3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.3.7.2.Tiến hành
Dùng micropipet vô trùng lấy 0,2 ml canh trùng trên, nhỏ lên trên mặt đĩa thạch, láng đều trên mặt thạch, hút hết canh trùng thừa, để yên ở nhiệt độ phòng từ 3-5 phút cho khô mặt thạch.
Dùng panh kẹp giấy tẩm kháng sinh đặt cố định lên trên mặt đĩa thạch đã được láng đều canh khuẩn, sao cho các tấm giấy này tiếp xúc với mặt thạch và cách nhau không quá 15 mm. Giữ yên 15 phút rồi lật úp đĩa thạch, để ở nhiệt độ 370
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.7.3. Đọc kết quả
Bảng 2.2: Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh
Tên thuốc Đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm)
Mẫn cảm cao Mẫn cảm Kháng thuốc Ampicillin ≥ 14 12 - 13 ≤ 11 Neomycin ≥ 15 13 - 14 ≤ 12 Amoxycillin ≥ 18 14 - 17 ≤ 13 Enrofloxacin ≥ 23 17 - 22 ≤ 16 Ciprofloxacin ≥ 22 13 - 21 ≤ 12 Colistin ≥ 15 13 - 14 ≤12 Kanamycin ≥ 18 15 - 17 ≤ 14 Gentamicin ≥ 16 14 - 16 ≤ 13 Lincomycin ≥15 13 - 14 ≤12 Norfloxacin ≥ 25 17 - 24 ≤ 16 Neomycin ≥15 13 - 14 ≤12 Tetracyclin ≥23 19 - 22 ≤18 Cefazidin ≥20 15 - 19 ≤14 Amikacin ≥17 15 - 16 ≤14
2.3.8. Xây dựng phác đồ điều trị bệnh Phó thương hàn vịt
Qua xác định sự mẫn cảm của các vi khuẩn gây bệnh phân lập được với một số kháng sinh, hoá dược bằng phương pháp kháng sinh đồ trên đĩa thạch, trên cơ sở đó lựa chọn phác đồ điều trị bệnh thích hợp. Để đánh giá được hiệu quả một cách khách quan, các phác đồ được thực hiện có sự đồng đều tương đối về các tiêu chí cơ bản sau:
- Số vịt bị bệnh Phó thương hàn ở cùng một địa điểm được phân ra một cách ngẫu nhiên làm 3 lô tương ứng với 3 phác đồ điều trị bệnh.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Số lần và ngày điều trị bệnh được dùng đồng đều trong các phác đồ. - Trong 3 phác đồ, sự khác nhau là việc sử dụng các loại thuốc kháng sinh khác.
- Đánh giá hiệu quả của các phác đồ điều trị bệnh căn cứ vào sự ổn định dần về các triệu chứng biểu hiện bệnh và tình trạng ăn uống sau 4 - 7 ngày kể từ khi dùng thuốc.
Các phác đồ dùng trong điều trị như sau:
Phác đồ I: NORFACOLI: 1 gram/20 kg TT Điện giải: 1 g/lít nước uống
B.complex: 1 g/3 lít nước uống.
Norfacoli là sản phẩm của công ty CP dược và vật tư thú y HANVET, Trong 10 gram có: 10000 mg Norfloxacin, 100 mg vitamin B1, 250 mg vitamin C, 15 gram vitamin K 3, 200 mg Niacin, tá dược vừa đủ
Phác đồ II:
T.COLIVIT: 1 g/5 kg TT. Hòa nước cho uống hoặc trộn thức ăn cho ăn. Điện giải: 1g/lít nước uống
B.complex: 1g/3 lít nước uống.
Thuốc T.colivit là sản phẩm của công ty thuốc thú y Năm Thái. Trong 100 g chế phẩm có:
Oxytetracyclin HCl: 9 000 mg Neomycin : 6 000 mg
Phác đồ III: HANCIPRO - 50: 1 ml/lít nước uống. Điện giải: 1 g/lít nước uống
B.complex: 1 g/3 lít nước uống
Hancipro là sản phẩm của công ty cổ phần dược và vật tư thú y HANVET. Trong 100 ml chế phẩm chứa: Ciprofloxacin: 5 000 mg.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.4. Phƣơng pháp xử lý số liệu
Các số liệu thu thập được xử lý theo phương pháp nghiên cứu trong chăn nuôi của Nguyễn Văn Thiện, 1997[40] với các tham số cơ bản:
Các tham số thống kê cơ bản: - Số trung bình mẫu: xi
X = n
xi : Tổng các giá trị của x n : Dung lượng mẫu. X : Số trung bình mẫu. - Độ lệch tiêu chuẩn: + Với n > 30: 2 2 i i x Σx Σx S n n + Với n 30: 2 2 i i x Σx Σx S n - 1 n
Trong đó: SX: Độ lệch tiêu chuẩn Xi : Giá trị của mẫu n : Dung lượng mẫu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Sai số của số trung bình:
+ Với n > 30: x x S m n + Với n 30: x x S m n - 1
Trong đó: mX: Sai số của số trung bình
SX : Độ lệch tiêu chuẩn n : Dung lượng mẫu
- Phương pháp thống kê sinh học của Pascal Leroy, Frédéric Farnir (Người dịch Đặng Vũ Bình - 1999)[29].
