3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
1.3.7.3. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm
Chẩn đoán vi khuẩn học:
- Phân lập vi khuẩn Salmonella trực tiếp từ phân, lách, chất chứa trong manh tràng… Phết kính nhuộm Gram rồi xem dưới kính hiển vi quan sát hình thái, tính chất bắt màu và các cấu trúc đặc biệt (lông, nha bào, giáp mô…) của vi khuẩn nếu có.
- Nuôi cấy vi khuẩn:
Nuôi cấy vào môi trường thích hợp: từ môi trường tăng sinh không chọn lọc BPW, bệnh phẩm được cấy chuyển sang môi trường tăng sinh chọn lọc MSRV (để kiểm tra sự di động của vi khuẩn Salmonella) và môi trường
Muller Kauffmann.
Đọc kết quả: trên môi trường MSRV vi khuẩn mọc lan ra xung quanh giọt canh khuẩn. Ở môi trường Muller Kauffmann hỗn dịch có thể biến đổi màu sắc.
Từ môi trường MSRV (lấy ở vị trí vi khuẩn lan xa nhất) ria cấy sang đĩa thạch Rambach, để tủ ấm 370C/18 - 24h. Khuẩn lạc Salmonella tròn trơn, nhẵn bóng, có màu đỏ hoặc hồng cánh sen. Sau đó từ ống tăng sinh Muller Kauffmann (trước khi lấy phải dùng máy lắc đều hỗn dịch trong ống) ria cấy
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
sang đĩa thạch XLT4. Cấy làm 3 đường cấy và thưa dần để tách khuẩn lạc riêng rẽ. Để tủ ấm 370
C/18 - 24h. Khuẩn lạc Salmonella tròn, bóng lồi lên trên bề mặt thạch, có màu đen.
Từ môi trường XLT4 và môi trường Rambach chọn ra khuẩn lạc điển hình kiểm tra đặc tính sinh hoá trên môi trường Kligler, ria cấy trên bề mặt thạch nghiêng và cấy chích sâu ở phần thạch đứng xuống tận đáy ống nghiệm, để tủ ấm 37o
C/18-24h, sau đó đọc kết quả:
+ Nếu phần thạch nghiêng có màu hồng: lactose âm tính. + Nếu phần thạch đứng có màu vàng: glucose dương tính. + Nếu có bọt khí: sinh hơi dương tính.
+ Nếu dọc đường cấy trích sâu có màu đen: H2S dương tính.
Những mẫu có phản ứng đặc trưng của vi khuẩn Salmonella trên môi trường Kligler (Lên men đường glucose, không lên men đường lactose, sinh hơi, H2S dương tính) được cấy kiểm tra vào: urease, LDC (nuôi cấy yếm khí) và Simmoncitrate, để tủ ấm 37o
C/18-24h đọc kết quả:
+ LDC: dung dịch từ màu tím chuyển sang màu vàng, lysine âm tính. + Simoncitrate: phần thạch nghiêng chuyển từ màu xanh lá cây sang màu xanh nước biển.
+ Ure: dung dịch có màu đỏ nhạt chuyển sang mầu hồng rất đậm, ure dương tính.
- Tiêm động vật thí nghiệm: vi khuẩn sau khi đã phân lập từ các môi trường nuôi cấy, tiến hành gây bệnh cho chuột bạch hoặc vịt con, quan sát biểu hiện triệu chứng lâm sang của động vật gây bệnh và bệnh tích rồi tiến hành so sánh với triệu chứng, bệnh tích của vịt mắc bệnh trong tự nhiên.
Chẩn đoán huyết thanh học
Phương pháp này được sử dụng trong chẩn đoán phát hiện sự có mặt của kháng thể kháng Salmonella trong máu của gia cầm mắc bệnh. Phương
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
pháp này đang được sử dụng rộng rãi ở các nước có ngành chăn nuôi gia cầm phát triển. Một số phương pháp chẩn đoán huyết thanh học được áp dụng trong chẩn đoán bệnh PTH vịt là phương pháp ngưng kết nhanh trên phiến kính (Slide Agglutination Test), phản ứng kết hợp bổ thể (Complement Fixation Test), ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Ở Việt Nam, cho đến nay vẫn chưa có tác giả nào nghiên cứu sâu về đặc tính kháng nguyên
Salmonella gây bệnh ở vịt, kháng nguyên chuẩn vẫn phải nhập từ nước ngoài.