I. TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP
PHẦN IV KẾT LUẬN 1 Các kết quả chính của đề tà
1. Các kết quả chính của đề tài
Đề tài thu được 5 kết quả chính sau
1.1. Đã thu thập được các mẫu máu/huyết thanh của: (i) Người bình thường (100 mẫu); (ii) Người bệnh đái tháo đường type 2 (ĐTĐT2) thể sớm, nhẹ và nặng; (iii) Người bệnh Người bệnh đái tháo đường type 2 (ĐTĐT2) thể sớm, nhẹ và nặng; (iii) Người bệnh leukemia dạng cấp và mãn (100 mẫu) theo các yêu cầu đặt ra của đề tài.
1.2. Đã tiến hành xử lí các mẫu huyết thanh, thu nhận và phân tích: (i) Hệ protein tổng thể;
(ii) Hệ protein bền nhiệt và (iii) Hệ glycoprotein bằng phương pháp điện di 2 chiều (2-DE) kết hợp với hệ sắc kí lỏng nano đa chiều kết nối với hệ khối phổ liên tục (nanoLC-MS/MS) trong 90 mẫu huyết thanh của: (i) người bình thường (30 mẫu); (ii) người bệnh ĐTĐT2 (ở cả 3 trạng thái bệnh: sớm, nhẹ và nặng): 30 mẫu và (iii) mẫu bệnh nhân leukemia (dạng cấp và mãn): 30 mẫu. Các dữ liệu protein nhận được được phân tích và xử lí bằng phần mềm Mascot v1.8.
1.3. Đã tiến hành xây dựng được 3 Ngân hàng dữ liệu về hệ protein huyết thanh người Việt Nam bình thường, người bệnh ĐTĐT2 và người bệnh leukemia với tổng số 12 CSDL hệ Nam bình thường, người bệnh ĐTĐT2 và người bệnh leukemia với tổng số 12 CSDL hệ protein huyết thanh người Việt Nam khác nhau dưới dạng bảng dữ liệu được sắp xếp như sau đối với mỗi protein: số thứ tự, số đăng kí của protein, tên protein được sắp xếp theo thứ tự ABC, số đăng kí Uniprot của protein (được link với trang web có đầy đủ các thông số và kết quả nghiên cứu về protein này), chức năng của protein, vị trí của protein trong tế bào, các biến đổi của protein (nếu có) và liên quan đến bệnh (nếu có). Mỗi cơ sở dữ liệu chứa từ hàng trăm đến hàng ngàn protein các loại.
1.4. Đã phân tích, nhận dạng và xác định các ứng viên có khả năng làm chỉ thị protein (protein markers candidates) đối với bệnh đái tháo đường type 2 và leukemia bằng phương (protein markers candidates) đối với bệnh đái tháo đường type 2 và leukemia bằng phương pháp điện di 2DE.
1.4.1. Đối với bệnh ĐTĐT2: có 8 protein có mức độ biểu hiện thay đổi đã được xác định, trong đó có 7 protein có biểu hiện tăng ở cả 3 giai đoạn bệnh (sớm, nhẹ và nặng) là: (1) Chuỗi haptoglobin alpha 1 (HpA1); (2) Chuỗi haptoglobin alpha 2 (HpA2); (3) Chuỗi haptoglobin beta (HpB); (4) Acid alpha 1 glycoprotein (Acid A1G); (5) Fibrinogen (Chỉở mẫu glycoprotein); (6) Prolypoprotein (Proapo) (Chỉ ở mẫu glycoprotein); (7)
Apolypoprotein CII và CIII (ApoC II và III) và 1 protein Tranthyretin (TTR) (Chỉở mẫu bền nhiệt) có biểu hiện khi tăng khi giảm.