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Chƣơng 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt tại Hƣng Yên.
Chúng tôi tiến hành kiểm tra 198 mẫu thí nghiệm được lấy từ: lách, manh tràng, trứng tắc, trứng thường, nước môi trường và thức ăn của vịt. Sau khi thu thập mẫu thí nghiệm được xử lý, nuôi cấy và phân lập tại Bộ môn Vệ sinh gia súc - Viện Thú y, kết quả được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3. 1: Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt STT Đia điêm lấy mẫu Số mẫu nghiên cứu Mẫu dƣơng tính (+) Tỷ lệ (%) 1 H. Kim Động 58 11 18,96 2 H. Tiên Lữ 72 18 25,00 3 H. Ân Thi 68 12 17,64 Tính chung 198 41 20,70
Kết quả ở bảng 3.1 cho thấy trong tổng số 198 mẫu thu thập từ các cơ sở chăn nuôi thuộc thuộc tỉnh Hưng Yên thì các huyện khác nhau có tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella cũng khác nhau, tỷ lệ nhiễm cao nhất là mẫu ở
huyện Tiên Lữ (25,00%), sau là đến mẫu ở huyện Kim động (18,96%), trong mẫu ở huyện Ân Thi là thấp thất (17,64%) thấy sự có mặt của vi khuẩn
Salmonella. Tỷ lệ nhiễm Salmonella chung là 20,70%. Nguyên nhân làm cho
tỷ lệ nhiễm Salmonella cao ở Huyện Tiên Lữ là do điều kiện chăm sóc còn
kém, vịt được nuôi chủ yếu trên ao, hồ, môi trương nuôi vịt rất bẩn.
So sánh kết quả nghiên cứu của chúng tôi thu được với các nghiên cứu của các tác giả khác trong và ngoài nước thì tỷ lệ phân lập được vi khuẩn
Salmonella trên vịt tại tỉnh Hưng Yên là trung bình (20,07%), thấp hơn kết quả
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Salmonella trên vịt ở tỉnh Hà Tây cũ là 21,05% và thấp hơn so với nghiên cứu
của Trần Xuân Hạnh và cs, (1998)[18] tại Thành Phố Hồ Chí Minh là 28,3% nhưng lại cao hơn so với nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Huân và cs, (2006)[21] tại Thành Phố Hồ Chí Minh có tỷ lệ nhiễm Salmonella là 8,83% và cao hơn
nghiên cứu của Nguyễn Thị Chinh và cs, (2010)[11] tại Bắc Ninh và Bắc Giang có tỷ lệ nhiễm là 19,02%.
Sự khác biệt về tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella trên vịt ở các vùng khác nhau cũng tương tự như các nghiên cứu ở nước ngoài. Chẳng hạn, 4,6% số vịt kiểm tra và 20% số trại vịt ở Đài Loan bị nhiễm Salmonella (Tsai HJ và Hsiang pH (2005)[81]. Tỷ lệ nhiễm Salmonella ở ngan, vịt tại Anh Quốc dao động từ 1,5% (năm 2001) đến 10,5% (năm 2005).
Hiện tượng của sự khác biệt này theo chúng tôi có rất nhiều nguyên nhân, trong đó có thể do 3 nguyên nhân chính sau:
+ Do các vùng địa lý nghiên cứu khác nhau, thời điểm lấy mẫu khác nhau. + Do hiện tượng ngưng kết chéo giữa các thành viên thuộc họ vi khuẩn đường ruột hoặc hiện tượng tự ngưng kết do bảo quản kháng nguyên không tốt.
+ Do phương pháp chẩn đoán lâm sàng của người lấy mẫu và trang thiết bị kỹ thuật sử dụng để nuôi cấy, phân lập vi khuẩn của các nghiên cứu là khác nhau.
Một số vi khuẩn thường gặp ở vịt, đặc biệt là các thành viên thuộc giống Citrobacter và E.coli mà kháng thể do chúng kích thích tạo ra từ cơ thể vịt có thể gây nên hiện tượng ngưng kết chéo với kháng nguyên Salmonella
(Hồ Đình Chúc và cs, 1978)[8].
