1.2.T ối ưu hóa các phương pháp xử lý và phân tích mẫu
1.2.1.3.Phân tách và thu nhận các glycoprotein trong huyết thanh người bình thường và bệnh lý
và bệnh lý
Để thu nhận các glycoprotein, mẫu huyết thanh được phân tách qua cột sắc kí ái lực ConA (cách tiến hành được mô tả trong phần vật liệu và phương pháp nghiên cứu). Các glycoprotein tiếp đó được phân tích điện di SDS- PAGE (Hình 8).
Hình 8. Điện di đồ SDS-PAGE kết quả thu glycoprotein bằng sắc ký ái lực với ConA của mẫu bình thường và mẫu bệnh ĐTĐT2. Đường chạy số 1, 9: huyết thanh tổng số; đường chạy 2, 6: dung dịch rửa cột trước khi thôi protein; đường chạy số 3, 7: phân đoạn protein bám cột; đường
35
chạy số 4, 8: phân đoạn protein bám cột.
Quan sát kết quả phân tách trên điện di đồ trên Hình 8 chúng tôi nhận thấy:
- Ởđường chạy số 2, 6 (dung dịch rửa cột) không thấy xuất hiện băng protein nào điều này chứng tỏ các protein không bám cột sắc ký đã được rửa sạch bằng đệm cân bằng trước khi thôi dung dịch glycoprotein.
- So sánh các băng protein ởđường chạy số 4, 8 (dung dịch protein bám cột) và đường chạy số 1, 9 (dung dịch protein tổng số) đã chỉ ra hàm lượng protein bám trên cột ít hơn hàm lượng protein không bám cột, đồng thời đã loại được hầu hết albumin khỏi mẫu glycoprotein. Điều này sẽ được làm sáng tỏ trong các nghiên cứu tiếp theo.
- So sánh các băng protein ởđường chạy số 1, 9 (mẫu huyết thanh nguyên) so với các băng protein ở đường chạy số 3, 7 và 4, 8 cho thấy tổng hàm lượng protein bám cột và không bám cột tương đương với hàm lượng protein trong mẫu huyết thanh nguyên.
Tương tự chúng tôi tiến hành thu nhận các glycoprotein của mẫu bệnh leukemia bằng phương pháp sắc ký ái lực với chất giá ConA (Hình 9).
Hình 9. Điện di đồ SDS-PAGE kết quả thu nhận glycoprotein của mẫu bệnh leukemia. Đường chạy M: Thang marker chuẩn; đường chạy số 1, 2, 3, 4: phân đoạn glycoprotein của mẫu bệnh, S: huyết thanh tổng số.
Kết quảđiện di trên Hình 9 cho thấy đã thu nhận được khá nhiều glycoprotein trong huyết thanh mẫu bệnh leukemia tạo điều kiện cho các nghiên cứu tiếp theo.
36