Các chủng vi khuẩn nghiên cứu đƣợc nuôi trên môi trƣờng TSB tại pH 7,3 ở nhiệt độ 370
C. Để xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp, lần lƣợt các thông số: nguồn cacbon, nguồn nitơ, nồng độ muối, pH môi trƣờng và nhiệt độ đƣợc thay đổi trong khi các thông số còn lại đƣợc cố định và cải tiến dần. Sau 3 giờ nuôi, khả năng sinh trƣởng của vi khuẩn đƣợc xác định bằng phép đo độ đục của dịch nuôi tại bƣớc sóng 540 nm (OD540) trên máy đo quang phổ Cary 100 Bio (Varian, Mỹ).
- Nguồn cacbon:
Các chủng probiotic đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng gồm các nguồn cacbon khác nhau: glucose, rỉ đƣờng, tinh bột bắp , tinh bột sắn , tại pH 7,3 lắc 180 vòng/phút. Lƣ̣a chọn nguồn cacbon thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
Các chủng probiotic đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng gồm các nguồn nitơ khác nhau: bột mì, amoni sulfat, pepton, tại pH 7,3 lắc 180 vòng/phút. Lƣ̣a chọn nguồn nitơ thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
- Nồng độ muối:
Các chủng probiotic đƣợc nuôi cấ y trên môi trƣờng TSB , lắc 180 vòng/phút, ở các nồng độ muối 0%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, tại pH 7,3. Lƣ̣a chọn nồng độ muối thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
- pH môi trƣờng:
Các chủng probiotic đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng TSB, nồng độ muối 1%, lắc 180 vòng/phút, tại các giá trị pH 5, 6, 7, 8, 9. Lƣ̣a chọn pH môi trƣờng thích hợp thông qua việc xác định khả năng sinh trƣởng.
- Nhiệt độ:
Các chủng probiotic đƣợc muôi c ấy trên môi trƣờng TSB , tại pH 8, lắc 180 vòng/phút, ở các nhiệt độ 310
, 340, 370, 400C, nhiệt độ phòng (280-310C). Lƣ̣a chọn nhiệt độ thích hợp thông qua xác định khả năng sinh trƣởng.