Theo tác giả William và cs (1976)[79]; Cooper và cs (1989)[57] nguyên nhân dẫn đến sự khác biệt trên là do đặc tính thích ứng giữa cơ thể vật chủ và vi khuẩn Salmonella. Trong rất nhiều trường hợp vi khuẩn chỉ cư trú ở
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
đường ruột, bị bao vây bởi các hạch lâm ba ruột và không xâm nhập vào các cơ quan nội tạng khác. Trong trường hợp trên nếu bệnh phẩm được lấy từ gan, lách, tim sẽ cho kết quả âm tính mặc dù gia cầm đang mang mầm bệnh.
Kết quả nghiên cứu này tiếp tục khẳng định vai trò của vi khuẩn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Salmonella trong bệnh Phó thương hàn của vịt. Vấn đề do Salmonella và bệnh
do chúng gây ra đã được thế giới khẳng định từ thế kỷ 18, song đến nay nó vẫn còn nguyên giá trị, thậm chí ngày càng trở lên phức tạp hơn. Bởi vậy nghiên cứu này vẫn là vấn đề cần thiết đối với mỗi quốc gia (Selbitz H-J và cs, 1995)[74].
Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella từ vịt có ý nghĩa rất quan trọng
trong chẩn đoán, cho phép xác định bệnh và có biện pháp nhanh chóng trong phòng trị bệnh do vi khuẩn Salmonella gây ra nhằm giảm thiệt hại trong chăn nuôi, đặc biệt là trong chăn nuôi vịt. Vì vịt là loài thuỷ cầm, nên trong phương thức chăn nuôi vi khuẩn Salmonella có điều kiện phát triển rất thuận lợi để
gây bệnh. Ngoài ra, những nghiên cứu về Salmonella trên vịt ở nước ta còn
chưa nhiều.
Việc tìm thấy vi khuẩn Salmonella hay không trong mẫu nghiên cứu còn phụ thuộc vào quá trình sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi vịt để phòng trị bệnh. Sử dụng kháng sinh không thích hợp, cũng như không đúng liệu trình sẽ ảnh hưởng đến quá trình lây lan cũng như thời gian thải vi khuẩn
Salmonella ở vịt.
Theo nguyên tắc chung để khống chế và phòng chống các bệnh truyền nhiễm có hiệu quả thì phải kiên quyết là chúng ta phải xác định được chính xác tác nhân gây bệnh, phải nắm được đầy đủ bản chất của mầm bệnh. Phải hiểu được tính gây bệnh của mầm bệnh theo mùa vụ trong năm đối với động vật nghiên cứu.
Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt thể hiện rõ hơn trên biểu đồ 3.1.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 18.96 25 17.64 0 5 10 15 20 25
Kim Động Tiên Lữ Ân Thi .
...
Biểu đồ 3.1: Tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt trên địa bàn nghiên cứu 3.2. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt theo mùa vụ
Mùa vụ là tác động của các điều kiện thời tiết, khí hậu mà những nhân tố cơ bản trong đó là ẩm độ, nhiệt độ môi trường, các bức xạ mặt trời... gây ra những biến đổi sinh lý không bình thường cho cơ thể động vật, dễ gây các stress, làm giảm sức đề kháng cho cơ thể, tăng khả năng mắc bệnh đặc biệt là các bệnh về đường tiêu hoá.
Từ tổng số 198 mẫu xét nghiệm được lấy 2 đợt theo hai mùa trong năm là mùa xuân-hè và thu-đông. Tiến hành so sánh tỷ lệ nhiễm Salmonella trên
vịt theo mùa vụ. Kết quả được trình bày ở bảng 3.2.
Bảng 3.2: Tỷ lệ nhiễm Salmonella theo mùa vụ trong năm
Địa điểm Xuân-Hè Thu-Đông Số mẫu kiểm tra Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) Số mẫu kiểm tra Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) H. Kim Động 35 7 20,00 23 4 17,39 H. Tiên Lữ 42 12 28,57 30 6 20,00 H. Ân Thi 39 8 20,51 29 4 13,79 Tính chung 116 27 23,27 82 14 17,07 Huyện Tỷ lệ
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Kết quả ở bảng 3.2 cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt ở mùa xuân-hè (23,27%) cao hơn so với mùa thu-đông (17,07%).
Kết quả nghiên cứu này phù hợp với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Huân và cs, (2006)[21] tỷ lệ nhiễm Salmonella trên vịt về mùa xuân-hè (12,96%)
cao hơn trong mùa thu-đông (3,95%).
