POLYVAC là cơ sở đầu tiên, duy nhất tiến hành nghiên cứu và sản xuất VX Rota ở Việt Nam. Đây là VX được sản xuất từ chủng G1P[8] do Polyvac phân lập, tạo chủng gốc và chủng sản xuất vắc xin từ mẫu phân ký hiệu KH0118 của trẻ nữ bị tiêu chảy cấp do virut Rota phải nhập viện Đa khoa Khánh Hòa năm 2003 [11,109].
Dựa vào những đặc tính nổi trội của chủng G1P[8], Trung tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin và Sinh phẩm Y tế sử dụng chủng này sản xuất vắc xin Rotavin-M1 để phòng bệnh tiêu chảy do virut Rota tại nước ta.
Tế bào sử dụng cho sản xuất vắc xin Rotavin-M1 là tế bào Vero. Đây là loại tế bào mà virut Rota có thể nhân lên tốt và được WHO cho phép dùng sản xuất vắc xin cho người [22]. Các nguyên liệu, hóa chất và môi trường sử dụng là của các hãng nổi tiếng và có uy tín như Gibco, Merck, Sigma.
Tóm tắt hồ sơ chủng G1P[8]:[11,12]
Hồ sơ tóm tắt chủng virut Rota G1P[8] (KH0118)
Tên hệ thống chủng: Chủng virut Rota gốc týp G1P[8] (KH0118), chủng giống gốc G1P[8]-MS (KH0118), chủng sản xuất G1P[8]-WS (KH0118).
Xuất xứ:
Chủng G1P[8] (KH0118) có nguồn gốc từ mẫu phân của trẻ nữ 6 tháng tuổi vào khoa Nhi, bệnh viện đa khoa tỉnh Khánh Hòa vì tiêu chảy cấp tháng 12 năm 2003. Mẫu phân được thu thập từ dự án giám sát bệnh tiêu chảy do virut Rota năm 2003-2004 của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) do GS. TSKH. Nguyễn Văn Mẫn làm chủ nhiệm dự án.
Trung tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin và Sinh phẩm Y tế đã xét nghiệm mẫu phân bằng phương pháp EIA cho kết quả dương tính với virut Rota, và xác định týp gây bệnh là týp G1P[8] bằng phương pháp RT-PCR. Sau đó mẫu phân được xử lý theo qui trình của phòng thí nghiệm virut đường ruột của Trung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa bệnh tật CDC-Atlantta- Hoa Kỳ để sử dụng cho tạo chủng virut Rota gốc týp G1P[8].
Hình 1.4. Hình ảnh hạt virut Rota G1P [8] dưới kính hiển vi điện tử tại lần cấy truyền thứ 30 trên tế bào thận khỉ tiên phát chụp dưới kính hiển vi điện tử -
Qui trình tạo chủng virut Rota gốc G1P[8] (KH0118); qui trình sản xuất vắc xin rotavin M1 và các thử nghiệm kiểm tra chất lượng [19,67,109].
Qui trình tạo chủng virut Rota gốc
G1P[8] Các thử nghiệm kiểm tra chất lượng
Mẫu phân KH0118 Định týp bằng phương pháp RT-PCR
Phân lập trên MA104 (3 lần liên tiếp)
Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
Tách dòng, chọn lọc dòng trên hỗn dịch tế bào MA104 (1 lần)
Nhân dòng trên hỗn dịch MA104 (3 lần liên tiếp)
Thích nghi dòng trên MA104 một lớp (1 lần)
Thích nghi dòng trên tế bào thận khỉ tiên phát
(3 lần liên tiếp)
Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
Cấy truyền dòng trên tế bào thận khỉ tiên phát
Qui trình tạo chủng virut Rota gốc
G1P[8] Các thử nghiệm kiểm tra chất lượng
Thích nghi dòng trên tế bào vero một lớp
(3 lần liên tiếp)
-Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
-Chuẩn độ hiệu giá virut Rota bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang Cấy truyền dòng trên tế bào vero 1 lớp
(13 lần liên tiếp)
Cấy truyền dòng trên tế bào thận khỉ tiên phát
(3 lần liên tiếp)
-Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
-Chuẩn độ hiệu giá virut Rota bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang Cấy truyền dòng trên tế bào vero một
lớp (8 lần liên tiếp)
-Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
-Chuẩn độ hiệu giá virut Rota bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang -Thử nghiệm nhận dạng bằng RT- PCR - Xác định trình tự gen Tinh sạch dòng, chọn lọc dòng trên tế bào vero (2 lần liên tiếp) Chủng virut Rota gốc G1P[8](KH0118)
Xác định sự nhân lên của virut (chỉ số OD) bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán Rotaclone (EIA)
Qui trình tạo chủng virut Rota gốc
G1P[8] Các thử nghiệm kiểm tra chất lượng
Tạo chủng giống gốc (Virus Master Seed)
G1P[8] MS
Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giới TRS 941
2007
Tạo chủng sản xuất (Virus Working Seed)
G1P[8] WS
Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giới TRS 941
2007
Nuôi cấy tế bào Vero Kiểm tra chất lượng tế bào
Gây nhiễm virut Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức y tế thế giới
Hỗn dịch virut Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức y tế thế giới
Lọc vô trùng Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức y tế thế giới
Vắc xin bán thành phẩm Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức y tế thế giới
Vắc xin thành phẩm Kiểm định chất lượng theo hướng dẫn của Tổ chức y tế thế giới