1.2.T ối ưu hóa các phương pháp xử lý và phân tích mẫu
1.2.1.2.Phân tách và thu nhận các protein bền nhiệt trong huyết thanh người bình thường và bệnh lý
thường và bệnh lý
Sử dụng phương pháp biến tính nhiệt như đã mô tả trong phần vật liệu và phương pháp nghiên cứu, chúng tôi đã thu nhận được các protein bền nhiệt. Kết quả như sau.
Đối với mẫu người bình thường:
Hình 5. Ảnh điện di SDS – PAGE protein bền nhiệt mẫu người bình thường. M: Marker;
33 Trên Hình 5, ở đường chạy số 1, xuất hiện một băng lớn có kích thước khoảng 66.2 kDa, tương đương kích thước của albumin trong huyết thanh, sự có mặt của albumin sẽ cản trở việc nghiên cứu trên các protein khác. Trong khi đó ởđường chạy số 2 không còn thấy xuất hiện băng lớn của albumin chứng tỏ bằng phương pháp biến tính nhiệt, chúng tôi đã loại bỏ được hầu hết protein này. Nhờđó sự phân tách của các protein khác rõ ràng hơn, xuất hiện nhiều băng có kích thước nhỏ hơn.
Kết quả trên cho thấy, bằng phương pháp xử lý biến tính nhiệt, chúng tôi đã thu được các protein bền nhiệt, đồng thời làm đơn giản thành phần protein trong huyết thanh, tạo thuận lợi cho các phân tích tiếp theo. Ngoài ra, nếu so sánh với các phương pháp làm đơn giản mẫu protein huyết thanh khác như Aurum serum protein Mini Kit, cột sắc ký đa ái lực (Multiple Affinity Removal LC Column - Agilent), IgY-microbeads kit (Seppro®),Cut off, … thì phương pháp biến tính nhiệt rõ ràng là đơn giản, dễ làm và đỡ tốn kém hơn.
Đối với các mẫu bệnh
Các kết quả thu được (Hình 6, Hình 7) cho thấy, chúng tôi đã thu nhận được hệ protein bền nhiệt trong huyết thanh, làm đơn giản hóa các thành phần protein trong mẫu. Ngoài ra, kết quảảnh điện di cũng phần nào cho thấy có những khác biệt nhất định trong thành phần các protein bền nhiệt ở mẫu thường và mẫu bệnh.
Hình 6. Ảnh điện di SDS – PAGE protein bền nhiệt một số mẫu huyết thanh bệnh nhân leukemia. Đường chạy M: Thang protein Marker chuẩn; Đường chạy1: Protein huyết thanh nguyên pha loãng 40 lần; Đường chạy2 đến 6: Protein bền nhiệt thu được từ một số mẫu Leukemia; Đường chạy 7: Protein bền nhiệt thu được từ huyết thanh người bình thường (đối chứng).
34
Hình 7. Ảnh điện di SDS – PAGE protein bền nhiệt một số mẫu bệnh ĐTĐT2. Đường chạy M:
Thang protein Marker chuẩn; Đường chạy1: Protein huyết thanh nguyên pha loãng 40 lần; Đường chạy 2: Protein bền nhiệt thu được từ huyết thanh người bình thường (đối chứng); Đường chạy3 đến 6: Protein bền nhiệt thu được từ một số mẫu bệnh ĐTĐT2.