Kết quả này đã chứng minh là trong mùa xuân-hè có sự biến đổi phức tạp của điều kiện ngoại cảnh, những đợt mưa xuân đầu mùa cùng với nhiệt độ môi trường tăng cao dần. Sự kết hợp của nhiệt độ môi trường cùng ẩm độ không khí là điều kiện thuận lợi cho các vi sinh vật phát triển, trong đó có các vi sinh vật gây bệnh đường ruột, đặc biệt là vi khuẩn E.coli và Salmonella. Vì vậy, trong mùa xuân-hè cần tăng cường các biện pháp phòng bệnh Phó thương hàn vịt.
Mặt khác, sự thay đổi về nhiệt độ cùng với ẩm độ môi trường là yếu tố stress gây tác động bất lợi tới cơ thể vật nuôi dễ gây ra nhiều hiện tượng bệnh lý phức tạp đặc biệt là bệnh đường tiêu hoá.
Theo Phạm Khắc Hiếu (1997)[20] khi vật nuôi thường xuyên bị tác nhân stress tác động dễ dẫn tới viêm niêm mạc ruột là điều kiện tốt cho vi khuẩn gây hại như E.coli, Salmonella cũng như nhiều loài vi khuẩn khác xâm nhập và gây bệnh.
Điều này cho thấy tầm quan trọng của công tác vệ sinh, sát trùng tiêu độc trong việc ngăn ngừa sự nhiễm các vi khuẩn nói chung và Salmonella nói riêng.
3.3. Kết quả xác định một số đặc tính nuôi cấy và đặc tính sinh hoá của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đƣợc các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đƣợc
Mỗi loài vi khuẩn có một đặc tính sinh học khác nhau như tính chất nuôi cấy trên các môi trường thông thường, môi trường đặc hiệu, đặc tính chuyển hoá các loại đường và khả năng sản sinh các hợp chất sinh học trung
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
gian trên các môi trường nuôi cấy.Trên cơ sở đó chúng tôi tiến hành giám định các chủng Salmonella phân lập được từ các mẫu nghiên cứu.
Trong quá trình nuôi cấy, các mẫu nghiên cứu được cấy trực tiếp trong các môi trường tăng sinh chọn lọc Muller Kauffmann, đồng thời kiểm tra sự di động của vi khuẩn trên môi trường thạch bán cố thể MSRV. Từ môi trường Muller Kauffmann và MSRV, các mẫu nghi ngờ là nhiễm Salmonella được cấy chuyển sang hai loại môi trường thạch chọn lọc đặc hiệu là môi trường XLT4 và Rambach, nuôi cấy trong tủ ấm 37oC sau 18-24h đọc kết quả. Kết quả được trình bày ở bảng 3.3.
Bảng 3.3: Kết quả kiểm tra một số đặc tính nuôi cấy của vi khuẩn
Salmonella phân lập đƣợc Môi trƣờng kiểm tra Số chủng Đặc tính nuôi cấy Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) Muller Kaufman 41 Mọc tốt 41 100 MSRV
41 Vi khuẩn mọc lan toả xung
quanh giọt dịch nuôi cấy. 41 100
41 Di động 41 100
Rambach 41
Khuẩn lạc dạng S, tròn, rìa gọn và có màu đỏ hoặc màu hồng cánh sen. 41 100 XLT4 41 Khuẩn lạc dạng S, tròn, rìa gọn, bề mặt hơi vồng và có màu đen. 41 100
Kết quả ở bảng 3.3 cho thấy khi nuôi cấy vi khuẩn Salmonella trên các
môi trường tăng sinh không chọn lọc và chọn lọc thì kết quả thu được là cả 41/41 (100%) chủng thử đều thể hiện đặc tính nuôi cấy điển hình của giống.
Khi nuôi cấy vi khuẩn Salmonella trong môi trường Muller Kaufman ở 37oC sau 24 giờ, vi khuẩn mọc tốt, môi trường đục đều.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Màu sắc khuẩn lạc:
Trên môi trường MSRV: 100% số chủng vi khuẩn mọc lan tỏa ra xung quanh giọt dịch nuôi cấy và 100% di động.
Trên môi trường Rambach: 100% số chủng có khuẩn lạc tròn, rìa gọn và có màu đỏ hoặc màu hồng cánh sen.
Trên môi trường XLT4: 100% số chủng có khuẩn lạc tròn, rìa gọn, bề mặt hơi vồng và có màu đen.
Như vậy, 100% (41/41) số chủng thử đều thể hiện đặc tính nuôi cấy rất điển hình.
Đặc tính sinh hoá học của vi khuẩn là một trong những nghiên cứu cơ bản, trên cơ sở có thể giám định loài vi khuẩn và thực hiện các nghiên cứu tiếp theo. Từ các mẫu Salmonella được nuôi cấy trên môi trường thạch đặc
hiệu Rambach và XLT4, lấy khuẩn lạc cấy sang môi trường Kligler để kiểm