Biến mất ở mẫu bệnh); 5. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 6. Transthyretin [fragment] (Giảm ở mẫu bệnh); 7. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh).
Thể AML5
Trên hình ảnh điện di 2DE các protein bền nhiệt của mẫu người bình thường và dạng leukemia cấp thể AML4 (Hình 36) cũng có 7 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 3 protein có biểu hiện tăng là Leucine-rich alpha-2-glycoprotein; Haptoglobin alpha 2 chain; Haptoglobin beta chain; 3 protein có biểu hiện giảm là Ceruloplasmin (Ferroxidase); Alpha-2HS-glycoprotein; Transthyretin [fragment] và 1 protein bị biến mất là Clusterin (ApoJ). Như vậy có thể thấy các thể AML3 và AML4 có một số nét tương đồng về hình ảnh điện di 2DE các mẫu protein bền nhiệt.
57
Hình 36. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT48) và người bệnh leukemia cấp dòng tuỷ AML5 (mẫu M5.2). 1.
Ceruloplasmin (Ferroxidase) (Giảm ở mẫu bệnh); 2. Alpha-2HS-glycoprotein (Giảm ở mẫu bệnh); 3. Leucine-rich alpha-2-glycoprotein (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Clusterin (ApoJ) (Biến mất ở mẫu bệnh); 5. Haptoglobin alpha 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 6. Transthyretin [fragment] (Giảm ở mẫu bệnh); 7. Haptoglobin beta chain (Tăng ở mẫu bệnh).
Tổng hợp kết quảđiện di 2DE hệ protein bền nhiệt trên các mẫu bệnh leukemia:
Kết quảđiện di 2DE hệ protein bền nhiệt được tổng kết ở Bảng 10 cho thấy, có 11 protein bền nhiệt có biểu hiện thay đổi trên bản điện di 2DE ở các dạng bệnh leukemia, trong đó có 2 protein có biểu hiện tăng là Alpha-1-antitrypsin, Leucine-rich alpha-2-glycoprotein; 1 protein có biểu hiện giảm là Haptoglobin; 1 protein không xuất hiện trên hình ảnh điện di của mẫu bệnh là Immunoglobulin J chain; 6 protein có biểu hiện khi tăng, khi giảm là Alpha-2HS-glycoprotein, Apolipoprotein CII, Ceruloplasmin, Haptoglobin alpha 2 chain, Haptoglobin beta chain, Transthyretin và 1 protein có đủ cả 3 dạng biểu hiện tăng, giảm, biến mất là Clusterin (ApoJ).
Như vậy có thể nhận thấy ở các mẫu leukemia bền nhiệt, sự biến đổi có mức độđa dạng và phong phú hơn các mẫu glycoprotein, nhiều protein nhạy cảm khi tăng, khi giảm ở các thể bệnh hơn, vì vậy cũng khó có thể tìm protein chỉ thịđể chẩn đoán bệnh hơn.
Tuy nhiên qua tổng kết trong Bảng 7 chúng tôi cũng thấy có một sốđiểm đáng chú ý là: (i) Alpha-2HS-glycoprotein có mức độ biểu hiện tăng ở thể mãn và ALL nhưng đồng
thời giảm ở tất cả các thể AML đã phân tích.
(ii) Clusterin (ApoJ) là̀ protein khá nhạy cảm, nó có thể biểu hiện tăng, giảm hoặc biến mất ở các thể bệnh leukemia khác nhau trên hình ảnh điện di 2DE các protein bền nhiệt trong huyết thanh của các bệnh nhân.
58
Bảng 7. Tổng kết các protein bền nhiệt có biểu hiện thay đổi trong các dạng bệnh leukemia trên hình ảnh điện di 2DE TT Tên protein Mức độ biểu hiện tăng ở mẫu Mức độ biểu hiện giảm ở mẫu Biến mất
1 Alpha-1-antitrypsin CML, AML1, AML2, AML3
2 Alpha-2HS-glycoprotein CML, ALL2 AML2, AML3, AML4, AML5 3 Apolipoprotein CII ALL2, AML3 4 Ceruloplasmin
(Ferroxidase)
CML,AML1, AML4 AML5
5 Clusterin (ApoJ) ALL2 AML2 AML4, AML5
6 Haptoglobin CML,AML1
7 Haptoglobin alpha 2 chain CML, AML1, AML3,
AML4, AML5 AML2
8 Haptoglobin beta chain AML1, AML4, AML5 AML2, AML3
9 Immunoglobulin J chain CML 10 Leucine-rich alpha-2- glycoprotein CML, AML4, AML5 11 Transthyretin [fragment]
AML3 AML4, AML5