1.4.2. Đối với bệnh leukemia
Leukemia dạng cấp: có 11 protein bền nhiệt và 12 glycoprotein có biểu hiện thay đổi trên bản điện di 2DE của các mẫu bệnh nhưng các biến đổi này không có độ lặp lại cao ở các mẫu nên chưa tìm được các protein có khả năng phát triển thành chỉ thị chẩn đoán. Tuy nhiên trong các CSDL của protein huyết thanh bệnh nhân leukemia cả dạng cấp và mãn
101 thì tỉ lệ các protein liên quan đến ung thư, các protein đột biến tăng lên đáng kể so với mẫu người bình thường (từ 2-5 lần).
Leukemia dạng mãn: có 6 glycoprotein có mức độ biểu hiện thay đổi khá đặc trưng trong 5/8 mẫu huyết thanh bệnh nhân leukemia dạng mãn đã nghiên cứu, trong đó có 2 protein có biểu hiện tăng (Ceruloplasmin và Alpha 1 antitrypsin) và 4 protein có biểu hiện giảm (Complement C3; Zinc-α2 –glycoprotein; Haptoglobin-β-chain; Haptoglobin α 1 chain).
1.5. Đã tiến hành xây dựng phương pháp Western-Blotting trong phối hợp chẩn đoán sớm bệnh ĐTĐT2 với kháng thể kháng Haptoglobin trong huyết thanh bệnh nhân ĐTĐT2. bệnh ĐTĐT2 với kháng thể kháng Haptoglobin trong huyết thanh bệnh nhân ĐTĐT2.
Các kết quả mới của đề tài
(1) Lần đầu tiên ở Việt Nam các CSDL hệ protein huyết thanh người bình thường, người bệnh ĐTĐT2 và người bệnh leukemia (hệ protein tổng thể, hệ protein bền nhiệt, hệ glycoprotein) được nghiên cứu, xác định và xây dựng một cách có hệ thống bằng các kỹ thuật proteomics và bioinformatics với hàng ngàn protein đã được sắp xếp, tìm kiếm khá đầy đủ các thông tin liên quan. Đây là Ngân hàng Dữ liệu protein huyết thanh người Việt Nam khá đồ sộ, có thể sử dụng trong giảng dạy, nghiên cứu về các đặc điểm sinh học người Việt Nam dưới góc độ hệ protein ở trạng thái bình thường và bệnh lí.
(2) Đã tiến hành nhận dạng, xác định các protein trong huyết thanh có biểu hiện thay đổi trong các trạng thái bệnh ĐTĐT2 và leukemia so với người bình thường, tìm ra được các protein có khả năng liên quan đến bệnh và có thể phát triển thành chỉ thị xác định bệnh. (3) Đã xây dựng phương pháp phối hợp chẩn đoán sớm bệnh ĐTĐT2 với chỉ thị Haptoglobin trong huyết thanh bằng phương pháp Western Blotting.
KẾT LUẬN CHUNG
Các cán bộ thực hiện đề tài đã hoàn thành tất cả các nội dung, sản phẩm đã đăng kí theo thuyết minh, hợp đồng của đề tài theo đúng tiến độ. Các sản phẩm của đề tài đều đạt hoặc vượt các chỉ tiêu đã đăng kí. Các báo cáo định kì và các kì kiểm tra giữa kì đều được thực hiện nghiêm túc. Đề tài sẽđược nghiệm thu cấp cơ sở và hoàn tất các thủ tục nghiệm thu cấp Nhà nước theo đúng tiến độ.
KIẾN NGHỊ
Trên cơ sở phát hiện được một số protein có biến đổi liên quan đến sự phát sinh và phát triển của bệnh đái tháo đường type 2 trong quá trình thực hiện đề tài, chúng tôi đề nghị Ban Chủ nhiệm Chương trình Khoa học Trọng điểm KC tạo điều kiện cho đề tài được thực
102 hiện tiếp giai đoạn 2 với trọng tâm: “Nghiên cứu xác định các protein ứng viên liên quan đến bệnh đái tháo đường type 2”.
Hà Nội, ngày 15 tháng 9 năm 2010
Xác nhận của Viện Công nghệ sinh học Chủ nhiệm đề tài