Chủng nghiên cứu có hoạt tính probiotic mạnh đƣợc chọn lên men ở thiết bị BioFlo 110 thể tích 10 lít. Chủng probiotic đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng TSB cải tiến chứa nguồn cacbon là rỉ đƣờng. Để xác định điều kiện lên men thích hợp, lần lƣợt các thông số: pH môi trƣờng, nhiệt độ và thời gian lên men đƣợc thay đổi trong khi các thông số còn lại đƣợc cố định và cải tiến dần. Khả năng sinh trƣởng của vi khuẩn đƣợc xác định bằng phép đo độ đục của dịch nuôi tại bƣớc sóng 540 nm (OD540) trên máy đo quang phổ Cary 100 Bio (Varian, Mỹ).
- pH:
Môi trƣờng lên men gồm có : 20g/l pepton; 10g/l NaCl; 2,5g/l K2HPO4; 2,5g/l rỉ đƣờng. Dịch lên men đƣợc hấp khƣ̉ trùng ở 1210
C trong thời gian 15 phút. Tiến hành lên men ở nhiệt độ 280
C, tốc độ quấy đảo 180 vòng/phút, nồng độ muối 1% và các giá trị pH 6; 7; 8; 9, thời gian lên men là 3 giờ. Tƣ̀ đó lƣ̣a chọn đƣợc pH môi tr ƣờng thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
- Nhiệt độ:
Môi trƣờng lên men gồm có: 20 g/l pepton; 10 g/l NaCl; 2,5 g/l K2HPO4; 2,5 g/l rỉ đƣờng. Dịch lên men đƣợc hấp khử trùng ở 1210C trong thời gian 15 phút. Tiến
hành lên men ở nhiệt độ 280
C, tốc độ quấy đảo 180 vòng/phút, nồng độ muối 1%, pH 8 và các giá trị nhiệt độ 28; 31; 34; 37; 40, trong thời gian 3 giờ. Tƣ̀ đó lƣ̣a chọn đƣợc nhiệt độ thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
- Thời gian:
Môi trƣờng lên men gồm có: 20 g/l pepton; 10 g/l NaCl; 2,5 g/l K2HPO4; 2,5 g/l rỉ đƣờng. Dịch lên men đƣợc hấp khử trùng ở 1210C trong thời gian 15 phút. Tiến hành lên men ở nhiệt độ 340C, tốc độ quấy đảo 180 vòng/phút, nồng độ muối 1%, pH 8. Sau một giờ đồng hồ tiến hành thu dịch lên men đo độ đục ở OD540 . Tƣ̀ đó lƣ̣a chọn đƣợc thời gian thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.