1.2.T ối ưu hóa các phương pháp xử lý và phân tích mẫu
BT15 M3.2 Hình 41 Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ glycoprotein trong huyết thanh người bình thường
Hình 41. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ glycoprotein trong huyết thanh người bình thường
(mẫu BT05) và người bệnh leukemia dạng cấp thể AML3 (mẫu M3.1). 1. Ceruloplasmin (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Alpha1-HS-glycoprotein (Giảm ở mẫu bệnh).
Thể AML4
Trên hình ảnh điện di 2DE các glycoprotein của mẫu người bình thường và thể leukemia dạng cấp thể AML4 (Hình 42) có 6 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, trong đó có 5 protein có biểu hiện tăng là Alpha1-antitrypsin; Complement C3; Apolipoprotein AI; Haptoglobin α 2 chain; Haptoglobin α 1 chain và 1 protein có biểu hiện giảm là Apolipoprotein CII.
63
Hình 42. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ glycoprotein trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT05) và người bệnh leukemia cấp AML4 (mẫu M4.2). 1. Alpha1-antitrypsin (Tăng ở
mẫu bệnh); 2. Complement C3 (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Apolipoprotein AI (Tăng ở mẫu bệnh); 4. Haptoglobin α 2 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 5. Haptoglobin α 1 chain (Tăng ở mẫu bệnh); 6. Apolipoprotein CII (Giảm ở mẫu bệnh).
Thể AML5
Trên hình ảnh điện di 2DE các glycoprotein của mẫu người bình thường và thể leukemia dạng cấp thể AML5 (Hình 43) có 3 protein có biểu hiện thay đổi ở các mẫu bệnh, đều có biểu hiện tăng là Alpha1-antitrypsin; Apolipoprotein AI; Haptoglobin α 1 chain.
BT06 M5.2
Hình 43. Hình ảnh điện di 2DE mẫu hệ glycoprotein trong huyết thanh người bình thường (mẫu BT05) và người bệnh leukemia cấp AML5 (mẫu M5.2). 1. Alpha1-antitrypsin (Tăng ở mẫu bệnh); 2. Apolipoprotein AI (Tăng ở mẫu bệnh); 3. Haptoglobin α 1 chain (Tăng
ở mẫu bệnh).
Tổng hợp kết quảđiện di 2DE hệ glycoprotein các mẫu bệnh nhân leukemia
Tập hợp các protein có biến đổi về mức độ biểu hiện trong các mẫu glycoprotein huyết thanh bệnh nhân leukemia ở các thể so với người bình thường được trình bày trong Bảng 9. Từ kết quả trên có thể thấy trong các thể bệnh leukemia đã phân tích có 12 glycoprotein có mức độ biểu hiện thay đổi, trong đó có 4 protein có biểu hiện tăng ở các mẫu bệnh là Alpha-2HS-glycoprotein, Apolipoprotein AI, Ceruloplasmin (Ferroxidase), Haptoglobin α 1 chain; 3 protein có biểu hiện giảm là Alpha1-HS-glycoprotein; Haptoglobin; Zinc-α2 – glycoprotein và 5 protein có biểu hiện cả tăng và giảm ở các thể bệnh khác nhau là Alpha- 1-antitrypsin; Apolipoprotein CII; Complement C3; Fibrinogen beta chain; Haptoglobin alpha 2 chain.
Bảng 9. Tổng kết các glycoprotein có biểu hiện thay đổi trong các dạng bệnh leukemia trên hình ảnh điện di 2DE
64
TT Tên protein Mức độ biểu hiện tăng
ở mẫu
Mức độ biểu hiện giảm
ở mẫu
1 Alpha-1-antitrypsin CML; AML2; AML4; AML5
ALL1 2 Alpha1-HS-glycoprotein AML3 3 Alpha-2HS-glycoprotein CML, ALL1, AML1;
AML2
4 Apolipoprotein AI AML1 ; AML2; AML4; AML5
5 Apolipoprotein CII AML1; AML2 AML4 6 Ceruloplasmin (Ferroxidase) CML, AML1, AML2;
AML3
7 Complement C3 AML4 CML. AML1 8 Fibrinogen beta chain AML2 CML
9 Haptoglobin CML, AML1
10 Haptoglobin alpha 2 chain AML4 CML, ALL2; AML2 11 Haptoglobin α 1 chain AML2; AML4; AML5
12 Zinc-α2 -glycoprotein CML, AML1
So sánh các protein có biến đổi trên hình ảnh điện di 2DE về thành phần hệ protein bền nhiệt và glycoprotein của các mẫu leukemia đã phân tích.
Các protein có biểu hiện thay đổi trên hình ảnh điện di 2DE các mẫu protein bền nhiệt và glycoprotein trong huyết thanh bệnh nhân leukemia có sự tương đồng khá cao. Trong 11 protein bền nhiệt và 12 glycoprotein có biểu hiện thay đổi có đến 6 protein trùng nhau giữa hai hệ là Alpha-1-antitrypsin, Alpha-2HS-glycoprotein, Apolipoprotein CII, Ceruloplasmin, Haptoglobin, Haptoglobin alpha 2 chain. Tuy nhiên các thể bệnh có sự biểu hiện thay đổi của những protein này lại không giống nhau.
Ví dụ: sự biểu hiện của Alpha-1-antitrypsin
1. Trường hợp các protein bền nhiệt: Alpha-1-antitrypsin có biểu hiện tăng ở các mẫu thuộc thể CML, AML1, AML2, AML3
2. Trường hợp các glycoprotein: protein này cũng có biểu hiện tăng ở mẫu CML, AML2 như protein bền nhiệt nhưng sự biểu hiện còn tăng cảở mẫu AML4, AML5 nữa. Bên cạnh đó Alpha-1-antitrypsin lại có biểu hiện giảm ở mẫu ALL1.
Có 5 protein chỉ có biểu hiện thay đổi tronng các mẫu bền nhiệt là Clusterin, Haptoglobin beta chain, Immunoglobin J chain, Leucin-rich alpha-2-glycoprotein. Có 6 protein chỉ thay
65 đổi biểu hiện trong các mẫu glycoprotein là Alpha1-HS-glycoprotein, Apolipoprotein AI, Complement C3, Fibrinogen beta chain, Haptoglobin α 1 chain và Zinc-α2 –glycoprotein. Như vậy có thể thấy ở các mẫu leukemia dạng cấp, sự biến đổi về biểu hiện của các protein trong các thể bệnh khá đa dạng và trong các nghiên cứu của chúng tôi chưa tìm ra các biến đổi có qui luật. Cũng có thể do có khá nhiều dạng khác nhau của thể cấp nên các nghiên cứu chưa lựa chọn được các biến đổi có qui luật.
Đối với thểleukemia dạng mãn với 8 cá thểđã nghiên cứu có sự biến đổi khá trùng khớp giữa 5/8 mẫu về 6 glycoprotein đã được nhận diện trên bản điện di 2DE có biểu hiện thay đổi với độ lặp lại khá cao, trong đó có 2 protein có biểu hiện tăng là Alpha1-antitrypsin và
Ceruloplasmin và 4 protein có biểu hiện giảm là: Zinc-α2 –glycoprotein; Complement C3; Haptoglobin beta chain; Haptoglobin α 2 chain.